한국 성인형 치주염 환자의 치주낭 내 세균분포에 관한 암시야현미경적 연구 Darkfield microscopic study of the bacterial morphotypes in the periodontal pockets of Korean adult periodontitis patients원문보기
The purpose of this study was to evaluate the difference of subgingival bacterial compositions between periodontally healthy and diseased sites. Subgingival plaque samples were obtained from 100 sites in 20 untreated adult periodontitis patients(experimental group), and 100 sites in healthy individu...
The purpose of this study was to evaluate the difference of subgingival bacterial compositions between periodontally healthy and diseased sites. Subgingival plaque samples were obtained from 100 sites in 20 untreated adult periodontitis patients(experimental group), and 100 sites in healthy individuals(contro1 group). Before sampling, probing pocket depth(PPD) and clinical level of attachment(CAL), Plaque Index(PI), and Sulcus Bleeding Index(SBI) were recorded for each sampled sites. Microbial samples were collected from the bases of gingival sulci or periodontal pockets with sterile curettes. The samples were examined under darkfield microscope(${\times}$400). At least 150 bacteria were evaluated and categorized on the basis of bacterial morphology and motility, i.e. cocci, non-motile rods, motile rods, and spirochetes. In control group, subgingival microbial flora consisted of 73.7% of cocci, 20.0% of non-motile rods, 4.3% of motile rods, and 2.0% of spirochetes. The microbial samples from experimental group consisted of 51.5% of cocci, 19.4% of non-motile rods, 17.6% of motile rods, and 11.6% of spirochetes. The proportion of cocci was higher in control group than in experimental group. Proportions of motile rods and spirochetes were higher in experimental group than in control group. The proportion of nonmotile rods in experimental group and control group was not significantly different. Sulcus Bleeding Index and Plaque Index showed high correlation with the bacterial composition. These findings suggests that examination of subgingival bacterial proportion may serve as more sensitive mirror of the local periodontal status than clinical parameters.
The purpose of this study was to evaluate the difference of subgingival bacterial compositions between periodontally healthy and diseased sites. Subgingival plaque samples were obtained from 100 sites in 20 untreated adult periodontitis patients(experimental group), and 100 sites in healthy individuals(contro1 group). Before sampling, probing pocket depth(PPD) and clinical level of attachment(CAL), Plaque Index(PI), and Sulcus Bleeding Index(SBI) were recorded for each sampled sites. Microbial samples were collected from the bases of gingival sulci or periodontal pockets with sterile curettes. The samples were examined under darkfield microscope(${\times}$400). At least 150 bacteria were evaluated and categorized on the basis of bacterial morphology and motility, i.e. cocci, non-motile rods, motile rods, and spirochetes. In control group, subgingival microbial flora consisted of 73.7% of cocci, 20.0% of non-motile rods, 4.3% of motile rods, and 2.0% of spirochetes. The microbial samples from experimental group consisted of 51.5% of cocci, 19.4% of non-motile rods, 17.6% of motile rods, and 11.6% of spirochetes. The proportion of cocci was higher in control group than in experimental group. Proportions of motile rods and spirochetes were higher in experimental group than in control group. The proportion of nonmotile rods in experimental group and control group was not significantly different. Sulcus Bleeding Index and Plaque Index showed high correlation with the bacterial composition. These findings suggests that examination of subgingival bacterial proportion may serve as more sensitive mirror of the local periodontal status than clinical parameters.
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문제 정의
이 연구에서는 임상에서 간편하게 적용할 수 있는 암시야 현미경을 사용하여 건강한 치주조직과 치주염에 이환된 치주조직의 치은연하치태 세균 조성의 차이를 확인하고, 세균조성과 임상지수와의 상관관계를 밝혀 치주질환의 활성도의 추정에 있어서 임상지수와 치주낭 내 세균정보의 유용성을 평가하고자 하였다.
제안 방법
건강한 치주조직과 치주염에 이환된 치주조직 사이의 치은연하 세균구성의 차이와 이에 따른 임상지수와의 상관관계를 평가하기 위하여, 치은연하치태의 세균을 채취하여 암시야 현미경하에서 구균, 비운동성간균, 운동성간균, 나선균으로 분류, 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
검사하였다. 세균을 형태와 운동성에 따라 구균(cocci), 비운동성간균(nonmotile rods), 운동성간균(motile rods), 나선균(spirochetes)으로 분류m하여 관찰한 후 관찰된 세균의 수를 전체의 세균수로 나누어 각각의 비율을 백분율화하였다.
표본채취의 위 치도 중요할 것으로 보이는데, Oniar 등2力은 치주낭의 기저부에 가까운 부위에서 채취할수록 더 정확한 결과를 얻을 수 있다고 하였다. 우리의 실험에서는 큐렛을 가능한 한 치주낭 기저부까지 삽입하여 표본을 채취하였으며, 현미경으로 관찰할 때 격자를 사용하여 오차를 줄이고자 하였다. 이렇듯 각각의 연구 결과 사이에 차이가 나는 것은 표본채취 방법과 세균판독 방법 등의 차이에서 기인한다고 생각되는데, 이러한 연구결과들이 보편적으로 인정되기 위해서는 표준화된 연구방법이 마련되어야 할 것으로 보인다.
이렇게 제작된 한 슬라이드에서 임의로 세 부분을 선택하여 400배의 암시야 현미경(Axioskop2, Zeiss, Germany)으로 격 자 (Net micrometer, Zeiss, Germany)하에서 검사하였다. 세균을 형태와 운동성에 따라 구균(cocci), 비운동성간균(nonmotile rods), 운동성간균(motile rods), 나선균(spirochetes)으로 분류m하여 관찰한 후 관찰된 세균의 수를 전체의 세균수로 나누어 각각의 비율을 백분율화하였다.
채취된 치태를 0.9% 생리식염수0.2湖가 들어있는 시험관에 옮긴 후 Voitex에서 20초간 혼합, 균일화하였다. 균일화된 희석용액을 일회용 23gauge 주사기로 흡입하여 슬라이드 글라스에 한 방울 떨어뜨린 후 커버 글라스를 덮고, 유동성을 막기 위해 거즈로 압박하였다.
치은연하치태의 세균이 치은연상치태의 세균에 의해 오염되는 것을 방지하기 위해7)검사하고자 하는 부위의 치은연상치태를 소독된 면봉으로 제거한 후 큐렛을 치주낭 기저부까지 삽입하여 치은연하치태를 채취하였다.
대상 데이터
대조군으로는 강릉대학교 치과대학 학생 중 전신질환이 없으며, 치주상태가 건강한 20명을 대상으로 하였으며, 연령분포는 24~30세로, 평균연령은 25.95세였다
실험군으로는 강룽대학교 치과병원 치주과에 내원하여 성인형 치주염으로 진단된项 환자 중 치주염의 진행 에 영향을 줄 수 있는 전신질환이 없으며 구강 내 잔존치아수가 최소 20개 이상인 경우를 선택하였다. 이들 중 최근 6개월 이내에 치주치료를 받았거나, 항생제나 호르몬제를 복용한 기왕력이 있는 경우, 구강양치액을 사용하는 경우, 임산부 또는 분만 후 3개월 이내인 경우는 실험대상에서 제외하였다.
이들 중 최근 6개월 이내에 치주치료를 받았거나, 항생제나 호르몬제를 복용한 기왕력이 있는 경우, 구강양치액을 사용하는 경우, 임산부 또는 분만 후 3개월 이내인 경우는 실험대상에서 제외하였다. 이렇게 선택된 20명의 환자에서 치주낭의 깊이가 4mm 이상이며 방사선상 치조골 소실이 전체 치근 길이의 1/4 이상인 치아 5개를 임의로 선택하였다. 실험군 환자의 연령분포는 37~64세로, 평균연령은 48.
데이터처리
대조군과 실험군에서 세균비율의 차이와 치주낭 깊이, 부착수준, 치은열구출혈지수, 치태지수와 각 세균간의 상관관계 및 통계학적 유의성을 검증하기 위해 Student t-test, Pearson correlation coefficient 및 One-way ANOVA를 적용하였다. 통계 프로그램은 SPSS/PC+9.
성능/효과
1. 건강한 치아의 치은연하 치태(대조군)에서는 구균, 비운동성간균 운동성간균, 나선균이 각각 73.7%, 20%, 4.3%, 2%의 비율을 나타냈다.
2. 치주염에 이환된 치아의 치은연하치태(실험군)에서는 구균, 비운동성간균 운동성간균, 나선균이 각각 51.5%, 19.4%, 17.6%, 11.6%의 비율을 보였다.
3. 구균은 실헙군에 비해 대조군에서 높은 비율로 나타났으며, 운동성간균과 나선균은 대조군에 비해 실험군에서 높은 비율로 나타났고, 비운동성간균의 비율은 실험군과 대조군에서 차이를 보이지 않았다.
4. 치은열구지수와 구균, 운동성간균, 나선균 및 운동성세균(운동성간균 + 나선균)의 구성비율 사이 에는 높은 상관관계가 나타났다.
5. 치태지수와 구균, 운동성간균, 나선균 및 운동성세균(운동성간균 + 나선균)의 구성비율 사이에는 높은 상관관계가 나타났다.
구균, 운동성간균, 나선균은 대조군과 실험군 사이에 유의성 있는 비율의 차이를 보였지만(p0.05)(Table 2, Figure 2).
대조군에서는 운동성 세균(운동성간균+나선균)의 비율이 6.3%를 보였으며, 실험군에서는 29.2%로서 유의성 있는 차이를 나타내었다<p<0.01)(Table 3, Figure 3).
43%씩 증가한다고 주장하였다. 이번 연구에 따르면 비운동성간균을 제외한 나머지 세균들에서는 실험군과 대조군 사이에서 유의성 있는 차이를 보였으며, 비운동성간균을 제외한 세균들에서 치주낭깊이 , 부착상실, 치은열구출혈지수, 치태지수와 높은 상관관계를 나타내어 위의 주장과 일치하는 결과를 보였다.
우리의 실험에서는 큐렛을 가능한 한 치주낭 기저부까지 삽입하여 표본을 채취하였으며, 현미경으로 관찰할 때 격자를 사용하여 오차를 줄이고자 하였다. 이렇듯 각각의 연구 결과 사이에 차이가 나는 것은 표본채취 방법과 세균판독 방법 등의 차이에서 기인한다고 생각되는데, 이러한 연구결과들이 보편적으로 인정되기 위해서는 표준화된 연구방법이 마련되어야 할 것으로 보인다.
활성도를 추정하기 위해서는 질환의 일차적 원인인 치주낭 내 세균에 대해 접근하는 것이 타당하다고 생각되며, 치주낭 내 세균을 크게 비운동성세균과 운동성세균으로 이분화 하여 관찰하는 것도 간편하고 유용한 분류법이 될 것으로 사료된다. 치주염의 진단과 치료계획 수립, 그리고 유지관리의 단계에서 세균에 대한 정보를 얻기 위하여 암시야 현미경을 이용하는 방법은 임상에서 비교적 쉽게 응용할 수 있을 것으로 생각된다. 암시야 현미경을 이용한 세균관찰법은 시간, 비용, 간편성 등의 면에서 장점을 가지지만 표본의 채취과정 및 관찰자의 주관성에 의존하는 정도가 크다는 문제점이 있다.
암시야 현미경을 이용한 세균관찰법은 시간, 비용, 간편성 등의 면에서 장점을 가지지만 표본의 채취과정 및 관찰자의 주관성에 의존하는 정도가 크다는 문제점이 있다. 향후 이러한 문제점을 개선하기 위한 지속적인 연구가 필요할 것으로 보인다.
보인다. 활성도를 추정하기 위해서는 질환의 일차적 원인인 치주낭 내 세균에 대해 접근하는 것이 타당하다고 생각되며, 치주낭 내 세균을 크게 비운동성세균과 운동성세균으로 이분화 하여 관찰하는 것도 간편하고 유용한 분류법이 될 것으로 사료된다. 치주염의 진단과 치료계획 수립, 그리고 유지관리의 단계에서 세균에 대한 정보를 얻기 위하여 암시야 현미경을 이용하는 방법은 임상에서 비교적 쉽게 응용할 수 있을 것으로 생각된다.
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