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제안 방법
- HPLC - 오수유탕을 조제하기 위하여 가온할 때 오수유 알칼로이드의 변화를 검토하기 위하여 알칼로이드와 오수 유에서 분리한 알칼로이드를 이동상에 녹인 후 HPLC의 조 건(2)으로 조작하여 분리되는 크로마토그램의 유지시간을 비 교하였다.
- 7 mg을 시료병에 넣고 알칼로 이드 10 mg을 가하여 정 량법에 따라 조작하였다. 같은 방법으로 3회 조작하여 오수유탕에 첨가한 알칼로이드 10 mg 의 회수율을 검토하였다.
- 7mg을 시료병에 넣고 정 량법에 따라 조작하여 알칼로이드를 정량하였다. 같은 방법으로 오수유탕 중 알칼로이드를 3회 정량하여 설정한 정량 법의 정확도와 정밀도를 확인하였다.
- 극대흡수파장 - 오수유탕과 오수유을 취하여 정 량법에 따라 조작한 후 500-700 nme 파장변화에 따른 극대흡수 파장을 측정하였다.
- 추출 및 경시변화 - 오수유탕에 TCR을 넣어 수용액에 생성된 알칼로이드의 착 화합물을 유기용매로 전용하기 위하여 DCE, chloroform, benzene, methylisobutylketone,ether 일정 량씩을 넣고 추출한 후 흡광도를 측정하였다. 또한 수용액에 Clark-Lubs, Mcllvaine, Sfprensen 완충액을 넣 어 pH 3.0-7.0 범위에서 알칼로이드 착 화합물의 추출과 추 출된 착 화합물의 안정성을 확인하였고 극대흡수파장을 측정한 착 화합물의 chloroform과 DCE 용액을 실온에 방치 하면서 경시변화를 확인하였다.
- 재료 및 시약 - 오수유와 기타의 생약은 전북 남원시에서 시판되고 있는 것을 구입하여 공동실험자인 임종필 교 수님과 김대근 교수님이 감정한 것을 사용하였다. 백삼 1.00 g, 생강 2.00 g, 대추 1.33 g을 혼합한 후 세말로 만들어(4.33 g) 제습기에 보관하면서 시료량을 취할 때마다 세말 4.33 g 에 오수유 L33g의 비로 첨가하여 사용하였다(오수유탕이근} 함). Cobaltous nitrate, ammonium thiocyanate는 Sigma Co.
- 정량법 - 일정량(일칼로이드로 3.5~5.0mg)의 오수유탕을 달아 시료병 에 넣고 0.1 mM HC1 3 ml, PHP 5 ml, TCR 2 ml 및 DCE 10 ml를 가하여 60분 동안 흔들었다. 잠시 방 치하여 분리된 DCE를 취한 후 3분 동안 원심분리하고 625 nm의 극대흡수파장에서 흡광도를 측정하여 검량선의 회귀식 y = 0.
- 추출 및 경시변화 - 오수유탕에 TCR을 넣어 수용액에 생성된 알칼로이드의 착 화합물을 유기용매로 전용하기 위하여 DCE, chloroform, benzene, methylisobutylketone,ether 일정 량씩을 넣고 추출한 후 흡광도를 측정하였다. 또한 수용액에 Clark-Lubs, Mcllvaine, Sfprensen 완충액을 넣 어 pH 3.
대상 데이터
- 2와 같이 625 nm와 660 nm에서 극대흡수파장을 보였으며 오수유탕을 제조하기 위한 20분 동안의 가 온으로 극대흡수파장의 변화가 없었다. 그러나 오수유탕에서 660 nm의 극대흡수파장의 흡광도가 적어 정 량법의 극대 흡수파장을 625 nm로 선택하였다.
- 기기 — Spectronic 20D+(Milton Roy Co.), UV/Visible spectrophotometer (Shimadzu UV-1601), HPLC(Shimadzu Class LC 10), pump(dual LC 10 AT), column oven(CTO 10 A), detector(UV-Vis detector, SPD 10 A), integrator (communications bus module CBM 10 A)를 사용하였다.
- 재료 및 시약 - 오수유와 기타의 생약은 전북 남원시에서 시판되고 있는 것을 구입하여 공동실험자인 임종필 교 수님과 김대근 교수님이 감정한 것을 사용하였다. 백삼 1.
이론/모형
- 추출 및 경시변화 - 수용액에 생성된 알칼로이드 착 화 합물의 추출용매는 DCE, chloroform이 양호하였다. 따라서 추출용매로 오수유탕 중 알칼로이드는 chloroform을, 그리고 정 량법은 DCE를 사용하였다. benzenee 흡광도가 현저 히 적었으며 methylisobutylketone과 ethere TCR도 전용되어 쓸 수 없었다.
- 오수유탕을 제조할 때 가온에 의한 오수유 알칼로이드의 변화가 없음을 HPLC 법으로 확인하였으며 분리한 오수유 알칼로이드를 표준품으로 오수유탕 중 알칼로이드를 흡광 도측정법으로 정량하였다. 재현성시험은 오수유 중 알칼로 이드의 평균함량이 14.
- 재현성 시험 - 오수유탕 1276.7mg을 시료병에 넣고 정 량법에 따라 조작하여 알칼로이드를 정량하였다. 같은 방법으로 오수유탕 중 알칼로이드를 3회 정량하여 설정한 정량 법의 정확도와 정밀도를 확인하였다.
- 회수시험 - 오수유탕 1276.7 mg을 시료병에 넣고 알칼로 이드 10 mg을 가하여 정 량법에 따라 조작하였다. 같은 방법으로 3회 조작하여 오수유탕에 첨가한 알칼로이드 10 mg 의 회수율을 검토하였다.
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