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문제 정의
- 지금까지 식용으로만 사용되어온 해조류의 성분 분석, 항산화력에 대한 연구는 일반적으로 되어 있으나 해조류의 암세포에 대한 독성 효과나 암 예방 효과 등의 항 발암효과 연구는 아직 연구가 미비한 상태이므로 본 연구를 시도하게 되었다. 본 연구는 바다의 우수 식용 자원인 모자반의 in 房Ztp에서 의 암세포 주에 대한 암세포 독 성효과, QR 유도 암예방효과 및 DPPH 소거 기능 등을 측정해 보았다.
- 이와 같은 결과는 Park 등(25)이 식용해 조류를 이용하여 항산화력을 측정한 연구에서와같이 methanol 분획 층에서 강한 항산화 활성을 나타내었다는 결과와 유사하다. 즉 이와 같은 결과는 methanol과 같은 극성 용매(SFMM)에서 분리된 시료에서 항산화 활성이 높게 나타난 Ramos 등(26)의 실험 결과에서도 일치하며 DPPH소거능 측정은 DNA 손상을 억제하는 활성 물질이 in u泊'o에서의 항 발암 효과와의 연계가 있음을 다시 확인하는 계기가 되었으며 계속 상관관계를 규명하고자 한다.
- 이 해조류는 항 혈 액응고 활성을 가진 fucoidan을 함 유하고 있으며 혈액 응고를 저지하는 thrombin의 활성을 억제하는 것으로도 알려져 있다. 지금까지 식용으로만 사용되어온 해조류의 성분 분석, 항산화력에 대한 연구는 일반적으로 되어 있으나 해조류의 암세포에 대한 독성 효과나 암 예방 효과 등의 항 발암효과 연구는 아직 연구가 미비한 상태이므로 본 연구를 시도하게 되었다. 본 연구는 바다의 우수 식용 자원인 모자반의 in 房Ztp에서 의 암세포 주에 대한 암세포 독 성효과, QR 유도 암예방효과 및 DPPH 소거 기능 등을 측정해 보았다.
제안 방법
- 모자반의 methanol 추출물과 일반적으로 잘 알려진 항산화제인 BHT와 Vit. C를 대조군으로 하여 DPPH radical 소거 능 즉, 수소 공여 능을 측정하여 보았다.
- DPPH (1, 1 - diphenyl -picryl hydrazyl) radical 소거 활성 효과는 Blois의 방법을 변형하여 사용하였匸+(23). 100 ppm 농도의 모자반의 추출물 및 분획물과 널리 알려져 있는 항산 화제인 Vit.
- 2 mM DPPH 40 UL를 첨가하여 vortex로 균일하게 혼합한 다음 실온의 암실에서 30분간 방치한 후, Multi-detection micropla坨로 520 nm에서 홉 광도를 측정하였다. DPPH radical 소거율 측정은 다음과 같이 electron donating activity(EDA, %)로 구하여 계산하였다.
- QR 생성 유도 효과는 Prochaska와 Santamaria(21)-^1 방법을 일부 변형하여 측정하였다. T-75 flask의 세포가 80% 이 상 증식하게 되 면 24 well plate의 각 well에 ixiO, cells/ mL 되도록 HepG2세포주를 분주하여, incubator에 24시 간동 안 배양한 후 모자반 분획물을 각각 DMSO에 녹여 25, 50, 75 및 100 lig/mL의 농도로 첨가하고 다시 24시간 동안 배양한 다음 배양액을 제거하였다.
- QR 생성 유도 효과는 Prochaska와 Santamaria(21)-^1 방법을 일부 변형하여 측정하였다. T-75 flask의 세포가 80% 이 상 증식하게 되 면 24 well plate의 각 well에 ixiO, cells/ mL 되도록 HepG2세포주를 분주하여, incubator에 24시 간동 안 배양한 후 모자반 분획물을 각각 DMSO에 녹여 25, 50, 75 및 100 lig/mL의 농도로 첨가하고 다시 24시간 동안 배양한 다음 배양액을 제거하였다. 배지가 제거된 각 well에 250 HL의 lysis bufferdO mM Tris-Cl, pH 8.
- 48시간 배양 후 각 well에 PBS 완충액에 녹인 MTT 용액을 100 卩L씩 첨가하여 4시간 동안 다시 배양시킨 후, well 바닥에 형성된 formazan이 홑어 지지 않게 상등액을 제거하고 DMSO와 ethanol을 1 : 1로 혼합한 용액 1 mL를 첨가하여 천천히 녹인 후 Multi-detection microplate를 이용하여 570 nm, 690 nm에서 측정하였다. 대조군 세포 수를 100%로 정 하고 상대적인 암세포독성 효 과율을 구하였다.
- 모자반 추출물의 항 발암효과와 관련한 여러 인자의 상관성을 살펴보기 위하여 DPPH radical을 이 용한 DPPH소거 능을 측정하였다(Table 2). 모자반의 methanol 추출물과 일반적으로 잘 알려진 항산화제인 BHT와 Vit.
- 56배의 QR 유도 활성효과를 나타내었다. 모자반의 DPPH rad ical 소거능을 실험하였으며 모자반의 메탄올 추출물의 DPPH 소거능 결과는 대조군인 항산화제인 BHT와 VitC의 결과와 유사하였다. 본 실험의 결과로 모자반은 메탄올 추출물 속에 DPPH 소거능을 가진 물질이 존재하고 있으며 이 결과는 모자반의 in vitro 항발암 활성을 설명하는 데 그 기초배경이 될 수 있다.
- T-75 flask의 세포가 80% 이 상 증식하게 되 면 24 well plate의 각 well에 ixiO, cells/ mL 되도록 HepG2세포주를 분주하여, incubator에 24시 간동 안 배양한 후 모자반 분획물을 각각 DMSO에 녹여 25, 50, 75 및 100 lig/mL의 농도로 첨가하고 다시 24시간 동안 배양한 다음 배양액을 제거하였다. 배지가 제거된 각 well에 250 HL의 lysis bufferdO mM Tris-Cl, pH 8.0, 14 mM NaCl, 15 mM MgCl-2, 0.5% NP-40X 첨가한 후 37°C, 5% CO2 incu- bator에 10분간 두면서 cell을 lysis 한 후 reaction mixture 즉, 10 mM Tris-CKpH 7.4), 0.5 mg/mL BSA, 0.008% tween- 20, 40 UM FAD, 0.8 mM glucose-6-phosphate, 2 U/mL glucose-6-phosphate dehydrogenase, 25 pM NADP, 40 pg/ mL MTT 및 1 mM menadione을 혼합하여 각 w이 1 에 1 mL 씩 첨가하여 5분 동안 반응시킨 후, 반응 정지용액인 10.3 mM dicumarol, 0.5% pyridine, 5 mM potassium phosphate (pH 7.4) 혼합액을 250 卩L씩 첨가하여 효소 반응을 정지시키고 Multi-detection microplate 를 이용하여 610 nm 에서 흡광도를 측정하여 계산하였다. 그리 고 단백 질 량은 동일한 set의 w이1 plate에 대한 crystal violet 염색 방법으로 정 량하였 다.
- 본 실험에서는 암세포 3종과 정상 세포를 이용하여 각 시료를 첨가시켰을 때의 MTT assay를 이용하여 암세포 독성 효과를 보았으며, 사용한 암세포는 자궁경부암 세 포인 HeLa, 결장암 세포인 HT29 및 간암 세포주인 HepG2를 사용하였고, 정 상세 포는 간세포를 사용하여 그 효과를 비교 검토하였다.
- , USA)에서 구입하였으며, 그 외 연구에 사용된 용매 및 시 약은 특급을 사용하였다. 시료의 추출 및 분획물 제조 : 시료로 사용된 모자반은 건조 후 분말화하고 메탄올과 1 : 5(w/v)이 되게 하여 37°C에 서 진탕한 후 4시간 동안 3회 반복 추 줄하고 회 전식 진공 농축기로 감압 농축시킨 후 동결 건조하여 모자반의 methanol 추출물(SFM)을 얻었으며 이 추출물을 각 용매별로 분획하여 hexane층(SFMH), ethylether층(SFMEE), ethylacetate 층(SFMEA), butanol층(SFMB) 및 수층 분획물(SFMA)로 각각 분획하고 각 층을 감압 농축 후 동결 건조하여 분말로 만들어 시료로 사용하였다.
- 식용 해조류의 일종인 모자반을 추출, 분획하여 in 에 서의 항발암 효과를 실험하였다. 모자반을 추출, 분획하여 3종의 암세포주(HepG2, HT-29, HeLa)를 이용하여 암세포 독성 효과를 본 결과, 모자반의 ethylether 분획층(3FMEE)과 ethylacetate 분획층(SFMEA)에서 3종의 사용 암 세포주 인 HepG2, HT29 및 HeLa 모두 아주 높은 cytotoxicity를 보였으며, HT29오]" HeLa에서는 mathanol 추출물(SFM)과 hex ane 분획 층(SFMH)에 서 도 유의적인 암세포 독성 효과를 나타내었匸卜.
- 위 4종의 세포주는 일주일에 2〜3회 정도 새로운 배지로 교환하고 flask에 암세포가 5X104 cells/mL 정도 증식 되 면 phosphate buffered saline(PBS, pH 7.0)으로 2번 세척한 후 trypsin-EDTA를 처 리하여 바닥에서 세포를 분리한 후, 배 양액으로 암세포가 골고루 분산되도록 희석하여 T-75 flask에 10mL씩 분할하여 주입하고 4〜5일마다 계대배양 하면서 실험에 사용하였다. 계대 배양시 각각의 passage number^l- 10회 이상일 때는 액체질소 탱크로부터 새로운 세포를 꺼내 어 다시 배양하여 실험하였다.
- 본 실험에 사용된 모자반(Sargassum fuluellum, SF)은 2003년 10월 완도산을 구입하여 음건하였다. 이 시료를 추출, 분획하여 3종의 암세포 주에 대한 암세포 증식억제 효과(cytotoxicity)와 quinone reductase(QR) 유도 활성 물질을 검색함으로써 in vitro 항암활성 연구를 하였다.
- 이를 위해 각 세 포주를 1 X105 celis/well의 농도로 맞추고 24 w이1에 각각 1 匝씩 첨가하여 24시간 동안 37°C, 5% CO2 incubator에 배양한 후 용매 종류별 분획물을 각각 일정량의 dimethyl sulfoxide(DMSO)에 녹여서 100, 200, 300, 400 및 500 Hg/mL의 농도로 첨가하였다. 48시간 배양 후 각 well에 PBS 완충액에 녹인 MTT 용액을 100 卩L씩 첨가하여 4시간 동안 다시 배양시킨 후, well 바닥에 형성된 formazan이 홑어 지지 않게 상등액을 제거하고 DMSO와 ethanol을 1 : 1로 혼합한 용액 1 mL를 첨가하여 천천히 녹인 후 Multi-detection microplate를 이용하여 570 nm, 690 nm에서 측정하였다.
- 해조류로서 식용으로 애용되고 있는 모자반(SF)에 메탄 올 1 : 5로 3회 추출하여 분획 물(SFM)을 얻고, 이 추출물을 hexane(SFMH), ethylether(SFEE), ethylacetate(SFEA), bu- tanol(SFMB) 및 수층(SFMA)의 용매별로 분획하였으며, 각 시료의 용매별 추출물 및 분획물의 수율은 Table 1과 같다.
대상 데이터
- 본 실험에 사용된 모자반(Sargassum fuluellum, SF)은 2003년 10월 완도산을 구입하여 음건하였다. 이 시료를 추출, 분획하여 3종의 암세포 주에 대한 암세포 증식억제 효과(cytotoxicity)와 quinone reductase(QR) 유도 활성 물질을 검색함으로써 in vitro 항암활성 연구를 하였다.
- 본 실험에 사용한 암세포 주는 인체 간암 세포인 HepG2 (human hepatocellular carcinoma), 자궁경부암 세포인 HeLa (human cervicse adenocarcinoma) 및 대장암 세포인 HT- 29(human colon adenocarcinoma)로서 2003년 3월 한국 세포 주 은행(Korean cell bank, KCLB)에서 구입 하였으며, 정상 세포는 liver normal cell을 배양하여 사용하였다. HT-29, HepG2 HeLa오} 정상 세포주는 DMEM medium에 10%의 fetal bovine serum(FBS) 와 1% 100 units/mL의 penicillin streptomycin0] 함유된 것으로 T-75 flask에 이식한 후, 37 °C 5% CO? incubator에서 monolayer로 배양하였다.
- 시약 : 세포실험에 사용된 시약 중 NP-40과 menadione은 Sigma사 제품을 구입 하였고 flavin adenine dinucleotide (FAD), dicumarol 및 glucose-6 phosphate dehydrogenase는 Amresco사 제품을 구입하였으며, minimum essential medium (MEM), Dulbeco's Eagle modified medium(DM- EM)과 phosphate buffered saline(PBS) 등은 Gibco - BRL (USAJ에서 구입하였으며, 그 외 연구에 사용된 용매 및 시약은 특급 또는 일급을 사용하였다.
- 실험기기 : 암세포 배양을 위해 사용한 실험기기는 CO2 incubator(Forma scientific 3546, USA), Clean bench(Vision Scientific Co., LTD., VS-1400LS), Rotary evaporator(Tokyo rikakikai Co., LTD., NN10522423, Japan), Microscopy(Leica Mikroskopie & systeme Gembhy Wetzlas 520802, Germa ny), Deep freezer(Ilsin Enginering Co., DF 9071) 및 Multi- detection microplate(BIO-TEK, synergy HT) 등이었다.
- 암세 포 증식 억제 실험에 사용된 시 약 중 NP-40고卜 mena- dione은 Sigma사(St. Louis, USA) 제품을 사용하였고 flavin adenine dinucleotide(FAD), dicumarol 및 glucose-6-phos- phate dehydrogenase는 Amresco사(USA)에서, minimum essential medium (MEM), dulbeco's Eagle modified medium (DMEM) 과 phosphate buffered saline(PBS) 등은 Gibco- BRL(Grand Island Biologic Co., USA)에서 구입하였으며, 그 외 연구에 사용된 용매 및 시 약은 특급을 사용하였다. 시료의 추출 및 분획물 제조 : 시료로 사용된 모자반은 건조 후 분말화하고 메탄올과 1 : 5(w/v)이 되게 하여 37°C에 서 진탕한 후 4시간 동안 3회 반복 추 줄하고 회 전식 진공 농축기로 감압 농축시킨 후 동결 건조하여 모자반의 methanol 추출물(SFM)을 얻었으며 이 추출물을 각 용매별로 분획하여 hexane층(SFMH), ethylether층(SFMEE), ethylacetate 층(SFMEA), butanol층(SFMB) 및 수층 분획물(SFMA)로 각각 분획하고 각 층을 감압 농축 후 동결 건조하여 분말로 만들어 시료로 사용하였다.
데이터처리
- 대조군과 각 시료들로부터 얻은 실험 결과들은 Student's t-test를 이용하여 유의성을 검증하였다.
이론/모형
- Free radical scavenging activity of the partition layer of SFM measured using the DPPH assay.
- 모자반 추출 분획물의 암세포 독성 효과는 3-(4, 5-dime- thylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide(MTT assay)를 사용하여 행하였다(20). MTT assay는 세포의 생육을 측정하는 방법으로서 살아있는 세포의 미토콘드리아 내의 dehydrogenase가 황색 수용성 물질인 MTT에 의해 dark blue formazan을 생성하는 원리를 이용한다.
성능/효과
- 식용 해조류의 일종인 모자반을 추출, 분획하여 in 에 서의 항발암 효과를 실험하였다. 모자반을 추출, 분획하여 3종의 암세포주(HepG2, HT-29, HeLa)를 이용하여 암세포 독성 효과를 본 결과, 모자반의 ethylether 분획층(3FMEE)과 ethylacetate 분획층(SFMEA)에서 3종의 사용 암 세포주 인 HepG2, HT29 및 HeLa 모두 아주 높은 cytotoxicity를 보였으며, HT29오]" HeLa에서는 mathanol 추출물(SFM)과 hex ane 분획 층(SFMH)에 서 도 유의적인 암세포 독성 효과를 나타내었匸卜. 정상세포인 liver세포는 모자반의 모든 용매분획 층에서 암세포 독성 효과가 낮게 나타났다.
- SFMEE층의 경우 시료 농도가 100 Ug/mL을 첨가했을 때 이미 92%의 높은 암세포 독성 효과를 보였으며 농도가 증가할수록 증식 억제 효과는 그대로 유지 되 다가 400 lig/mL에서는 다소 감소하는 경향을 보였다. SFMEA층의 경우는 300 Ug/mL를 첨가하였을 때 암세포 독성 효과가 갑자기 증가되어 78%의 효과를 보였고 계속 농도 의존적으로 증가하여 500 Ug/mL를 첨가하였을 때는 91%의 높은 효과가 나타났다.
- 1은 인체 간암 세포주인 HepG2에 용매별 각 시료 분 획 물을 100, 200, 300, 400 및 500 (ig/mL씩 농도를 증가 시 키며 첨가하였을 때의 암세포 독성 효과를 나나 낸 것이며, 다른 용매 분획 층에 비해 ethylether층인 SFMEE와 ethylacetate 층인 SFMEA에서 그 효과가 아주 뛰어났다. SFMEE층의 경우 시료 농도가 100 Ug/mL을 첨가했을 때 이미 92%의 높은 암세포 독성 효과를 보였으며 농도가 증가할수록 증식 억제 효과는 그대로 유지 되 다가 400 lig/mL에서는 다소 감소하는 경향을 보였다. SFMEA층의 경우는 300 Ug/mL를 첨가하였을 때 암세포 독성 효과가 갑자기 증가되어 78%의 효과를 보였고 계속 농도 의존적으로 증가하여 500 Ug/mL를 첨가하였을 때는 91%의 높은 효과가 나타났다.
- 90배의 높은 QR 유도 효과를나타내어 50 Pg/mL 농도 첨 가시까지 거의 동일한 수준의 효과를 나타냈으나 그 이후는 조금씩 감소하는 경향을 보였다. SFMH층은 농도 의존적으로 QR 유도 효과가 유의성 있게 증가하여 50ug/mL에서 QR 유도 활성이 약 2배가량 되었으며, 최종첨가농도인 100ug/mL에서 대조군 1.0에 비해 2.56 배로 다른 용매 분획물 첨가 시보다 낮은 농도에서 높은 QR효 소활성 을 나타내었다. 이상의 결과에서 모자반의 여러 용매 분획물 중 SFMEE층과 SFMH층에서 암예방지표인 높은 QR 유도 활성을 보였으므로 이 분획 층에서의 암 예방 효소계 quinone reductase의 inducer가 존재함을 추정할 수 있었다.
- 이 결과는 Shim 등(24)의 연구 결과와 비슷한 경향으로서 암세포 독성 효과와 암 예방 QR 유도 효과의 상관관계는 반드시 그 유 의성은 없는 것으로 추정된다. 대조군을 1.0으로 했을 경우 SFMEE층은 아주 낮은 초기 시료 첨가농도인 25 Ug/mL의 농도에서 대조 군에 비해 이미 2.90배의 높은 QR 유도 효과를나타내어 50 Pg/mL 농도 첨 가시까지 거의 동일한 수준의 효과를 나타냈으나 그 이후는 조금씩 감소하는 경향을 보였다. SFMH층은 농도 의존적으로 QR 유도 효과가 유의성 있게 증가하여 50ug/mL에서 QR 유도 활성이 약 2배가량 되었으며, 최종첨가농도인 100ug/mL에서 대조군 1.
- 27, 96%의 아주 높은 암세포 독성 효과를 나타내었다. 또한 SFM의 경우도 농도 의존 적으로로 암세포 독성 효과가 나타나 400과 500 Ug/ mL 첨가에서 각각 82.94% 및 90%의 독성 효과가 나타났다.
- 본 실험의 결과로 모자반은 메탄올 추출물 속에 DPPH 소거능을 가진 물질이 존재하고 있으며 이 결과는 모자반의 in vitro 항발암 활성을 설명하는 데 그 기초배경이 될 수 있다. 본 실험 결과를 종합 검토해보면 모자반 추출물과 용매별 각 분획 층에 서 의 암세포 독성 효과는 주로 비극성분 획층에서 높게 나타났으며, QR 유도 활성효과도 비극성분 획층인 SFMEE층과 SFMH층에서 나타났다. 특히 SFMEE 층은 적은 농도에서 암세포 독성 효과, QR 유도 활성효과를 나타내었으며 이 연구결과에 대한 단계적인 물질의 분리 동정이 이루어져 SFMEE층에서의 유용한 생리활성물질 개발이 기대되는 바이다.
- 모자반의 DPPH rad ical 소거능을 실험하였으며 모자반의 메탄올 추출물의 DPPH 소거능 결과는 대조군인 항산화제인 BHT와 VitC의 결과와 유사하였다. 본 실험의 결과로 모자반은 메탄올 추출물 속에 DPPH 소거능을 가진 물질이 존재하고 있으며 이 결과는 모자반의 in vitro 항발암 활성을 설명하는 데 그 기초배경이 될 수 있다. 본 실험 결과를 종합 검토해보면 모자반 추출물과 용매별 각 분획 층에 서 의 암세포 독성 효과는 주로 비극성분 획층에서 높게 나타났으며, QR 유도 활성효과도 비극성분 획층인 SFMEE층과 SFMH층에서 나타났다.
- SFMEA층의 경우 300 Ug/ mL 첨가 시 약 66%의 독성 효과가 나타났으며 400 Hg/mL 첨가농도에 서는 98%의 아주 높은 효과를 나타내었으며 최 고 농도 첨가 시에도 그 상태를 유지하였다. 이 세포주에서는 methanol 추출물인 SFM층과 hexane 분획 증인 SFMH에서 도 300 卩g/mL의 농도에서부터 농도 의존적으로 암세포 독성 효과가 서서히 나타나기 시작하여 500 Ug/mL에서는 각각 83%, 84%의 효과를 보였다.
- 정상세포인 liver세포는 모자반의 모든 용매분획 층에서 암세포 독성 효과가 낮게 나타났다. 이상과 같이 3종의 암세포에 대한 독성 실험에서 전반적으로 SFMEE층과 SFMEA층에 월등히 높은 암세포 독성물질이 존재함을 알 수 있었다. 한편 인체 간암세포■주인 HepG2를 이용하여 QR 효소 유도 활성 여부를 측정한 결과 SFMEE층은 아주 낮은 초기 첨가 농도인 25ug/mL에서, 대조군에 비해 이미 2.
- 56 배로 다른 용매 분획물 첨가 시보다 낮은 농도에서 높은 QR효 소활성 을 나타내었다. 이상의 결과에서 모자반의 여러 용매 분획물 중 SFMEE층과 SFMH층에서 암예방지표인 높은 QR 유도 활성을 보였으므로 이 분획 층에서의 암 예방 효소계 quinone reductase의 inducer가 존재함을 추정할 수 있었다.
- 이상의 결과에서 사용한, 3종의 암세포 주는 모두 초기 농도에서는 SFMEE에서 제일 암세포 독성효과가 컸고, SF- MEA 층의 경우는 가한 시료의 양을 증가시킴에 따라 농도 의존적으로 그 효과가 커져 3종의 암세포 주에서 모두 매우 높은 암세포 독성 효과가 나타났다. 또 HT29와 HeLa 세 포주에서는 mathanol층 SFM고卜 hexane층인 SFMH에서도 유의적인 효과를 나타내었다.
- 정상 간세포에서 본 세포독성 효과는 암세포 주에 비하여 낮은 세포 독성을 보였으며 5가지의 시료 분획물을 500 Ug/ mL 첨가 농도에서 대체적으로 약 40%의 저해율을 보였다.
- 모자반을 추출, 분획하여 3종의 암세포주(HepG2, HT-29, HeLa)를 이용하여 암세포 독성 효과를 본 결과, 모자반의 ethylether 분획층(3FMEE)과 ethylacetate 분획층(SFMEA)에서 3종의 사용 암 세포주 인 HepG2, HT29 및 HeLa 모두 아주 높은 cytotoxicity를 보였으며, HT29오]" HeLa에서는 mathanol 추출물(SFM)과 hex ane 분획 층(SFMH)에 서 도 유의적인 암세포 독성 효과를 나타내었匸卜. 정상세포인 liver세포는 모자반의 모든 용매분획 층에서 암세포 독성 효과가 낮게 나타났다. 이상과 같이 3종의 암세포에 대한 독성 실험에서 전반적으로 SFMEE층과 SFMEA층에 월등히 높은 암세포 독성물질이 존재함을 알 수 있었다.
- 2의 결과와 비슷한 양상을 보여 주었다. 즉, SFMEE층의 경우 200 Ug/mL에서 98%의 높은 암세포 독성 효과를 나타내었고 SF- MEA 층과 SFMH층은 농도의 존 적으로로 그 효과가 유의성 있게 증가하여 300Rg/mL의 농도에서 각각 66%, 68%의 독성 효과를 보였고 500 Rg/mL의 농도에서는 각각 98.27, 96%의 아주 높은 암세포 독성 효과를 나타내었다. 또한 SFM의 경우도 농도 의존 적으로로 암세포 독성 효과가 나타나 400과 500 Ug/ mL 첨가에서 각각 82.
- 이상과 같이 3종의 암세포에 대한 독성 실험에서 전반적으로 SFMEE층과 SFMEA층에 월등히 높은 암세포 독성물질이 존재함을 알 수 있었다. 한편 인체 간암세포■주인 HepG2를 이용하여 QR 효소 유도 활성 여부를 측정한 결과 SFMEE층은 아주 낮은 초기 첨가 농도인 25ug/mL에서, 대조군에 비해 이미 2.89배의 높은 QR 유도 활성효과를 보였고, SFMH층은 농도 의 존적으로 그 효과가 증가하여 최종 농도인 100 Hg/mL에 서 2.56배의 QR 유도 활성효과를 나타내었다. 모자반의 DPPH rad ical 소거능을 실험하였으며 모자반의 메탄올 추출물의 DPPH 소거능 결과는 대조군인 항산화제인 BHT와 VitC의 결과와 유사하였다.
후속연구
- 이와 같은 실험 결과에서 모자반의 암세포 독성 효과를 보이는 생리활성 물질은 ethylether층고卜 ethylacetate층에 용 해되는 물질에 주로 존재한다는 결론을 얻을 수 있었으며 이 와같은 세포독성효과는 천연 항산화제의 보다 매우 큰 항산 화력을 가지고 있는 polyphenol종류의 phenol 성 수산기를 포함한 물질도 추정되고 있으며 연구가 계속 진행 중에 있다.
- 본 실험 결과를 종합 검토해보면 모자반 추출물과 용매별 각 분획 층에 서 의 암세포 독성 효과는 주로 비극성분 획층에서 높게 나타났으며, QR 유도 활성효과도 비극성분 획층인 SFMEE층과 SFMH층에서 나타났다. 특히 SFMEE 층은 적은 농도에서 암세포 독성 효과, QR 유도 활성효과를 나타내었으며 이 연구결과에 대한 단계적인 물질의 분리 동정이 이루어져 SFMEE층에서의 유용한 생리활성물질 개발이 기대되는 바이다.
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