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문제 정의
- 가 살아갈 수 있도록 도와주는 것으로 추 정된다(14). 따라서 urease의 활성을 억제하는 것이 H. pylori 의 감염예방을 위한 하나의 방법이 될 수 있기 때문에 본 연구에서 한약재 추출물의 urease 활성 억제 효과를 연구하였 다
- 1, 2). 소목과 연교의 경우에는 분획물의 urease 활성 억제에 대해 이미 보고된 문헌이 있기 때문에(9, 10) 본 연구에서는 한국에서 자생하는 대표적인 야생종으로 식용 또는 약용으로 많이 이용되고 있는 애엽을 대상으로 분 획물의 urease 활성억제를 연구하였다.
제안 방법
- 4가지 한약재 추출액의 최종농도를 100 mg/ml로 맞추고 urease 활성억제 효과를 spectrophotometer# 사용하여 O.D.로 측정하였다. 4가지 약재 중 소목 (Caesalpinia sappan L)과 연교 (Forsythiae suspensa Vahl.
- 4종의 한약재에 대하여 urease 활성억제능을 측정하였다. Urease 활성억제능은 H.
- H. pyZori의 urease 활성억제 실험에서 한국의 산야에 널리 자생하고 있는 애엽 (Artemisia asiatica Nakai)을 대상으로 메탄올로 1차 추출하고, 물, 에틸아세테이트 (ethyl acetate) 및 부탄올을 이용한 분획 실험을 수행하였다, 건조 된 애엽 50 g을 분말로 하여 80% 메탄올 (Ducksan Pharm, Korea) 2.5 L로 24시간 추출하여 여과 (Whatman No.l, Whatman International Ltd., Maidstone, England)하였다. 여과 하여 얻어진 여과액 1.
- Urea broth (yeast extract 0.1 mg/ml, monopotassium phosphate 9.1 mg/ml, dipotassium phosphate 9.5 mg/ml, urea 20 mg/ml, phenol red 0.01 mg/ml)를 1 ml씩 Eppendorf-tube 에 분주하여 냉장보관 하였고, 이 tube에 H. pyZt洲를 접종시 켜 색이 붉게 변화하는 것으로 균주를 확인하였다
- 4종의 한약재에 대하여 urease 활성억제능을 측정하였다. Urease 활성억제능은 H. pylori bacterial suspension (20 以)을 urea broth (yeast extract 0.1 mg/ml, monopotassium phosphate 9.1 mg/ml, dipotassium phosphate 9.5 mg/ml, urea 20 mg/ml, phenol red 0.01 mg/ml) 7 ml이 들어있는 이ivette에 넣고 urea 의 분해에 따른 phenol red 의 color intensity 의 변화를 spectrophotometer (Spectronic 20D+, Milton Roy, USA)를 이용하여 560 nm에서 측정하였다. Urease의 작용에 대한 한약 재의 억제 효과가 커질수록 요소가 적게 분해되어 pH 증가 가 적을 것이며 phenol red는 오렌지색이 유지되어 Optical Density 가 상대적으로 낮은 성질을 이용하였다.
- 01 mg/ml) 7 ml이 들어있는 이ivette에 넣고 urea 의 분해에 따른 phenol red 의 color intensity 의 변화를 spectrophotometer (Spectronic 20D+, Milton Roy, USA)를 이용하여 560 nm에서 측정하였다. Urease의 작용에 대한 한약 재의 억제 효과가 커질수록 요소가 적게 분해되어 pH 증가 가 적을 것이며 phenol red는 오렌지색이 유지되어 Optical Density 가 상대적으로 낮은 성질을 이용하였다.
- 대상 한약재는 주로 전통동양약물 데이터베이스(12)와 한 국의 자원식물에 관한 문헌자료(13) 중 urease 활성억제 효과가 입증된 소목(9)과 연교(10), 그리고 민간에서 많이 쓰이고 있는 대표적 야생종인 애엽과 갈근을 선별하였다(Table 1). 각 한약재에 대하여 에탄올 추출과 함께 한약재를 복용하는 조건에서의 효능을 알아보기 위하여 물 추출도 병행하였다. 에탄올 추출은 각 한약재 10 g을 70%의 에탄올 100 ml에 넣고 80℃에서 1시간 동안 추출하였고, 물 추출은 각 한약재 10 g을 물 100 ml에 넣고 100℃에서 1시간 동안 추출하였다.
- 균주의 단기보존 및 CFU (colony forming unit) 측정을 위한 고체배지 또한 brucella agar 배지를 이용하였으며 이때도 역시 10%의 horse serum를 첨가하여 배지를 제조하였고, CCh incubator (Sanyo, Japan)에서 CCh만을 조정하여 10% CO2 조건으로 배양하였다.
- Ethanol (Becton Dickinson, USA)에 1분간 세척한 후 carbol fu사isin (Becton Dickinson, USA)으로 10분간 염색하였다. 모든 과정이 끝난 후 건조하여 광학 현미경 (X1500)으로 morphology를 관찰하여 오염여부를 확인하였다
- 물 층은 다시 부탄올 (Ducksan Pharm, Korea) 100 ml을 넣어 흔합하여 물 층과 부탄올 층으로 나 누었다. 물, 에틸아세테이트 및 부탄올 층을 감압 농축하여 각 분획별로 농축물을 얻었고, 각 분획 농축물의 최종 농도를 100 mg/ml로 하여 H. /枫g에 대한 urease 활성억 제능을 측정하였다.
- 1 g으로 구성되 어있다. 배양조건은 37℃, 혼합가스 (10% CO2, 5% 6, 85% N2)를 사용하였으며, 회전속도와 온도를 제어하기 위한 방법 으로는 anaerobic jar를 진탕배양기 (Vision Science, Korea)에 고정하여 회전속도 (180 rpm)를 제어하였다.
- 에 대한 항균활성이 연구되었다. 본 연구에서는 민간에서 많이 이용되는 애엽 및 갈근, 그리고 시중의 유제품에 함유된 소목(9)과 최근 본 실험실에서 연구된 연교(10) 추출물의 urease 활성 억제 능력을 비교하였 고, 또한 한방치료에서 살균 및 항균 효과가 있다고 알려진 (11) 애엽 추출물을 분획하여 urease 활성 억제 능력을 측정하였다.
- 애엽은 한방에서 지혈저】, 소화제, 구충제 등으로 사용되며 위장병, 변비, 신경통, 천식, 부인병 등의 치료에 효험이 있다고 하며, 향기성분이나 정유성분은 살균, 항균 및 항종양 등의 여러가지 생리적 활성이 있는 것으로 알려져 있다(11, 15). 애엽을 메탄올로 1차 추출한 후 2차로 극성이 다른 용 제인 물, 에틸아세테이트, 부탄올로 분획하여 각 분획물에 대한 urease 활성억제 효과를 검색하였다. 메탄올을 사용한 1차 추출물의 경우 한약재 추출물을 넣지 않은 대조군과 비교하여 O.
대상 데이터
- Helicobacter pylori는 경상대학교 의과대학에서 분양 받은 ATCC 43504를 사용하였다. H.
- 대상 한약재는 주로 전통동양약물 데이터베이스(12)와 한 국의 자원식물에 관한 문헌자료(13) 중 urease 활성억제 효과가 입증된 소목(9)과 연교(10), 그리고 민간에서 많이 쓰이고 있는 대표적 야생종인 애엽과 갈근을 선별하였다(Table 1). 각 한약재에 대하여 에탄올 추출과 함께 한약재를 복용하는 조건에서의 효능을 알아보기 위하여 물 추출도 병행하였다.
성능/효과
- 로 측정하였다. 4가지 약재 중 소목 (Caesalpinia sappan L)과 연교 (Forsythiae suspensa Vahl.)의 70% 에탄올 추출물은 O.D. 값이 0.15와 0.2로서 강한 urease 활성억제 효과가 있었 으며, 한약재 추출물을 넣지 않은 대조군과 비교하여 각각 84%와 72%의 활성이 억제되었다. 이러한 결과는 문헌상의 결과와 유사하였다(9, 10).
- 4종 한약재에 대한 70% 에탄올 추출물의 Helicobacter pylori 세포 내 urease 활성억제능은 한약재 추출물을 넣지 않은 대조군과 비교하여 소목 (Caesalpinia sappan L.) 추출 물의 경우 84%, 연교 (Forsythiae Fructus)의 추출물의 경우 72%, 애엽 (Artemisia asiatica Nakai) 추출물의 경우 31%이 었다. 그러나 애엽의 80% 메탄올 추출물을 2차로 물, 에틸아 세테이트 및 부탄올로 분획하였을 때 에틸아세테이트 분획에서 urease 활성억제 능력이 90%로 향상되었다.
- ) 추출 물의 경우 84%, 연교 (Forsythiae Fructus)의 추출물의 경우 72%, 애엽 (Artemisia asiatica Nakai) 추출물의 경우 31%이 었다. 그러나 애엽의 80% 메탄올 추출물을 2차로 물, 에틸아 세테이트 및 부탄올로 분획하였을 때 에틸아세테이트 분획에서 urease 활성억제 능력이 90%로 향상되었다.
- 값이 62% 감소하였다. 물과 부탄올을 이용한 2차 추출에서는 대조군과 비교하여 O.D. 값이 64% 및 52% 감소 하였다. 에틸아세테이트 분획물의 경우에는 대조군과 비교하여 O.
- 이러한 결과는 문헌상의 결과와 유사하였다(9, 10). 소목 및 연교에 비해 낮기는 하지만 애엽과 갈근의 경우에도 urease 활성 억제능력이 있음이 확인되었다. 연교, 애엽, 갈근의 경우 에탄올 추출물과 물 추 출물의 urease 활성억제 효과에 큰 차이점이 없었으나 소목은 에탄올 추출물이 물 추출물 비해 더 강한 urease 활성억제를 나타내었다(Fig.
- 값이 64% 및 52% 감소 하였다. 에틸아세테이트 분획물의 경우에는 대조군과 비교하여 O.D. 값이 90% 감소하는 것으로 보아 에틸아세테이트 분 획물 중에 urease 활성억제 물질이 가장 많이 포함되어 있음을 알 수 있었다(Fig. 3).
후속연구
- pylorie} urease 활성억제 능력을 가지는 성분이라고 생각된다. 그러나 유효성분을 확 인하기 위해서 에틸아세테이트 분획으로부터 단일성분을 분 리, 동정하여 활성을 검색하는 실험이 필요하다.
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