장기간 자연숙성시킨 전통된장의 항산화 효과는 숙성기간이 길어질수록 대체로 감소되었으며, 숙성기간 1년 된장에서 methanol 분획물이 가장 우수하였으며, 다음으로 hexane과 물 분획물의 순이었다. 지용성 및 수용성 추출물은 숙성기간이 길어질수록 항산화 효과가 점진적으로 오히려 증가되었으나, 분획물에 비하여 낮은 수치를 나타내었다. 전통된장의 수소공여능은 수용성 색소 추출물과 methanol 및 butanol 분획물에서 대체적으로 높은 수치였으나, chloroform과 ethylacetate 분획물은 매우 낮았다. 전통된장의 항암효과에서 인체 폐암 세포주(A549)는 물 분획물에서 가장 높았고, 인체 유방암 세포주(MCF-7)는 methanol 분획물에서 가장 높은 수치를 나타내었으며, 특히 전통된장의 숙성기간이 길어질수록 암세포 성장억제효과는 높게 나타났다.
장기간 자연숙성시킨 전통된장의 항산화 효과는 숙성기간이 길어질수록 대체로 감소되었으며, 숙성기간 1년 된장에서 methanol 분획물이 가장 우수하였으며, 다음으로 hexane과 물 분획물의 순이었다. 지용성 및 수용성 추출물은 숙성기간이 길어질수록 항산화 효과가 점진적으로 오히려 증가되었으나, 분획물에 비하여 낮은 수치를 나타내었다. 전통된장의 수소공여능은 수용성 색소 추출물과 methanol 및 butanol 분획물에서 대체적으로 높은 수치였으나, chloroform과 ethylacetate 분획물은 매우 낮았다. 전통된장의 항암효과에서 인체 폐암 세포주(A549)는 물 분획물에서 가장 높았고, 인체 유방암 세포주(MCF-7)는 methanol 분획물에서 가장 높은 수치를 나타내었으며, 특히 전통된장의 숙성기간이 길어질수록 암세포 성장억제효과는 높게 나타났다.
Antioxidant effect of traditional doenjang(TD) was reduced by increasing of maturation period. Methanol fractionate of TD matured for 1 year showed strong antioxidant effect against linoleic acid, following the order of hexane and water layer. Antioxidant effect in lipophilic and hydrophilic extract...
Antioxidant effect of traditional doenjang(TD) was reduced by increasing of maturation period. Methanol fractionate of TD matured for 1 year showed strong antioxidant effect against linoleic acid, following the order of hexane and water layer. Antioxidant effect in lipophilic and hydrophilic extracts of TD were gradually increased according to increasing maturation period, whereas their values or two extracts were lower than those or fractionates from TD. Hydrogen-scavenging effect in hydrophobic extract, methanol and butanol fractionates of TD were much higher than those of the other samples. Chloroform and ethylacetate fractionates were markedly lower in the range of $10.57{\sim}22.84\%\;and\;7.82{\sim}22.58\%$, respectively. Anticarcinogenic effect of extracts and fractionates from TD were higher in water fractionates for A549 cell (human lung carcinoma) and methanol fractionates fur MCF-7 cell (human breast adenocarcinoma). Especially, inhibitory effect for growth of cancer cell was increased by the increasing maturation period of TD.
Antioxidant effect of traditional doenjang(TD) was reduced by increasing of maturation period. Methanol fractionate of TD matured for 1 year showed strong antioxidant effect against linoleic acid, following the order of hexane and water layer. Antioxidant effect in lipophilic and hydrophilic extracts of TD were gradually increased according to increasing maturation period, whereas their values or two extracts were lower than those or fractionates from TD. Hydrogen-scavenging effect in hydrophobic extract, methanol and butanol fractionates of TD were much higher than those of the other samples. Chloroform and ethylacetate fractionates were markedly lower in the range of $10.57{\sim}22.84\%\;and\;7.82{\sim}22.58\%$, respectively. Anticarcinogenic effect of extracts and fractionates from TD were higher in water fractionates for A549 cell (human lung carcinoma) and methanol fractionates fur MCF-7 cell (human breast adenocarcinoma). Especially, inhibitory effect for growth of cancer cell was increased by the increasing maturation period of TD.
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문제 정의
본 연구에서는 전통된장의 장기간 실외자연숙성과정을 통하여 식품성분간 화학반응 및 효소적 갈변 현상으로 생성되는 멜라닌 류 색소의 기능성을 탐색함으로써 전통된장의 색깔과 기능적 품질평가를 위한 기초자료로 활용하고자 실험을 수행하였다.
제안 방법
25% trypsin-EDTA 용액으로 처리하여 single cell로 만든 후 배양액으로 최종 농도가 5 X 104 cells/mL개가 되도록 희석하여 48 well plate에 각 well 당 450 μL씩 접종한 다음 37℃, 5% COz incubator에서 24시간 전 배양하였다. 각 well의 배지를 흡입하여 제거한 후, 서로 다른 농도로 준비한 시료가 포함된 배지를 50 uL 씩 각 well에 가하여 48시간 더 반응시켰다 배양이 종료된 후, 50의 차가운 50% trichloroacetic acid(TCA)를 위에서부터 천천히 가해주고 TCA가 바닥에 가라앉도록 잠시 기다린 후 조심스럽게 냉장고로 옮겨 1시간 동안 충분히 고정시키고 고정이 끝난 후에는 증류수로 5회 이상 세척하여 잘 건조시키고 나서 각 well에 1% 빙초산에 녹인 0.4% SRB용 액 100 mL를 가하여 상온에 30분 이상 염색하였다. 염색이 끝난 후, 1% 빙초산으로 5회 세척하여 잘 건조시키고, 150 UL의 10 mM 비완충성 Tris 용액으로 SRB염색액을 잘 녹여내어 96-well plate용 microplate reader로 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.
수소공여능의 측정은 a, a ' -diphenyl-P-picrylhydrazine (DPPH)의 환원성을 이용하여 516 nm에서 UV/Vis-spectrophotometer 로 실시하였다. 즉각 추출물 0.
전통된장 추출물 및 분획물의 항산화 효과를 linoleic acid 의 과산화물가로 환산하여 in vitro로 조사하였다. 즉 삼각플라스크에 linoleic acid 1 mL, carbonyl을 제거한 ethanol 20 mL 및 전통된장 추출물 혹은 분획물 0.
전통된장의 기능성이 가장 높은 추출용매를 확인하기 위하여 된장 800 g에 10배(w/w)의 hexane을 혼합하여 환류냉각이 부착된 환저플라스크에 넣고, 70℃ 수욕상에서 12시간 가열하여 추출한 다음, 그 여과액을 rotary evaporator로 감압농축시킨 후, 동결건조하여 hexane 조 추출물을 얻었다. Hexane 분획물은 용매의 극성을 증가시키는 계통분획법에 따라 다시 chloroform, ethylacetate, butanol, methanol, water의 순으로 각각 분획하여 농축한 후, 동결건조하여 항산화 효과, 수소공여능 및 항암실험을 하기 위하여 3차 증류수에 재용해 하여 사용하였다 <28).
= 1:1, v/v)를 10배(w/w) 첨가하여 지용성 색소와 동일 방법으로 추출하였다. 지용성 및 수용성 추출액은 rotaiy evaporator에서 각각 40℃, 80℃에서 농축하면서 용매를 휘발시킨 다음, 동결건조하여 사용 직전에 3차 증류수에 다시 재용해 하여 항산화 효과, 수소공여능 및 항암실험의 시료로 사용하였다 (15).
지용성 색소는 동결건조시킨 전통된장 10 g에 지용성 색소의 추출용매 (chloroform : methanol = 2:1, v/v)를 10배(w/w) 첨가하여 3회 추출하였고, 수용성 색소는 지용성 색소를 추출하고 남은 잔사에 수용성 추출용매 (methmol : D.W. = 1:1, v/v)를 10배(w/w) 첨가하여 지용성 색소와 동일 방법으로 추출하였다. 지용성 및 수용성 추출액은 rotaiy evaporator에서 각각 40℃, 80℃에서 농축하면서 용매를 휘발시킨 다음, 동결건조하여 사용 직전에 3차 증류수에 다시 재용해 하여 항산화 효과, 수소공여능 및 항암실험의 시료로 사용하였다 (15).
대상 데이터
4% 농도로 녹여 사용하였다. TCA(trichloroacetic acid) 고정액은 100%(6.1 N)용액을 증류수로 희석하여 50%와 80% 용액을 사용하였다.
25% trypsin - 3 mM EDTA 용액을 PBS로 10배 희석한 용액을 사용하였다. 암세포주 배지로써 Rosewell Park Memorial Institute(RPMI) media 1640에 10% FBS (fetal bovine serum PAA 제품)와 penicillin-streptomycin 혼합용액을 첨가하여 사용하였으며, penicillin- streptomycin 혼합용액은 penicillm(10, CXX) units/mL) 과 streptomycin(10 mg/mL) 의 혼합액(SIGMA, P-0781)을 RPMI 1640배지에 100배 희석하여 사용하였다. ttypsin-EDTA용액 은 10배 농축용액(SIGMA)을 PBS(phosphate buffered saline)로 10배 희석한 후 사용 직전까지 냉동 보관하였으며, SRB (sulforhodamine B) 염색용액은 1% 빙초산에 0.
한국생명공학연구원 생물자원센터로부터 분양받은 인체 폐암 세포주(A549)와 인체유방암 세포주(MCF-7)들은 10%의 송아지 혈청 (fetal bovine serum) °] 포함된 RPMI 1640배 지를 사용하여 37℃, 5% CO2 incubator에서 1주일에 1~2회 계대 배양하면서 실험에 사용하였다. 플라스크의 바닥에 부착되어 있는 세포를 떼어내는 데는 0.
이론/모형
세포 증식 정도를 SRB assay법(31, 32)과 CeU titer 96R aqueous one solution cell proliferation assay(33) 에 따라 측정하였다. Moiiolayei로 배양 중인 암세포주를 0.
성능/효과
결론적으로 인체 폐암과 유방암 세포주의 성장 억제는 수용성색소 추출물과 각 분획물의 농도에 따라 비례적으로 증가하였고, 각각 3년 된장의 물 분획물과 methanol 분획물에서 가장 높게 나타났으며, 또한 전통된장의 숙성기간이 길어질수록 암세포 성장억제 효과는 높게 나타났다.
물분획물(Fig. 7)은 인체 폐암 세포주의 성장 억제 효과에서 추출물의 저농도(1 ~ 10 ppm)에서도 높은 효과를 나타내었으며, 100 ppm 농도에서 3년된장(59.9%), 2년(5L6%)과 1 년 된장(55.1%) 순으로 나타났다. 그러나 인체 유방암 세포주의 성장억제 효과는 폐암 세포주와 다르게 상당히 낮게 나타났으며, 100 ppm 농도에서 3년된장(26.
수소공여능은 수용성 색소주출물(924 ~ 85.2%) 이 동일년도에 대하여 지용성 색소 추출물(78.8 ~ 715%)보다 10% 이상 높았으며, 또한 저장기간이 길어짐에 따라 약간씩 감소하는 경향이었다 (Fig. 3).장기 숙성시킨 전통된장의 용매 분획 물은 숙성기간(1년 ~ 3년)에 따라 증가하는 경향을 나타내었는데, methanol 분획물(79.
5, 6, 7과 같다. 수용성 색소 추출물(Fig. 5)은 인체 폐암세포주의 성장 억제 효과에서 추출물의 농도에 비례하여 증가하였으며, 100 ppm 농도에서 2년 된장(35.1%)이 1년(10.4%)과 3년된장(7.9%)보다 높게 나타났으나, 인체 유방암 세포주의 성장억제 효과는 폐암 세포주와 마찬가지로 추출물의 농도에 비례하여 증가하였지만, 100 ppm 농도에서 오히려 1년 된장(32.0%)이 2년(11.6%)과 3년된장(5.3%)보다 상당히 높게 나타났 다.
2와 같다. 이들 분획물의 과산화물가는 색소류와는 다르게 숙성기간이 짧을수록 낮은 경향으로 나타나서 1년 된장> 2년 된장>3년 된장 순으로 항산화력이 높았으며, 그 중에서 methanol 분획물의 1년된장(과산화물가 160 meq/kg)과 2년 된장(220 meq/kg)은 BHT보다는 항산화력이 약간 낮았지만, 다른 분획물에 비하여 높은 항산화 효과를 나타내었다.
08로 서 비교적 감소폭이 크게 나타났다. 이상의 결과를 보면, 전통된장의 숙성기간은 기호적 평가에서 1년~2년 기간까지는 적절한 것으로 생각된다. 그러나 메주콩의 종류와 침지와 증자조건, 메주 크기와 발효 조건, 염장조건(염수농도, 메주와 염수비율, 기간) 등에 따라서 최종 전통된장의 숙성 중색도 변화는 다르게 나타날 수가 있다.
3).장기 숙성시킨 전통된장의 용매 분획 물은 숙성기간(1년 ~ 3년)에 따라 증가하는 경향을 나타내었는데, methanol 분획물(79.7 ~ 84.3%)과 butanol 분획물(79.7 ~ 82.6%)은 매우 높았으며, 물 분획물(66.1 ~ 62.3%)과 hexane층(50.6 ~ 54.9%)의 값도 비교적 높았으나, chlorofonn 분획물(10.6 ~ 22.8%)과 ethylacetate 분획물(7.8 ~ 22.6%)은 아주 낮은 값을 나타내었다 (Fig. 4).
장기간 자연 숙성시킨 전통된장의 항산화 효과는 숙성기간이 길어질수록 대체로 감소되었으며, 숙성기간 1년된장에서 methanol 분획물이 가장 우수하였으며, 다음으로 hexane 과 물 분획물의 순이었다. 지용성 및 수용성 추출물은 숙성기간이 길어질수록 항산화 효과가 점진적으로 오히려 증가되었으나, 분획물에 비하여 낮은 수치를 나타내었다.
장기숙성시킨 전통된장의 지용성 색소와 수용성 색소의 linoleic acid에 대한 항산화력을 측정한 결과는 Fig. 1과 같다 전통된장의 색소 추출물의 linoleic acid에 대한 항산화력은 linoleic acid에 지용성과 수용성 추출물을 첨가한 후 50 ℃ 에서 3일간 저장하면서 과산화물가를 측정하였는데, 수용성 색소가 지용성 색소보다 약간 낮은 과산화물가를 나타내므로 항산화능이 우수하였다. 순수한 콩만으로 만든 전통된장은 실외 자연조건에서 저장기간이 길어지면서 항산화능이 증가되는 경향이었는데, 특히 전통된장의 수용성 색소는 1년 된장(과산화물가 360 meq/kg)에서 3년 된장(300 meq/kg) 으로 숙성기간이 경과되면서 과산화물의 생성을 낮추므로 항산화능은 오히려 증가되었다.
지용성 및 수용성 추출물은 숙성기간이 길어질수록 항산화 효과가 점진적으로 오히려 증가되었으나, 분획물에 비하여 낮은 수치를 나타내었다. 전통된장의 수소공여능은 수용성 색소 추출물과 methanol 및 butanol 분획물에서 대체적으로 높은 수치였으나, chloroform 과 ethylacetate 분획물은 매우 낮았다. .
. 전통된장의 항암효과에서 인체 폐암 세포주(A549)는 물 분획물에서 가장 높았고, 인체 유방암서)포주(MCF-7)는 methanol 분획물에서 가장 높은 수치를 나타내었으며, 특히 전통된장의 숙성기간이 길어질수록 암세포 성장억제 효과는 높게 나타났다.
장기간 자연 숙성시킨 전통된장의 항산화 효과는 숙성기간이 길어질수록 대체로 감소되었으며, 숙성기간 1년된장에서 methanol 분획물이 가장 우수하였으며, 다음으로 hexane 과 물 분획물의 순이었다. 지용성 및 수용성 추출물은 숙성기간이 길어질수록 항산화 효과가 점진적으로 오히려 증가되었으나, 분획물에 비하여 낮은 수치를 나타내었다. 전통된장의 수소공여능은 수용성 색소 추출물과 methanol 및 butanol 분획물에서 대체적으로 높은 수치였으나, chloroform 과 ethylacetate 분획물은 매우 낮았다.
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