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문제 정의
- 본 연구에서는 바위솔에 함유되어 있는 것으로 알려져 있는 8종의 폴리페놀 배당체 화합물들 중 표준물질을 확보할 수 있었던 1-5의 5종의 함량을 추적하였다. 먼저 추출 방법, HPLC 이동상 및 컬럼을 변화시키면서 최적화된 분석조건을 조사하였다.
- , 1994, 1995) 유효 약리성분 중 플라본 계열 화합물들이 바위 솔의 항암작용과 적어도 부분적인 관련이 있을 수 있다. 이와 관련하여 출하기간을 변동시키고자 시도되는 일장조절, night-break 및 월동온도 조절에 따른 폴리페놀계의 중요한 부류인 flavonol glycosides의 함량변화를 추적하고자 본 연구가 실시되었다.
제안 방법
- 모든 실험은 신뢰도를 확보하기 위해 3번 반복한 다음 얻어진 데이터들의 평균값을 구하였다. Flavonol glycoside 성분들의 함량은 각각의 표준물질 1-5의 HPLC 피이크 면적과 바위솔 추출물의 HPLC 피이크 면적을 비교함으로써 추적하였다.
- 6x250 mm 컬럼을 사용하는 것이 가장 효과적이었다. Flavonol glycoside 화합물들의 신뢰도 높은 함량 데이터들을 얻기 위해 1-5의 표준 검량곡선을 작성하고 이로부터 R2 값을 계산하였다. R2 값을 모두 0.
- Glycoside 성분들의 함량은 ChemStation software, model G1322 A 기체제거기, G1312A 두 상 기울기 펌프, a model G1329/1330A의 열 자동시료 채취기, a model G1316 컬럼오븐, 다이오드 배열 흡광 검출기가 장착된 Agilent HPLC, series 1100 (Agilent, Waldbronn, Germany)를 사용하여 분석되었다. 사용된 컬럼은 4.
- Price 등의 방법을 수정하여 추출하였다 (Price et al., 1998). 즉, 냉동 건조된 바위솔 2.
- 1-5의 5종의 함량을 추적하였다. 먼저 추출 방법, HPLC 이동상 및 컬럼을 변화시키면서 최적화된 분석조건을 조사하였다. 최적화된 추출조건은 25°C에서 균질화기의 회전속도 5, 000 rpm에서 2분씩 3회 추출하는 것이었.
- 바위솔을 3개 시료 군으로 나눈 다음 암막을 이용하여 각 시료에 10/14, 13/11 및 16/8 시간 (낮/밤)의 일장조절을 하였다. 광도 45 呻ol m-2 广의 백 열등을 광원으로 사용하였다.
- 바위솔을 세 시료 군으로 나눈 다음 각 시료에 6월 30일, 7월 28일 및 8월 25일에 night-break 실험을 실시하였다. 백열등을 광원으로 사용하여 오후 11시부터 오전 1시까지 45 pmol m~2 s-1의 빛을 두 시간 동안 각 시료에 조사하였다.
- 백열등을 광원으로 사용하여 오후 11시부터 오전 1시까지 45 pmol m~2 s-1의 빛을 두 시간 동안 각 시료에 조사하였다. 개화 직후에 바위솔 시료를 채집하였다.
- 시험 중에는 2〜3일 간격으로 충분히 물을 공급하였으며, 시험기간 중 병해충의 방제를 위한 농약은 살포하지 않았다. 시험기간 중 온실의 온도를 실외와 비슷하게 유지하고 빗물이 직접 pot에 떨어지지 않도록 하기 위해 천장만 비닐을 설치하고 측면은 완전히 개방하였다.
- 2a 및 2b와 같다. 표준물질 1- 5와 시료를 공크로마토그래피함으로써 피이크를 동정하고 표준물질의 HPLC 피이크 면적을 기준으로 함량을 조사하였다.Flavonol aglycon의 일반적인 n-콘쥬게이션 흡수 파장 대인 365 를 검출파장으로 사용하였다.
- . 화합물들의 함량은 표준 검량곡선을 토대로 HPLC 크로마토그램 상에 기록된 피이크 면적의 변화로부터 계산되었다. 모든 실험은 신뢰도를 확보하기 위해 3번 반복한 다음 얻어진 데이터들의 평균값을 구하였다.
대상 데이터
- 4-m C18 Hydro-Synergi (Phenomenex, Torrance, CA)이었으며 컬럼 온도는 25°C이었다. 1% 포름산을포함한 20% 아세토나이트릴 수용액을 이동상으로 사용하였다. 검출파장은 365 nm, 흐름속도는 1 ㎖/min이었으며 분석 시간은 30분이었다.
- 2004년 5월 31일 경남 사천시 사천읍 두량리 바위솔 농장에서 분양 받은 유묘를 경상대학교 부속농장의 비닐호) 우스의 pot에 이식하였다. 각각의 모종은 흙과 비료(2: 1)의 비로 혼합된 흙으로 채워진 직경 18 cm 의 플라스틱 용기에 정식 되었다.
- 표준물질 1- 5와 시료를 공크로마토그래피함으로써 피이크를 동정하고 표준물질의 HPLC 피이크 면적을 기준으로 함량을 조사하였다.Flavonol aglycon의 일반적인 n-콘쥬게이션 흡수 파장 대인 365 를 검출파장으로 사용하였다. 얻어진 데이터를 100 g당 mg 의 단위로 종합하면 Table 1과 같다.
- Flavonol-3-O-D-lyxoside (8)와 용매들은 Sigma-Aldrich Korea (Yongin, Korea)에서 구입하였으며 모든 용매는 HPLC 급을 사용하였다. 공동저자 중의 한 사람인 순천대학교 박종철 교수의 연구실에서 바위솔로부터 분리하여 저장하고 있는Flavonol glycoside들, kaempferol-3-O-P-D-glucoside (1) 및 kaempferol-3-0-[3-D-galactoside (2), kaempferol-3-O-a-L-rham- noside (3), quercetin-3-O-P-D-glucoside (4) 및 quercetin-3- O-a-L-rhamnoside (5)를 표준시료로 사용하였다.
- 백열등을 광원으로 사용하여 오후 11시부터 오전 1시까지 45 pmol m~2 s-1의 빛을 두 시간 동안 각 시료에 조사하였다. 개화 직후에 바위솔 시료를 채집하였다. 즉, 8월 25일의 시료는 10월 6일에, 6월 30일과 7월 28일의 시료는 11월 4일에 채집하였다.
- 사용하였다. 공동저자 중의 한 사람인 순천대학교 박종철 교수의 연구실에서 바위솔로부터 분리하여 저장하고 있는Flavonol glycoside들, kaempferol-3-O-P-D-glucoside (1) 및 kaempferol-3-0-[3-D-galactoside (2), kaempferol-3-O-a-L-rham- noside (3), quercetin-3-O-P-D-glucoside (4) 및 quercetin-3- O-a-L-rhamnoside (5)를 표준시료로 사용하였다.
- 광도 45 呻ol m-2 广의 백 열등을 광원으로 사용하였다. 낮 길이 10, 13 및 16 시간은 각각 오전 8시부터 오후 6시, 오전 6시 30분부터 오후 7시 30분까지 와 오전 5시부터 오후 9시까지였다.
- 낮 길이 10, 13 및 16 시간은 각각 오전 8시부터 오후 6시, 오전 6시 30분부터 오후 7시 30분까지 와 오전 5시부터 오후 9시까지였다. 바위솔 시료는 개화 직후에 채집되었다. 즉, 낮/ 밤 시간이 10/14, 13/11 및 16/8의 시료들은 각각 9월 22일, 10월 22일 및 11월 4일에 채집되었다.
- 사용된 컬럼은 4.0 20 mtn i.d. C18 ODS 보호 컬럼이장착된 T150 3.0 i.d. 4-m C18 Hydro-Synergi (Phenomenex, Torrance, CA)이었으며 컬럼 온도는 25°C이었다. 1% 포름산을포함한 20% 아세토나이트릴 수용액을 이동상으로 사용하였다.
- 월동가온 시험은 10월 15일에 시작하였다. 월동가온 시험에서 10°C와 20°C의 조건에서 재배한 바위솔은 11월 17일 채집하였으며 무가온은 11월 4일 채집하였다.
- 자연산 시료는 2004년 9월 17일 진주 중앙시장에서 구입하였다. 2004년 5월 31일 경남 사천시 사천읍 두량리 바위솔 농장에서 분양 받은 유묘를 경상대학교 부속농장의 비닐호) 우스의 pot에 이식하였다.
- 개화 직후에 바위솔 시료를 채집하였다. 즉, 8월 25일의 시료는 10월 6일에, 6월 30일과 7월 28일의 시료는 11월 4일에 채집하였다.
데이터처리
- 화합물들의 함량은 표준 검량곡선을 토대로 HPLC 크로마토그램 상에 기록된 피이크 면적의 변화로부터 계산되었다. 모든 실험은 신뢰도를 확보하기 위해 3번 반복한 다음 얻어진 데이터들의 평균값을 구하였다. Flavonol glycoside 성분들의 함량은 각각의 표준물질 1-5의 HPLC 피이크 면적과 바위솔 추출물의 HPLC 피이크 면적을 비교함으로써 추적하였다.
이론/모형
- 바위솔에 포함된 flavonol glycoside 성분들은 365 nm 의 검출 파장에서 얻은 HPLC 크로마토그램과 표준물질들을 첨가함으로써 크로마토그래피상의 피 이크의 변화를 관찰하는 공 크로마토그래피 (cochromatography) 기법으로 동정하였다 . 화합물들의 함량은 표준 검량곡선을 토대로 HPLC 크로마토그램 상에 기록된 피이크 면적의 변화로부터 계산되었다.
성능/효과
- 다. HPLC 조건은 acetonitrile/1% formic acid in water (20 : 80) 이동상에서 ZORBOX SB-C18 4.6x250 mm 컬럼을 사용하는 것이 가장 효과적이었다. Flavonol glycoside 화합물들의 신뢰도 높은 함량 데이터들을 얻기 위해 1-5의 표준 검량곡선을 작성하고 이로부터 R2 값을 계산하였다.
- Night-break, 일장조절, 월동가온 실험으로부터 얻어진 바위솔에 포함된 flavonol glycoside, kaempferol-3-O-P-D-glucoside (1), kaempferol-3-O-p-D-galactoside (2), kaempferol-3-O-a- L-rhamnoside (3), quercetin-3-o-β-D-glucoside (4) 및 querce- tin-3-O-a-L-rhamnoside (5)의 함량이 분석되었으며 자연산 바위솔의 함량과 비교되었다. 월동가온 시험에서 얻은 flavonol glycoside 1-5의 함량은 자연산보다 감소하였으며 일장조절 실험 및 night-break 시험에서 얻은 flavonol glycoside 함량은 조사한 빛의 양이 증가함에 따라 증가하였다.
- Table 1에 종합된 데이터를 분석한 결과 가온 조건은 조사된 모든 바위솔 flavonol glycoside 성분의 생성에 부정적인 영향을 미치는 것으로 확인되었다. 가온하지 않았으며 일장이 낮/밤 시간이 13/11과 16/8의 조건에서 flavonol glycosides 1-5 성분의 총 함량 (각각 7.29와 6.94 mg/100g)이 자연산 (6.93 以ng)보다 높다는 결과는 flavonol glycosides 성분의 생성에 빛이 중요한 역할을 한다는 것을 의미한다.
- 함량과 비교되었다. 월동가온 시험에서 얻은 flavonol glycoside 1-5의 함량은 자연산보다 감소하였으며 일장조절 실험 및 night-break 시험에서 얻은 flavonol glycoside 함량은 조사한 빛의 양이 증가함에 따라 증가하였다. 월동가온은 flavonol glycoside의 생성에 부정적으로 작용하는 반면 조사되는 빛의 양의 증가와 같은 경작조건은 flavonol glycoside의 생성에 유리하다.
- 결과를 얻은 바 있다. 이 결과와 본 시험 결과로부터 바위솔이 재배되는 동안 받은 빛의 양과 polyphenol 성분의 함량사이에 밀접한 관계가 있는 것으로 분석되었다.
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