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문제 정의
- 본 연구에서는 약용 식물로 활용되는 세인트존스워트를 성인병 예방을 위한 기능성 식품소재로 이용하기 위하여 세인트존스워트 추출물의 H. pykE에 대한 항균효과, 항산화효과, 고혈압 예방 효과, 통풍억제효과 등의 생리 활성 효과를 조사하였다.
제안 방법
- Shetty의 방법으로 측정하였다. 10 mg |3-carotene을 50 ml의 chloroform에 녹인 용액 1 m/에 20 linoleic acid, 184)1/ Tween 40과 50 ml H2O2를 가하여 emulsion을 만들고, 5 m/의 emulsion에 시료용액 100㎕를 혼합하여 vortex로 잘 섞어준 뒤 50℃에서 30분간 방치한 후 식혀주고, 470nm에서 흡광도를 측정하였다. APF는 시료의 흡광도를 대조구의 흡광도로 나눈 값으로 나타내었다.
- DPPH radical에 대한 소거활성은 Blois 의 방법 26을 변형하여 측정하였다. 각 시료 1㎖ 60㎛DPPH 3 m/를 넣고 vortex한 후 15분 동안 방치한 다음 517nm에서 흡광도를 측정하였다.
- H. pylori 최적배지 plate 에 H. pylori균 100㎕를 분주하여 멸균 유리봉으로 도말한 다음, 멸균된 disc paper(88mm)를 올리 고 0.45㎛ membrane Hltei로 제균한 각 추출물 100㎕를 흡수시키고, 대조구로는 멸균수를 흡수시킨 후 371의 미호기성 조건에서 24시간 동안 incubation한 다음, disc 주위의 clear zone 생성 유무를 확인하였다.
- pylori로서 표준균주인 ATCC 43504를 사용하였다. H. pylori^ 배양에는 최적배지(액체배지 50 m/당 special pepton 0.5 g, agar 0.75 g, NaCl 0.25 g, yeast extract 0.25 g, beef extract 0.2 g 및 pyruvic acid 0.025 g)를 사용하여 미호기성 조건을 유지시켜주기 위해서 10% CO2 incubator를이용하였으며, incubator의 습도는 항상 95% 이상으로 유지하였고, agar plate상에서 배양은 37℃로 48-72시간 동안 실시하였다.
-
세인트존스워트 추출물의 페놀성 물질 함량 측정.
- 페놀성 화합물은 식품계에 널리 분포되어 있는 2차 대사산물의 하나로서 다양한 구조와 분자량을 가지며, 이들은 phenolic hydroxyl 기를 가지고 있기 때문에 단백질 등의 거대 분자들과 결합히는성질을 가지며, 항산화, 항균생물 활성 효과 등의 생리활성 기능을 가지는 것으로 알려져 있어 추출물에 함유된 페놀성 화합물의 함량을 조사하였다. 추출물의 phenol 함량을 측정한 결과 Table 1과 같이 열수 추출물은 237.
대상 데이터
- 시약. Butylhydroxytoluene(BHT), yeast extract, beef extract, pyruvic acid, P-carotene, H, 02, linoleic acid, tween 40, a, a- diphenyl-p-picrylhydrazyl(DPPH), xanthine oxidase(XOase), xanthine, angiotensin converting enzyme(ACE), hippuryl-L- histidyl-L-leucine(HHL), hippuric acid 등은 Sigma 사(USA)의 특급시약을 사용하였으며, Folin-ciocalteu시약, trichloroacetic acid(TCA), NajCOj, HC1 등은 일제 특급시약을 사용하였다.
- 실험에 사용한 균주는 위, 십이지장궤양 윈인균인 H. pylori로서 표준균주인 ATCC 43504를 사용하였다. H.
이론/모형
- ACE 저해효과 측정은 Cushman 등의 방법에 의하여 행하였다. 즉, 반응구는 0.
- APF는 Andarwulan 과 Shetty의 방법으로 측정하였다. 10 mg |3-carotene을 50 ml의 chloroform에 녹인 용액 1 m/에 20 linoleic acid, 184)1/ Tween 40과 50 ml H2O2를 가하여 emulsion을 만들고, 5 m/의 emulsion에 시료용액 100㎕를 혼합하여 vortex로 잘 섞어준 뒤 50℃에서 30분간 방치한 후 식혀주고, 470nm에서 흡광도를 측정하였다.
- XOase 활성저해 측정법은 Stirpe와 Crote29) 의 방법에 준하여 측정하였다. 즉, 반응구는 0.
성능/효과
- 있다.33)추출물의 ACE에 대한 저해효과를 측정함으로서 항고혈압 효과를 살펴본 결과 Table 4와 같이 열수추출군에서 만 19.2%의 ACE에 대한 저해력을 나타내어 고혈압의 예방 효과는 비교적 낮은 것을 알 수 있었다.
- 따라서 항산화물질의 전자공여능을 측정할 때는 DPPH 법이 편리하다고 알려져 있으나, 색소가 함유된 추출물의 경우 DPPH법의 적용에는 많은 경험이 요구된다. APF 의 측정을 위하여 [3-carotene을 첨가한 linoleic acid emulsion을 사용하여 세인트존스워트 추출물의 항산화력을 측정한 결과 Table 2에서와 같이 ethanol 추출군이 APF 1.8정도의 antioxidant protection factorg- 나타내 지용성물질에 대한 항산화력이 높은 것으로 확인되었으나 열수 추출물의 경우 APF가 0.9로 지용성 물질에 대한 항산화력이 거의 없는 것으로 나타났다. Duval과 Shetty32)는 pea에 함유되어있는 phenol성 물질의 APF가 1.
- DPPH 라디칼에 대한 소거 활성은 Table 2와 같이 열수추출물과 알콜추출물의 전자공여 능이 95.0%, 95.2%의 값을 나타내었다. 강 등은 전자공여능이 phenolic acids와 flavonoids 및 기타 phenol성 물질에 대한 항산화작용의 지표라 하였으며, 이러한 물질은 환원력이 큰 것 일수록 전자공여능이 높다고 하였다.
- H. pylori^ 대한항균효과를 즉정한 결과 Table 3에서와 같이 열수 추출물의 경우 clear zone이 관찰되지 않았으며, 알콜추출물의경우 100 μg/m/의 농도에서 11 mm의 clear zone이 나타나기 시작하여 150|ig/m/의 농도에서 13 mm의 clear zone이 관찰되어 저해활성이 높은 것으로 판단되었다.
- 함량을 조사하였다. 추출물의 phenol 함량을 측정한 결과 Table 1과 같이 열수 추출물은 237.4± 13.2㎍/ml였으며, 알콜추출물은 246.0± 10.5 jig/mZ로 알콜 추출물의 phenol 함량이 다소 높게 나타났다. Clark 등은 식물체에 함유된 페놀성 물질이 항균활성을 나타낸다고 보고하였는데, 세인트존스워트의 각 추출물에서는 페놀성 물질의 함량이 비교적 높게 나타나 천연항균제 및 생리활성 물질로의 이용 가능성을 추측할 수 있었다.
- 통풍(gout)의 발생기작에 관여하는 XOase에대한 추출물의 억제 효과를 살펴 본 결과 Table 5어서와 같이 열수 추출물은 84.8%, 알콜추출물은 100%의 완벽한 저해 효과를 나타내어 XOase에 대한 높은 저해효과를 관찰할 수 있었다.이러한 결과로 볼 때 세인트존스워트에 함유된 phenol성 물질은 gout의 예방 또는 생약 치료제로서의 이용 가능성이 매우 높다고 할 수 있겠다.
후속연구
- pylori의 정확한 오염경로나 전염원에 대하여서는 아직까지정확히 증명된 바는 없지만 경구적 방법에 의하여 전달 감염되는 것으로 추정하고 있다. 우리나라 성인의 약 80% 정도가 이 균에 감염되었으나 임상증상을 나타내지 않고 있다가, 어떠한 발병촉진인 자의 영향으로 만성적인 위십이지장 궤양을 유발하는4) H. pylori 자체에 대한 연구와 병행하여 H. pylori^ 대한 근본적인 예방이나 치료를 위한 새로운 방법이 시도 될 필요가 있다.
- 8%, 알콜추출물은 100%의 완벽한 저해 효과를 나타내어 XOase에 대한 높은 저해효과를 관찰할 수 있었다.이러한 결과로 볼 때 세인트존스워트에 함유된 phenol성 물질은 gout의 예방 또는 생약 치료제로서의 이용 가능성이 매우 높다고 할 수 있겠다.
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