가자 물 추출물과 70% 에탄올 추출물을 acetone, hexane, chloroform, butanol 용매로 순차 분획하였다. 용매 순차 분획물중 butanol분획물이 E. coli, S. typhimurium, P. aeruginosa, B. subtilis, S. aureus, L. monocytogenes균종에 대해 가장 좋은 항균활성과 추출수율을 나타내었다. 또한 polyphenol표준물질 중 pyrogallol이 항균활성 실험결과 가장 좋은 활성을 나타내었다. 가자의 물 추출물과 에탄올 추출물을 13가지 표준품을 사용하여 HPLC 분석한 결과, pyrogallol의 수치가 가장 높게 나타났다.
가자 물 추출물과 70% 에탄올 추출물을 acetone, hexane, chloroform, butanol 용매로 순차 분획하였다. 용매 순차 분획물중 butanol분획물이 E. coli, S. typhimurium, P. aeruginosa, B. subtilis, S. aureus, L. monocytogenes균종에 대해 가장 좋은 항균활성과 추출수율을 나타내었다. 또한 polyphenol 표준물질 중 pyrogallol이 항균활성 실험결과 가장 좋은 활성을 나타내었다. 가자의 물 추출물과 에탄올 추출물을 13가지 표준품을 사용하여 HPLC 분석한 결과, pyrogallol의 수치가 가장 높게 나타났다.
Antibacterial activities of water and 70% ethanol extracts of Terminalia chebula Retz were investigated. Fractions were prepared by step-wise fractionation of water and 70% ethanol extracts using acetone, hexane, chloroform and butanol. Butanol fraction showed best antibacterial activities. Water an...
Antibacterial activities of water and 70% ethanol extracts of Terminalia chebula Retz were investigated. Fractions were prepared by step-wise fractionation of water and 70% ethanol extracts using acetone, hexane, chloroform and butanol. Butanol fraction showed best antibacterial activities. Water and 70% ethanol extracts of T. chebula Retz. had significantly high pyrogallol content among 13 phenolic compound analysed by HPLC, and pyrogallol (standard) showed highest activities against several food spoilage microorganism.
Antibacterial activities of water and 70% ethanol extracts of Terminalia chebula Retz were investigated. Fractions were prepared by step-wise fractionation of water and 70% ethanol extracts using acetone, hexane, chloroform and butanol. Butanol fraction showed best antibacterial activities. Water and 70% ethanol extracts of T. chebula Retz. had significantly high pyrogallol content among 13 phenolic compound analysed by HPLC, and pyrogallol (standard) showed highest activities against several food spoilage microorganism.
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제안 방법
3-HC1) in watei였으며, B 용액은 100% methanol을 사용하였으며, 유속은 2mL/min, 온도는 4*C 0이였다. Gradient 는 B 용액이 초기에 0%에서 시작하여 80min에 75%가 되도록 linear program을 사용하였으며, UV 280nm에서 확인하였다. 이때 injection volumee 10%농도로 제조한 시료 500μL를 injection 하였다.
Louis, MO, USA)를 사용하였다. HPLC분석 장비는 Jasco system을 사용하였으며, 분석에 사용된 gradient는 A 용액이 초기에 100%에서 시직하여 40 min에 25%가 되도록 linear progranml을 사용하였으며, 45 min에 0%, 50 min에 50%, 60 min에 100%로 하였다. 이때 injection volumee 20 pL 이였다.
, Ibkyo, Jq5an)에 20 gL 첨가하고, 37℃ incubator에 18-24시간동안 배양한 후, 억제환(mm) 직경으로 항균활성을 측정하였다(10, 11). polyphenol의 항균활성 실험은 phloroglucinol, pyrogallol, siniapic acid, vanillic acid, frans4-hydroxy-3-methoxy-cinnamic acid를 10, 5, 2.5, 1 mg/mL의 농도로 제조하여 실험하였다. 가자 HPLC(AKIA) 분획물의 항균활성 실험은 액체 배지 희석법으로 spectrophotometer(Jasco, Tokyo, Japap)를 사용하여 650nm에서 확인하였다.
5, 1 mg/mL의 농도로 제조하여 실험하였다. 가자 HPLC(AKIA) 분획물의 항균활성 실험은 액체 배지 희석법으로 spectrophotometer(Jasco, Tokyo, Japap)를 사용하여 650nm에서 확인하였다.
가자 물 추출물 50 g과 70% 에탄올추출물 60 g을 1 L의 증류수에 녹인 후, acetone, hexane, chloroform, butanol의 용매를 순차적으로 분획하여 30mg/mL의 농도로 제조한 뒤, 20㎕ 첨가하여, 3648시간 동안 6종종의 미생물에 대해 항균활성을 실험하였다. 그 결과 butanol분획물이 가장 뛰어난 항균활성을 나타내었다.
가자를 분쇄하여 10배량의 증류수와 70% 에탄올을 가하여 2시간 동안 환류추출, 여과하여 (Whatman No 2), Evaporator(Heidolph 4000, Germany)로 감압 농축한 후, 동결 건조하여 실험에 사용하였다. 가자 물 추출물과 에탄올 추출물 50 g을 각각 1 L의 증류수에 넣어 녹인 후, acetone, hexane, chloroform, butanol의 극성도차를 이용하여 순차적으로 분획, 시료를 제조하였다(Fig. 1).
가자 물 추출물의 butanol 분획물을 10%농도로 제조한 후,500 μL 를 AKTA explorer system(Amersham Pharmacia, Uppsala, Sweden)에 주입 하여 /dac 218(Hesperia, USA) column 으로 분획하였다. 가자 butanol 분획의 chromatogram 양상은 3000mAU 이상의 peak를 포함하여 19개의 peak를 나타내었으며, 8번째 peak에서 Rt.
가자 물 추출물의 butanol이획분 분획은 AKTA explorer system (Ameisham Pharmacia, Uppsala, Sweden)을 사용하였으며, column 은 V/dac 218(Hesperia, USA)을 사용하였다. 분획 용매와 조건은 A 용액, 7% methanol이 함유된 50 mM sodium phos-phate(pH 3.
가자 물, 70% 에탄올 추출물의 polyphen이 분석은 각 표준 곡선의 calibration curve를 정한 후, 시료의 면적을 환산하여 정량 분석하였다. 가자 동결건조물을 1 mg/mL로 제조한 후, 0.
)는 사군자과 (Cambretaceae)에 속하는 가자나무의 성숙과실을 건조한 것으로 chebulic, chebulin 및 tannin이 주성분으로 그 중 tannine 20-40% 정도로 많은 양이 함유되어 있는 것으로 보고되고 있으며, 항균활성에 뛰어난 생약재로 알려져 있다<9). 본 실험은 가자 물, 70% 에탄올추출물을 HpLC분석 및 분획하여 항균 활성을 조사하였다.
2). 이를 fraction l(peak 1, 2), fraction2(peak 3, 4, 5, 6, 7), fraction 3(peak 8), fraction 4(peak 9), fraction 5(peak 10, 11, 12, 13, 14, 15), fraction 6(peak 16, 17, 18, 19)의 6 개 구간으로 분취하여 10mL로 농축한 뒤, E. coli, S. aureus, L. monocytogenes를 대상으로 18시간 동안 액체배지 희석법으로 항균활성을 확인하였다. 그 결과, L.
폴리페놀의 항균활성실험에 사용한 표준품온 phloroglucinol,pyrogallol, siniapic acid, vanillic acid, ZraM1y4-hydroxy-3-meth-oxycinnamic acid로, 50% 에탄올을 사용하여 10, 5, 2.5, 1 m잉/mL의 농도로 제조하여 항균활성 실험을 실시하였다. 그 결과, pyrogallol0] 10mg/mL의 농도에서 S.
항균 활성 시험 평판배지의 조제는 각각의 생육배지를 멸균하여 기층용 배지(agar L5%)를 petridish에 응고시킨 후, 각 균주를 1% 접종하여 혼합한 중층용 배지(agar 0.75%)를 이에 분주하여 제조하였다, 가자 용매 분획물을 30mg/mL 농도로 제조하여, paper disc((|> 8 mm, Advantec, Ibyo Roshi Kaisha, Ltd., Ibkyo, Jq5an)에 20 gL 첨가하고, 37℃ incubator에 18-24시간동안 배양한 후, 억제환(mm) 직경으로 항균활성을 측정하였다(10, 11). polyphenol의 항균활성 실험은 phloroglucinol, pyrogallol, siniapic acid, vanillic acid, frans4-hydroxy-3-methoxy-cinnamic acid를 10, 5, 2.
대상 데이터
45 μm membrane filter(Sartorius AQ Germany)로 여과하여 분석하였다. 분석에 사용된 polyphenol 표준시약들은 phloroglucinol, pyrogallol, protocatechuic acid, p-hydroxybenzoic acid, catechin, vanillic acid, syringic acid, 4-methylcatechol, p-coumarilic acid, /r<?ns-4-hydroxy-3-methoxycinnamic acid, siniapic acid, 3, 4-dimethoxybenzoic acid 및 p-anisic acid(Sigma, St. Louis, MO, USA)를 사용하였다. HPLC분석 장비는 Jasco system을 사용하였으며, 분석에 사용된 gradient는 A 용액이 초기에 100%에서 시직하여 40 min에 25%가 되도록 linear progranml을 사용하였으며, 45 min에 0%, 50 min에 50%, 60 min에 100%로 하였다.
본 실험에 사용한 가자(Terminalia chebula Retz.)는 2003년 5 월 건조된 상태로 금산약초시장(Geumsan, Korea)에서 구입하여 사용하였다. 가자를 분쇄하여 10배량의 증류수와 70% 에탄올을 가하여 2시간 동안 환류추출, 여과하여 (Whatman No 2), Evaporator(Heidolph 4000, Germany)로 감압 농축한 후, 동결 건조하여 실험에 사용하였다.
사용하였다. 사용한 배지는 BHI와 Tryptic soy(Difco,MD, USA)를 사용하였다.
항균 활성 실험에 사용한 균주는 slant 배지에서 배양한 균주 1 백금이를 취하여 각각의 10mL의 broth 배지에 접종하고, 37, C의 incubator에서 18-24시간 동안 배양하여 사용하였다. 항균 활성 시험 평판배지의 조제는 각각의 생육배지를 멸균하여 기층용 배지(agar L5%)를 petridish에 응고시킨 후, 각 균주를 1% 접종하여 혼합한 중층용 배지(agar 0.
6 의 근사한 값으로 생육이 억제되었으며, fraction간의 큰 차이는 보이지 않았다. E. coli 균주는 6시간 동안 배양한 결과, 대조구를 제외한 fiaction에서 0.2 이하의 흡광도 값을 나타내었으며, 시간에서는 fraction 3>5>2>1>4>6> control 순으로 생육억제를 나타내었다. 또한, S.
분획하였다. 가자 butanol 분획의 chromatogram 양상은 3000mAU 이상의 peak를 포함하여 19개의 peak를 나타내었으며, 8번째 peak에서 Rt. 28.68 min, area값, 12, 004.0310 mAU로 가장 높게 나타났다(Fig. 2). 이를 fraction l(peak 1, 2), fraction2(peak 3, 4, 5, 6, 7), fraction 3(peak 8), fraction 4(peak 9), fraction 5(peak 10, 11, 12, 13, 14, 15), fraction 6(peak 16, 17, 18, 19)의 6 개 구간으로 분취하여 10mL로 농축한 뒤, E.
46)의 retention time을 나타내었다(Table 5). 가자 물 추출물과 에탄올추출물을 HPLC 분석한 결과, 총 peak 면적 중에서 13개의 polyphenoL으로 정량할 수 있는 비율은 물 추출물이 27.53%, 70% 에탄올추출물이 2747%를 나타내었으며, 그 주요성분으로는 plHoroghicinoL pyrogallol, protocatechuic acid, catechin, vanillic acid, 4-methylcatechol, Zrans-4-hydroxy-3-methoxycinnamic acid 및 siniapic acid로 나타났다. 가자의 물 추출물의 경우 총 peak(27.
가자 열매를 blender로 마쇄한 후, 물 과 70% 에탄올을 사용하여 비등점에서 2시간 동안 추출한 결과, 32.38g 과 39.56g 을 얻었다. 물 50 g과 70% 에탄올 추출물 60 g을 acetone, hexane, chloroform, butanol으로 극성 분획한 결과, 물 추출물의 경우 acetone 6.
그 결과 butanol분획물이 가장 뛰어난 항균활성을 나타내었다. 즉, 물 추출물의 경우 E.
monocytogenes를 대상으로 18시간 동안 액체배지 희석법으로 항균활성을 확인하였다. 그 결과, L. monocytogenes 균주는 6시간동안 배양했을 때 흡광도 값이 0.6-0.8을 나타내었으며, 18시간에는 대조구를 제외한 모든 Auction에서 흡광도 0.6 의 근사한 값으로 생육이 억제되었으며, fraction간의 큰 차이는 보이지 않았다. E.
5, 1 m잉/mL의 농도로 제조하여 항균활성 실험을 실시하였다. 그 결과, pyrogallol0] 10mg/mL의 농도에서 S. trypimurium 의 균주를 제외한 5종의 균주에서 25 mm 이상의 억제환을 나타내어 다른 폴리페놀과 비해 상당히 좋은 활성을 나타내었다(Table 4). 가자를 methanol과 a* gone 로 추출하여 MS와 NMR분석을 실시한 결과, caffeic acid, vanillic acid, p-coumaric acid, phloroglucinol 및 pyrogall이이 확인되었으며, flavonoids
53%)의 9%를 차지하는 pyrogallol이 36, 735 mg%로 가장 높게 나타났고, trans-5-4-hydroxy-3-methoxy-cinnamic acid(14, 509 mg%), vanillic acid(7, 428 mg%), protoate-chole(6, 667 mg%), phloroglucinol(5, 270 mg%)A5. 나타났으며, 가자 에탄올추출물의 총 peak(27.47%)에서 pyrogallol0] 가장 높은 28, 971 mg%였으며, T4-hydroxy-3-methoxy cinnamon(24, 340 mg%), catechin(5, 814mg%)으로 나타났다(Eble 6). Nepka 등 (18)의 연구에 따르면 가자 열매를 HPLC와 LC-MS로 분석한 결과 가자추출물의 주성분은 tannin 성분으로서 chebulinic acid 가 butanol분획에서 확인되었음을 보고하였고, tamnin이외에 6가지 종류의 polyphen이성분을 확인하였다.
물 추출물의 항균활성과 유사한 활성을 나타내었다(Table 2). 또한 butanol분획물을 농도별로 제조, 20nL 첨가하여, 항균활성을 살펴본 결과, 5,000ug/mL의 농도에서 대부분 15 mm 이상의 항균활성을 나타내었으며, 100 gg/ mL 의 농도에서는 70% ethanol추출물의 butanol분획물이 6종의 미생물에 대해 9mm 이상의 항균활성을 나타내었다{Table 3). Lee 등(9)의 연구 결과에 따르면, 가자 methanol추출물을 nhexane, ethylether, ethyl acetateS.
2 이하의 흡광도 값을 나타내었으며, 시간에서는 fraction 3>5>2>1>4>6> control 순으로 생육억제를 나타내었다. 또한, S. 균주의 결과는 E. coll 균주와 유사한 양상을 보였으며, 18시간 배양결과 fraction 4>1>6> 5>3>2>control 순의 생육억제 양상을 나타내었다(Fig. 3, 4, 5). 이와 같은 결과는 각각의 peak에 함유되어 있는 polyphenol 이 항균활성에 관여하여 각 병원성 미생물에 대한 항균 활성이 나타나는 것으로 사료된다.
56g 을 얻었다. 물 50 g과 70% 에탄올 추출물 60 g을 acetone, hexane, chloroform, butanol으로 극성 분획한 결과, 물 추출물의 경우 acetone 6.8 g, hexane 0.4 g, chloroform 0.2 g, butanol 28.4 g, 물 14.2 g으로 butanol과 물 분획물이 대부분을 차지하였으며, 70% 에탄올 추출물의 경우 acetone 1.1 g, hexane 0.03 g, chloroform 0.57 g, butanol 33.9 g, 물 24.3 g으로 물 추출물과 유사한 결과를 나타내었다(Fig. 1). 이는 가자 70% methanol 추출물 30 g을 가지고 n-hexane, chloroform, butanol으로 극성 분획하여 n-hexane 0.
실험에 사용한 polyphenol 표준시약들을 HPLC 분석한 결과,phloroglucinol(2.89), pyrogallol(3.75)s protocatechuic acid(7.52), p-hydroxybenzoic acid( 10.93), catechin( 11.65), vanillic acid (13.35), syringic acid(15.O3), 4-methylcatechol( 15.58), p-cou-marilic acid(l7.70), Zrans-4-hydroxy-3-methoxycinnamic acid (19.42), siniapic acid(19.82), 3, 4-dimethoxybenzoic acid(19.96) S.t: Salmonella typhimurium, L.m: Listeria 및 p-anisic acid(23.46)의 retention time을 나타내었다(Table 5). 가자 물 추출물과 에탄올추출물을 HPLC 분석한 결과, 총 peak 면적 중에서 13개의 polyphenoL으로 정량할 수 있는 비율은 물 추출물이 27.
분획하여 항균활성 실험을 실시한 결과, 100-2,000 μg/mL의 농도로 제조된 가자 methanol추줄물이 Bacteriodes fragilus, Salmonella typhimurimn, Eubacterium limosum, Clostridium perfringens의 균주의 생육을 억제시켰으며, 용매 분획물에 있어서는 Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Eubacterium limosum, Bacteriodes fragilus, Salmonella typhimwimn의 균주에 대해서 용매분획물간의 유의적인 차이를 보이지 않았다고 보고하였다. 이러한 결과는 가자를 용매별로 분획하여 항균활성을 검토해본 결과, 항균 spectrum 이광범 위한 것으로 나타났으며 , 생 약자원으로부터 Clostidium perfringens의 생육 억제를 검색한 결과, 물 acetone, ethyl acetate 및 butanol 추출물이 모두 항균활성을 나타내었다. 또한 식물 체내에 존재하는 항균성 물질들은 대부분 단일 물질이 아니기 때문에 여러 종류의 유기용매에 의해서 추출된다고 보고하였으며, 본 연구에서도 유사한 연구결과를 나타내었다(13-15).
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