살균소독제의 살균소독력 평가를 위한 표준시험법을 확립하기 위하여 세균현탁액 시험법(bacterial suspension test)에 대해 연구하였다. 살균소독력은 G(-)인 E. coli ATCC 10536과 G(+)인 S. aureus ATCC 6538에 대하여 $20{\pm}1^{\circ}C$에서 $5min{\pm}10^{\circ}sec$간 반응하였을 때 초기근수를 5 log이상 감소시키고, 또한, 시험검증조건을 만족하는지를 검토하여 시험법을 확립하였다. 유통 중인 살균소독제 제품 36종에 대하여 확립된 시험법으로 살균소독력을 시험한 결과 모든 살균소독제는 제조자가 제시한 사용농도에서 살균소독력을 나타내었으며, 주요 식중독 균에 대한 살균효과도 관찰되었다. 확립된 시험법은 살균소독력을 측정하는 국가표준시험법으로서 살균소독제의 살균소독력 평가에 적합하였다.
살균소독제의 살균소독력 평가를 위한 표준시험법을 확립하기 위하여 세균현탁액 시험법(bacterial suspension test)에 대해 연구하였다. 살균소독력은 G(-)인 E. coli ATCC 10536과 G(+)인 S. aureus ATCC 6538에 대하여 $20{\pm}1^{\circ}C$에서 $5min{\pm}10^{\circ}sec$간 반응하였을 때 초기근수를 5 log이상 감소시키고, 또한, 시험검증조건을 만족하는지를 검토하여 시험법을 확립하였다. 유통 중인 살균소독제 제품 36종에 대하여 확립된 시험법으로 살균소독력을 시험한 결과 모든 살균소독제는 제조자가 제시한 사용농도에서 살균소독력을 나타내었으며, 주요 식중독 균에 대한 살균효과도 관찰되었다. 확립된 시험법은 살균소독력을 측정하는 국가표준시험법으로서 살균소독제의 살균소독력 평가에 적합하였다.
Bacterial suspension test was used to establish Standardization Test Method to investigate bactericidal activity of disinfectant/sanitizer product. Using acceptable verification methodology, test substance showing 5 log or higher reduction in viable count against Escherichia coli ATCC 10536 and Stap...
Bacterial suspension test was used to establish Standardization Test Method to investigate bactericidal activity of disinfectant/sanitizer product. Using acceptable verification methodology, test substance showing 5 log or higher reduction in viable count against Escherichia coli ATCC 10536 and Staphylococcus aureus ATCC 6538, representing Gram-negative and -positive bacteria, respectively, under test conditions for $5\;min{\pm}10\;sec\;at\;20{\pm}1^{\circ}C$ was considered to have sanitizing capability. All disinfectant/sanitizer products tested under manufacturer's recommended in-use condition gave good reduction values against major food-poisoning bacteria. This standardized method was valuable for evaluating efficacy of disinfectants/sanitizers and could be used as Standardization Test Method for assessing bactericidal activity
Bacterial suspension test was used to establish Standardization Test Method to investigate bactericidal activity of disinfectant/sanitizer product. Using acceptable verification methodology, test substance showing 5 log or higher reduction in viable count against Escherichia coli ATCC 10536 and Staphylococcus aureus ATCC 6538, representing Gram-negative and -positive bacteria, respectively, under test conditions for $5\;min{\pm}10\;sec\;at\;20{\pm}1^{\circ}C$ was considered to have sanitizing capability. All disinfectant/sanitizer products tested under manufacturer's recommended in-use condition gave good reduction values against major food-poisoning bacteria. This standardized method was valuable for evaluating efficacy of disinfectants/sanitizers and could be used as Standardization Test Method for assessing bactericidal activity
* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.
제안 방법
살균소독력 평가를 위한 시험온도 및 접촉시간 설정은 우 유 가공공장 등 일부 식품공장에서는 충분한 살균소독에 10분 이상 요구되는 경우(20)도 있어, 일정한 시험조건 한가지만을 가지고 실험하여 살균소독력의 유무를 판단한다는 것은 어려운 것이 사실이다. 그러나 이번 연구에서는 유럽연합에서 제시한 조건 중 국내실정에 맞도록 평가방법을 설정하기 위하여 시 험온도 및 접촉시간을 20±1℃(:, 5min±10sec를 기본적인 조건 으로 선택하였고 식품제조 기구 등이 충분히 세척되지 않은 조건을 모사하기 위하여 알부민(오염조건: 3g/L, 청정조건: 0.3 g/L)을 첨가하여 유기물에 의한 간섭조건을 인위적으로 만들었다.
이 인정제도에 따라 모든 기구 등의 살균소독제는 AOAC(2-4), CEN(5, 6) 등 공인된 시험방법으로 용법 및 용량에 따른 살균소독력이 있음을 증명하도록 하고 있으나 시험방법에 따라 상이한 결과가 나타날 수 있어 살균소 독제 인정기준의 적용과 살균소독제의 제조 및 사후관리를 위해 살균효과를 평가하는 표준화된 방법이 확립될 필요가 있다. 따라서 제외국의 살균소독력 시험방법과 국내의 미생물시험법 을 토대로 살균소독력 시험방법의 문제점과 타당성을 검토하여 국내 사용환경에 맞도록 살균소독제의 살균소독력을 정확 히 평가할 수 있는 방법을 마련하고, 확립된 시험방법으로 기 구 등 살균소독제로서 판매하고자 하는 제품의 살균소독력을 평가하였다.
이 중화반 응혼합액 1mL씩을 2개의 페트리접시에 각각 넣고 TSA를 분 주하여 잘 섞은 후 36±1℃에서 24시간 배양하여 발생한 집락 수로부터 살균소독력을 계산하였다. 또한 살균소독력 시험과 동시에 다음의 검증시험을 수행하였다.
단, 유효성분이 에탄올인 제품의 경우 알부민과 침전현상이 발생하여 이 경우에만 효모추출물로 대체 사용하였다. 또한 살균소독제는 보통 물로 희석하여 사용하고 있으며 이때 경도가 살소독력에 영향을 미칠 수 있으므로 우리나라의 먹는 물 관리법에 따라 경도가 300㎎/㎏ CaCC>3이 되도록 조정하였다.
살균소독제 제품 중 염소계 1종, 요오드계 1종, 4급암모늄계 1종, 알코올계 1종등 총 4종의 살균소독제 제품에 대하여 E.coli ATCC 10536, S. aureus ATCC 6538외에 식중독 세균인 L monocytogenes ATCC 19111, E. coli 0157 ATCC 43888, Y. enterocolitica ATCC 23715, B. cereus ATCC 11778에 대한 살균소독력을 평가하였다.
시험용액은 살균소독제 사용농도의 1.25배가 되도 록 경수로 희석하였으며, 살균소독력이 나타나지 않는 부분이 포함되도록 사용농도 이하 농도의 것도 제조하여 시험하였다.
이 액 1 mL를 중화제 8 mL와 물 1 mL가 들어있는 멸균시험관에 첨 가하고 20±1℃(2에서 5 mini 10 sec 동안 중화시켰다. 이 중화반 응혼합액 1mL씩을 2개의 페트리접시에 각각 넣고 TSA를 분 주하여 잘 섞은 후 36±1℃에서 24시간 배양하여 발생한 집락 수로부터 살균소독력을 계산하였다. 또한 살균소독력 시험과 동시에 다음의 검증시험을 수행하였다.
확립된 살균소독력 시험법의 검증을 위하여 살균소독제 제 품 36종에 대하여 살균소독력 시험과 검증시험 평가를 실시하였다.
희석액을 넣은 멸균용기에 활성배양된 시험균을 접종하여 잘 풀어준 뒤 densimeter(Biomerieux, Italy)을 이용하여 현탁액의 O.D.(Optical density)값을 측정하고 이 O.D.값을 희석액으로 조정하여 생균수가 l.5X108-5.0XI08 cfu/mL가 되 도록 하여 20± 1℃ 항온수조에서 2시간 방치하였다.
대상 데이터
간섭물질로는 알부민(Sigma-Aldrich Co, St. Louis, Mo, USA) 용액(청정조건: 3g/L, 오염조건: 30g/L, Sigma)을 여과 멸균하여 사용하였으며 유효성분이 알코올계인 경우 효모 추출물(100g/L, 멸균, Difbo, sparks, USA)을 사용하였다.
aureus ATCC 6538이 살균소독력을 측정하는 기본 특성균주로 평가되었다. 따라서 살균소독력 평가를 위한 시험 균주로는 G(-)와 G(+)를 대표하는 균으로 E. coli ATCC 10536 과 S. aureus ATCC 6538을 선택하였다.
실험에 사용된 Escherichia coli ATCC 10536, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Listeria monocytogenes ATCC 19111, E. coli 0157 ATCC 43888, Yersinia enterocolitica ATCC 23715, Bacillus cereus ATCC 11778는 보건복지부 질병 관리본부로부터 분양받아 사용하였다. 각 균주는 tryptone soya broth(Oxoid Ltd.
이 액 1 mL씩을 2개의 페트리접시에 각각 넣고 TSA 를 분주하여 잘 섞은 후 36±1℃에서 24시간 배 양하였다. 이때 계수된 집락의 수가 세균현탁액의 0.05배수 미 만일 경우 다른 중화제를 사용하였다.
성능/효과
AOAC 시험방법에 기술된 시험조건 등이 가장 기본적인 조 건만을 제시하고 실제 사용에 영향을 미치는 요인에 대한 사 항은 제시되어 있지 않기 때문에 확립된 시험방법으로 살균소 독력 평가를 수행할 경우 많은 제품이 기준에 미달할 것으로 예상되었으나 실제로 4급암모늄계 13종, 염소계 7종, 알콜계 9 종, 요오드계 등 기타 7종 등 총 36종의 살균소독제에 대한 살 균소독력을 평가한 결과 모든 제품이 식약청 고시제 2004-87 호(2004. Ⅱ. 23.)에 따른 살균소독력 기준(20±1℃(2에서 5분±10초 동안 처리했을 때 E. coll ATCC 10536(또는 ATCC 11229) 및 S. aureus ATCC 6538의 균에 대하여 초기균수(cfii/ mL)를 99.999% 이상 감소시켜야 한다)을 만족하는 것으로 나타났다. 오히려 Fig.
cereus ATCC 11778에 대한 살 균소독력을 조사한 결과 Table 2와 같다. E. coli ATCC 10536, S aureus ATCC 6538에 살균소독력을 나타내는 살균소독제는 다른 식중독 유발세균에 대해서도 모두 살균소독력을 보였다. 이러한 시험법과 기준으로 살균소독력이 확보된 살균소독제는 식중독 예방에 도움이 될 것으로 판단된다.
Langsrud와 Sundheim( 10)은 중화제로 사용되는 thiosulfate가 일부 S spp. 등 균의 성장을 저해하고 저농도의 Tween 80은 살균소독력을 증가시킬 수 있으므로 중화제 선정 은 반드시 검증이 필요하다고 보고한 바 있으나 실제로 AOAC 의 중화제인 type 6과 유럽연합에서 제시한 중화제중 thiosulfate 염과 polysorbate 80이 모두 들어있는 type 1의 중화제가 살균 소독제 제품 36종 중 32종에서 중화가 가능하였으며 검증시험 에도 적합한 것으로 나타나 Tween 80이 5mg/mL 존재할 경우 thiosulfhte의 균에 대한 저해 효과가 감소함을 보인 Kayser and van der Ploeg(21)의 결과와 일치하였다. type 1외 다른 중화제 를 사용한 살균소독제는 알콜계 1종, 염소계 3종, 산소계 1종 으로서 이는 살균소독제가 중화제에 대한 감도가 낮다는 것으로 유효성분보다는 보조성분 때문인 것으로 보인다.
후속연구
이러한 시험법과 기준으로 살균소독력이 확보된 살균소독제는 식중독 예방에 도움이 될 것으로 판단된다. 그러나 세균현탁액 시험법으로는 우리나라에서 식중독을 일으키는 원인균 중 Vibrio parahaemolyticus에 대한 살균소독력 평가가 어려워 이에 대한 대책마련과 균주 및 배양조건 등이 살균소독력에 영향을 미칠 수 있다는 보고(10)가 있어 분리균주에 대한 향후 연구가 필요 할 것으로 보인다.
999% 이상 감소시켜야 한다)을 만족하는 것으로 나타났다. 오히려 Fig. 2와 갇이 제조자가 제시한 희석농도(100%) 보다 낮은 농도에서 99.999% 이상의 살균소독력이 나타나는 제품이 상당수 있어 과도한 살균소독제 사용으로 인한 비용증 가, 식품오염 가능성 확대, 독성학적 고려, 환경오염 등의 문제를 야기할 수도 있으므로 살균소독제의 실제 사용 환경과 살 균하려고 하는 대상 미생물의 종류에 따라 살균소독제가 적절 하게 사용되는지를 확인하기 위한 연구가 필요할 것으로 보인다.
포장에 사용되는 살균소독제가 신설되어 식품첨가물로서 관리할 수 있는 법적 근거가 마련되었으며 식품위생법 제7조 2항 및 같은 법 시행규칙 제4조에 따라 2003년 12월부터 기구 등의 살균소독제 제품에 대하여 한시적 기준 및 규격 인정제 도를 시행하게 되었다. 이 인정제도에 따라 모든 기구 등의 살균소독제는 AOAC(2-4), CEN(5, 6) 등 공인된 시험방법으로 용법 및 용량에 따른 살균소독력이 있음을 증명하도록 하고 있으나 시험방법에 따라 상이한 결과가 나타날 수 있어 살균소 독제 인정기준의 적용과 살균소독제의 제조 및 사후관리를 위해 살균효과를 평가하는 표준화된 방법이 확립될 필요가 있다. 따라서 제외국의 살균소독력 시험방법과 국내의 미생물시험법 을 토대로 살균소독력 시험방법의 문제점과 타당성을 검토하여 국내 사용환경에 맞도록 살균소독제의 살균소독력을 정확 히 평가할 수 있는 방법을 마련하고, 확립된 시험방법으로 기 구 등 살균소독제로서 판매하고자 하는 제품의 살균소독력을 평가하였다.
참고문헌 (21)
Korea Food and Drug Administration. Statistical Data Associated with Food Poisoning. Available from http://www.kfda.go.kr/main/ htmllservice1.htm Accessed Mar. 3, 2005
AOAC. Official Methods of Analysis of AOAC Intl. 16th ed. Method 960.09. Association of Official Analytical Chemists, Arlington, VA, USA (1995)
U. S. Environmental Protection Agency: Product Performance Test Guidelines - OPPTS 810 (1997)
U. S. Environmental Protection Agency: Microbiology Laboratory Antimicrobial Testing Methods and Procedures. Available from http.//www.epa.gov/oppbead1/methods/atmpa2z.htm Accessed Oct. 25,2004
British Standards Institution: Chemical Disinfectants and Antiseptics- Basic Bactericidal Activity-Test Method and Requirement (Phase I), European Committee for Standardization, EN 1040, UK 1997
British Standards Institution: Chemical Disinfectants and Antiseptics-Quantitative suspension test for the Evaluation of Bactericidal Activity of Chemical Disinfectants and Antiseptics Used in Food, Indestrial, Domestic, and Institutional Areas- Test Method and Requirement (Phase 2, Step 1), European Committee for Standardization, EN 1276, UK (1997)
Korea Food and Drug Administration: Korea Food Code: Seoul, Korea (2002)
Bloomfield SF, Arthur M, Klingeren BY, Pullen W, Holah JT, Elton R. An evaluation of the repeatibility and reproducibility of a surface test for the activity of disinfectants. J. Appl. Bacteriol. 76: 86-94 (1994)
Bloomfield SF, Looney E. Evaluation of the repeatability and reproducibility of European suspension test methods for antimicrobial activity of disinfectants and antiseptics. J. Appl. Bacteriol. 73: 87-93 (1992)
Langsrud S, Sundheim G. Factors influencing a suspension test method for antimicrobial activity of disinfectants. J. Appl. Microbiol. 85: 1006-1012 (1998)
Frank JF, Chmielewski RAN. Effectiveness of sanitation with quaternary ammonium compound or chlorind on stainless steel and other domestic food-preparation surfaces. J. Food Prot. 60: 43-47 (1997)
Knowles J, Roller S. Efficacy of chitosan, carvacrol, and a hydrogen peroxide-based biocide against food borne microorganisms in suspension and adhered to stainless steel. J. Food Prot. 64: 1542-1548 (2001)
Foschino R, Nervegna I, Motta A, Galli A. Bactericidal activity of chlorine dioxide against Escherichia coli in water and on hard surface. J. Food Prot. 61: 668-672 (1998)
Espigares E, Bueno A, Fernandez-Crehuet M, Espigares M. Efficacy of some neutralizers in suspension tests determining the activity of disinfectants. J. Hosp. Infect. 55: 137-140(2003)
Cho YH, Kim YS. Evaluation of safety and efficacy of sanitizers and disinfectants (II). The Annual Report of KFDA. 7: 840 (2003)
Greene AK, Few BK, Serafini JC. A comparison of ozonation and chlorination for the disinfection of stainless steel surfaces. J. Dairy. Sci. 76: 3617-3620 (1993)
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.