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문제 정의
- 더욱이, 도꼬마리의 ether 추출물과 ethyl acetate 추출물은 높은 면역증강 효과를 나타내기도 했다 [3]. 따라서 본 연구에서는 도꼬마리의 ether 및 ethyl acetate 추출물이 식물병원성 진균에 대한 항진균활성에 대하여 조사한 결과를 보고하고자 한다.
제안 방법
- PD 액체배지에도 꼬마리의 ether 추출물의 농도를 100 pg/ ml, 200 pg/ml, 300 μg/ml, 400 pg/ml 500 pg/ml 800 pg/ml로 첨가하여 시험 균주의 생육을 측정했다.
- sclerotiorum의 생육을 50% 저해시키는 도꼬마리의 ether 추출물의 농도로 표시된다. PDA 배지에서 충분히 배양된 S. sclerotiorum의 0.5 mm의 4각형으로 배지와 함께 취하여 PD 액체배지 100 ml 와 ethyl acetate에 무균적으로 접종하고, 3CTC에서 5일간 진탕배양시켰다. 액체배지에서 배양된 진균을 원심분리로 취하여 105℃에서 항량이 될 때까 지 건조시켜 중량(mg)을 측정했다.
- 5 mm의 4각형으로 배지와 함께 취하여 PD 액체배지 100 ml 와 ethyl acetate에 무균적으로 접종하고, 3CTC에서 5일간 진탕배양시켰다. 액체배지에서 배양된 진균을 원심분리로 취하여 105℃에서 항량이 될 때까 지 건조시켜 중량(mg)을 측정했다.
- 도꼬마리의 추출물의 조제는 1 kg의 잎과 열매를 조분쇄하여 1。L의 물에 넣어 끓여 필요한 량으로 농축하면서 열수 추출을 3회 반복했다. 열수 추출물을 evaporator (EYELA Co. Japan)로 농축한 추출물을 유기용매인 ether와 ethyl acetate로 각각 분별 추출했다 (2).
- . 즉, TLC (Silica gel 60F254; Merck) plate상에 ethyl acetate 추출물(50 pl/pg) 1 μ1 를 spot하여 실온에서 상승법으로 전개하여 건조한 후, 254 nm의 자외선 파장에서 조사하여 분석하였다, 전개용매로 methylene chloride 와methanol을 각각 94 : 6으로 혼합하여 사용하였다.
- 식물병원성진균에 대한 바 her와 ethyl acetate 추출물의 항진균활성은 agar diffusion법으로 측정했다. 즉, petri dish 에 배양된 시험 균주를 05 mm의 4각형으로 배지와 함께 취하여 PDA 평판배지 위에 disc 접종하여 24시간 배양한 후, 시험균주의 주위에도꼬마리 의 여:her와 ethyl acetate 추출물을 각각 300 pg/20 μ1가 첨가된 건조한 paper disc (0 ; 6 mm, Whatman Co.)를 각 시험 균주 위에 올려놓고 30C에서 48시간 정치배양했다. 항진균활성의 측정은 paper disc주위의 clear zone의 생성 유무와 inhibitory zone (clear zone)의 크기(mm)를 측정하여 항진균활성으로 나타냈다.
대상 데이터
- (고추 갈색 점무늬병균), Colletotrichum liliacearum (액운동 탄저 병 균), Glomerella cingu- lata (포도탄저 병 및 부패 병균), Aspergillus niger (사과부패 병균)와 Glomerella sp. (고추 탄저병균)을 경북농업기술원으로부터 분양받아 사용했다.
- 본 실험에 사용한 도꼬마리 (Xq湖血n? strumarium L)는 경상남도와 경상북도 지역에서 자생하는 식물을 채취하여 음건하여 사용했다. 도꼬마리의 추출물의 조제는 1 kg의 잎과 열매를 조분쇄하여 1。L의 물에 넣어 끓여 필요한 량으로 농축하면서 열수 추출을 3회 반복했다.
- 시험 균주의 생육 배지는 potato dextrose (PD) 배지 (20% infusion from potato, 2% Bacto dextrose, pH=5.6±0.2z Difco. Co., USA) 와 potato dextrose agar (PDA) 배지(20% infusion from potato, 2% Bacto dextrose, 1.5% Bacto agar, pH=5.6+02 Difco. Co. USA)를 구입하여 사용했 다.
이론/모형
- sderotiorum에 대하여 높은 항진균활성을 나타내는 ether 추출물의 ICsoe ether 추출물의 농도를 다르게 첨가한. PD 액체배지에서 배양한 시험균의 균체량을 측정하고 Lyu의 방법[6]에 따라 IC50을 계산했다.
- 식물병원성진균에 대한 바 her와 ethyl acetate 추출물의 항진균활성은 agar diffusion법으로 측정했다. 즉, petri dish 에 배양된 시험 균주를 05 mm의 4각형으로 배지와 함께 취하여 PDA 평판배지 위에 disc 접종하여 24시간 배양한 후, 시험균주의 주위에도꼬마리 의 여:her와 ethyl acetate 추출물을 각각 300 pg/20 μ1가 첨가된 건조한 paper disc (0 ; 6 mm, Whatman Co.
- 항진균 활성의 정도는 IC50 (Inhibitory concentration values, i.e. drug concentration required to inhibit viability by 50%)으로 나타냈으며, 그 측정법은 Lyu의 방법[6]에준했다. 즉, IC50은 S.
- 항진균물질의 분리는 Thin-layer chromatography (TLC)를 이용하여 분리했다..
성능/효과
- S. sderotiorum의 생육은 도꼬마리를 첨가하지 않은 배지에서 생육할 때 132 mg의 균체를 얻었으나, 100 pg/ml 도꼬마리 ether 추출물이 첨가된 배지에서는 125 mg의 균체를 얻어 약 5.3%의 생육이 억제되었다. 그리고 300 ug/ml의 도 꼬마리 ether 추출물이 첨가된 배지에서는 79.
- Table 1에 나타난 바와 같이, 도꼬마리의 ether와 ethyl acetate추출물은 고추 역 병균인 P. capsici 와 수박균핵병을 일으키는 S. sderotiorum과 사과부패병을 일으키는 A. niger 에 대하여 높은 항 진균활성을 나타내었다. 그리고 고구마 밑썩음병을 일으키는 F.
- 3에 나타난 바와 같이 8개의 밴드를 확인할 수 있었다. 각각의 밴드를 회수하여methanol에 녹인 후, 다시 감압 농축하여 항 진균활성을 확인한 결과 Rf 값이 0.87과 0.74를 나타내는 밴드에서만 항 진균활성을 나타내었고, Rf 값이 0.87 밴드에서 강한 항 진균활성이 나타났으며 Rf 값이 0.74의 밴드는 항진균 활성을 나타내었지만 항 진균활성을 상대적으로 낮게 나타내었다.
- 에 대하여도 항 진균활성을 나타내었다. 그러나 실험에 사용한 위의 5균주를 제외한 6균주에 대하여 전혀 항 진균활성을 나타내지 않았으며, 실험에 사용한 농도인 300 pg/20 U보다 2배 높은 농도인 600 ug/20 ul 을 사용했을 때도 항 진균활성은 나타내지 않았다. 도꼬마리의 추출물은 ethyl acetate 추출물보다 ether 추출물이 높은 항 진균활성을 나타내었다, 도꼬마리의 ether 추출물은 진균인 A.
- 3%의 생육이 억제되었다. 그리고 300 ug/ml의 도 꼬마리 ether 추출물이 첨가된 배지에서는 79.4 mg의 균체를 얻어 약 40%의 생육이 억제되고, 400 ug/ml이 첨가된 배지에서는 55.8 mg의 균체를 얻어 57.7%의 생육이 억제되어도 꼬마리의, eth& 추출물의 농도에 비래하여 S. sdero&rum의 생육이 억제됨을 알 수 있었다. S.
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