선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 따라서 탄저병균의 월동처, 월 동 후 포장에서의 밀도 변화, 전반의 경로 등과 각 단계 에서의 병원균의 양을 정량적으로 조사할 필요가 있다. 따라서 본 실험에서는 주요한 고추 탄저병균인 C. acutatum 을 포장에서 쉽게 분리하고, 토양과 건전 또는 이병 식물 조직상에서의 병원균의 밀도를 조사하기 위해서 C. acutatum 에 대한 반선택배지를 확립하고자 한다.
제안 방법
- 포장에서 채집한 이병고추에서의 병원균 분리와 개체수 조 사. 2003년 8월 중에 재배한 청풍명원 고추에서 고추 열매당 발병 면적률이 25% 이상(IV), 5-25% 사이(Ⅲ), 5% 미만(II), 그리고 병징을 찾아볼 수 없는 고추(I)를 채집하여 병원균을 분리하고 개체수를 조사하였다. 고추 열매 생중량의 10배(w/v)되는 증류수에 열매를 넣고 blender를 이용하여 1분간 고르게 갈았다.
- 이병 잔재물과 토양에서 병원균의 본리와 개체수 조 사. 2004년 2월 중에 전년도 고추를 재배한 포장에서 고 추의 이병 잔재물을 채취하여 위에서 기술한 방법과 동일한 방법으로 반선택 배지를 이용하여 병원균을 분리하고 개체수를 조사하였다. 또한 탄저병 발생을 확인하였던 포장에서 토양을 채취하여 병원균 분리와 개체수 조사를 실시하였다.
- 실험에 사용한 4종의 병원균은 모두 25℃의 암상태에서 배양하였다. 5일간 배 양한 병원균들의 균사 선단에서 직경 5 mm의 균사 조각을 떼어내어 5종류의 배지의 중앙에 각각 접종한 후, 동일한 조건에서 5~7일간 배양하고 균사의 직경을 조사 하였다.
- acMtatum의 균사를 긁어 수확한 후, 액체질소를 부어 마쇄 하였다. CTAB 추출 용액 (2.5 M NaCl, 0.25M EDTA (pH 8.0), 0.5M Tris-Hcl (pH 8.0), 1% polyvinylpyrrolidone- 10, 1% hexadecyl trimethyl ammonium bromide, 0.5% sodium dodesyl sullkte)을 첨가하여 65℃에서 1시간 처리 한 후, 13, 000g로 10분간 원심분리하여 상징액만을 회수하였다. 싱징액에 phenol/chloroform/IAA(v:v:v, 25:24:1) 혼합액을 처리하고 13,000g로 15분간 원심분리하여 침전한 DNA를 회수하였다.
- Pepper fhiits were evaluated as follows; I, no symptom; Ⅱ, below 5% of disease severity; in, showing disease severity between 5% and 25%; IV, above 25% of disease severity. In this experiment 3 kinds of media were used; A, PDA; B, PDA included with 100 ㎍/ml of ampicillin and tetracycline; C, PDA included 100㎍/ml of mixture both carbendazim and diethofencarb as well as 100 ㎍/ml of ampicillin and tetracycline. The colony number on semi-selective media was measured 7 days after flooding the suspension of infected pepper fruits.
- 마 지막 elongation 단계는 721에서 7분간 실시하였다. PCR 산물은 2% agarose gel을 이용하여 100V에서 60분간 전영동하여 확인하였다.
- 탄저병균의 진단과 동정을 위해서는 Cal-1(CCA GGGGAA GCC TCT CGC GGG CCT)와 CgInt(GGC CTC CCG CCT CCG GGC GG)라는 종 특이적인 primer와universal primer로 ITS4(TCC TCC GCT TAT TGA TATGC)를 쌍으로 각각 사용하여 PCR을 수행하였다. PCR 조 건은 94℃에서 4분간 pre-denaturation을 실시하였고, denaturation, annealing, elongation 단계를 94℃에서 30초, 65℃에서 30초, 72℃에서 1분간을 30회 반복하였다. 마 지막 elongation 단계는 721에서 7분간 실시하였다.
- 고주 탄저 병균인 Colletotrichum acutatume 100 ㎍/ml의 ampicillin과 tetracycline과 같은 항생물질과 100 ㎍/ml의 carbendazim과 diethofencarb의 혼합제를 첨가한 PDA배지에서 특이적으로 생장하였다. 탄저병의 발병 정도가 다른 고추 열매를 갈아서 C.
- 토양의 현탁액 은 4겹의 cheese cloth에서 여과하여 토양의 잔재물을 제 거하고, 반 선택배지에 바로 50 μl씩 도말하였다. 고추 열 매의 경우와 동일하게 25℃에서 1주일간 배양한 후에 나타난 균총의 수를 조사하였다.
- 여과한 즙액은 3, 000 g에서 10분간 원심분리하여 상징액 은 제거하고, 침전물에 다시 증류수를 첨가한 다음 고르 게 교반하여 현탁시켰다. 고추 열매의 현탁액은 적정 농 도로 희석한 후에 반선택배지 에 50 B씩 도말하고, 25℃에서 1주일간 배양한 후에 나타난 균총의 수를 조사하였다. 실험에 사용한 반선택배지로는 PDA에 100㎍/ml의 carbendazim과 diethofencarb의 혼합 살균제를 첨가한 배 지(A)와 100 |ig/mZ의 ampicillin과 tetracycline 항생물질을첨가한 배지 (B), 그리고 살균제와 항생물질을 모두 혼합 한 배지(C) 등 세 종류의 배지를 사용하였다.
- Verticillium spp. 등의 밀도를 조사하기 위해서 각 토양 병 원균의 선택 배지를 사용하였다. Ko 등(2005)은 lipase를 생성하는 미생물을 선발하기 위해서 0.
- 2004년 2월 중에 전년도 고추를 재배한 포장에서 고 추의 이병 잔재물을 채취하여 위에서 기술한 방법과 동일한 방법으로 반선택 배지를 이용하여 병원균을 분리하고 개체수를 조사하였다. 또한 탄저병 발생을 확인하였던 포장에서 토양을 채취하여 병원균 분리와 개체수 조사를 실시하였다. 채취한 토양 10 g을 250 m/의 증류수에 현탁 시킨 후, 150rpm으로 1시간 진탕하였다.
- 고추를 재배 했던 포장에서 이병 잔재물과 토양을 채집하여 반선택 배 지 상에서 병원균의 수를 조사한 결과, C acwatwie 토 양보다는 이병 잔재물에서 더 많은 수가 검출되었다. 반 선택 배지에 나타난 병원균을 무작위로 10균주를 선발하여 동정하였다. 선발한 균주들의 DNA를 추출하여 C.
- aczmrtwm인지의 여부를 확인할 필요가 생겼다. 반선택배지 상에서 형성된 균총 중에서 무작위로 10개를 선발하여 새로운 배지로 옮겨 배양한 후, 균사로부터 DNA를 추출하였다. 추출한 DNA를 template로 사용하고 C.
- 병원균의 동정. 반선택배지에서 선발한 병원균이 C. acutatum인지를 확인하기 위해서 종 특이적인 primer를이용하여 PCR을 실시하였다. 이병 고추와 토양에서 분리 한 병원균의 균총을 새로운 PDA 배지에 접종하여 25C 의 암상태에서 10일간 배양하였다.
- 선발한 배지는 기본 배지(1)로 PDA를 사용하였으며, 항생물질과 살균제 를 다른 미생물의 생육을 억제하는 억제제로 첨가하였다.배지 II에는 PDA에 100 ㎍/m/의 ampicillin과 tetracycline을 첨가 하였으며, 배지 Ⅲ에는 배지 Ⅱ의 조성에 100 ㎍/ml의 carbendazim과 diethofencarb의혼합제를 첨가하였다. 배지 IV에는 배지 Ⅲ에서 100㎍/mZ 의 carbendazim 과 diethofencarb의 혼합제 대신에 100 ㎍/ml의 iprodione을 첨가하였으며, 배지 V에는 위에서 서술한 모든 억제제를 동일한 농도로 처리하여 사용하였다.
- 배지 II에는 PDA에 100 ㎍/m/의 ampicillin과 tetracycline을 첨가 하였으며, 배지 Ⅲ에는 배지 Ⅱ의 조성에 100 ㎍/ml의 carbendazim과 diethofencarb의혼합제를 첨가하였다. 배지 IV에는 배지 Ⅲ에서 100㎍/mZ 의 carbendazim 과 diethofencarb의 혼합제 대신에 100 ㎍/ml의 iprodione을 첨가하였으며, 배지 V에는 위에서 서술한 모든 억제제를 동일한 농도로 처리하여 사용하였다.
- 이병 고추와 토양에서 분리 한 병원균의 균총을 새로운 PDA 배지에 접종하여 25C 의 암상태에서 10일간 배양하였다. 배지 표면에서 C. acMtatum의 균사를 긁어 수확한 후, 액체질소를 부어 마쇄 하였다. CTAB 추출 용액 (2.
- acmatum을 선 택적으로 배양할 수 있는 배지를 확립하기 위하여 5종의 배지를 선발하여, 실험에 사용한 4종의 Colletotrichum 균 주의 균사 생장 억제 정도를 조사하였다. 선발한 배지는 기본 배지(1)로 PDA를 사용하였으며, 항생물질과 살균제 를 다른 미생물의 생육을 억제하는 억제제로 첨가하였다.배지 II에는 PDA에 100 ㎍/m/의 ampicillin과 tetracycline을 첨가 하였으며, 배지 Ⅲ에는 배지 Ⅱ의 조성에 100 ㎍/ml의 carbendazim과 diethofencarb의혼합제를 첨가하였다.
- 5% sodium dodesyl sullkte)을 첨가하여 65℃에서 1시간 처리 한 후, 13, 000g로 10분간 원심분리하여 상징액만을 회수하였다. 싱징액에 phenol/chloroform/IAA(v:v:v, 25:24:1) 혼합액을 처리하고 13,000g로 15분간 원심분리하여 침전한 DNA를 회수하였다. 침전된 DNA는 70% ethanol을 첨가 하여 13, 000 g로 15분간 원심분리하여 세척한 후, 건조시켜 ethanol을 제거하였다.
- acutatum인지를 확인하기 위해서 종 특이적인 primer를이용하여 PCR을 실시하였다. 이병 고추와 토양에서 분리 한 병원균의 균총을 새로운 PDA 배지에 접종하여 25C 의 암상태에서 10일간 배양하였다. 배지 표면에서 C.
- 사용한 배지. 주된 고추 탄저병균인 C. acmatum을 선 택적으로 배양할 수 있는 배지를 확립하기 위하여 5종의 배지를 선발하여, 실험에 사용한 4종의 Colletotrichum 균 주의 균사 생장 억제 정도를 조사하였다. 선발한 배지는 기본 배지(1)로 PDA를 사용하였으며, 항생물질과 살균제 를 다른 미생물의 생육을 억제하는 억제제로 첨가하였다.
- 탄저병균의 진단과 동정을 위해서는 Cal-1(CCA GGGGAA GCC TCT CGC GGG CCT)와 CgInt(GGC CTC CCG CCT CCG GGC GG)라는 종 특이적인 primer와universal primer로 ITS4(TCC TCC GCT TAT TGA TATGC)를 쌍으로 각각 사용하여 PCR을 수행하였다. PCR 조 건은 94℃에서 4분간 pre-denaturation을 실시하였고, denaturation, annealing, elongation 단계를 94℃에서 30초, 65℃에서 30초, 72℃에서 1분간을 30회 반복하였다.
대상 데이터
- dematium 을 실험에 사용하였다. C. gloeosporioides KACC40690과 C. coccodes는 농촌진흥청에서 분양받아 실험에 사용하였다. 병원균들은 PD(Potato dextrose) 사면배지에 배양하여 4℃에서 보관하며 실험에 사용하였다.
- coccodes는 농촌진흥청에서 분양받아 실험에 사용하였다. 병원균들은 PD(Potato dextrose) 사면배지에 배양하여 4℃에서 보관하며 실험에 사용하였다.
- 고추 열매의 현탁액은 적정 농 도로 희석한 후에 반선택배지 에 50 B씩 도말하고, 25℃에서 1주일간 배양한 후에 나타난 균총의 수를 조사하였다. 실험에 사용한 반선택배지로는 PDA에 100㎍/ml의 carbendazim과 diethofencarb의 혼합 살균제를 첨가한 배 지(A)와 100 |ig/mZ의 ampicillin과 tetracycline 항생물질을첨가한 배지 (B), 그리고 살균제와 항생물질을 모두 혼합 한 배지(C) 등 세 종류의 배지를 사용하였다.
- 사용한 병원균. 탄저병균의 전형적인 증상을 보이는 고추에서 단포자 분리한 C. acutatum JC24와 C. dematium 을 실험에 사용하였다. C.
성능/효과
- 의 사이에는 큰 다양성을 보이지 않고 매우 동질의 형질을 보이고 있었다(김과 김, 2004). C. acutatum 과 C. gloeosporioides를 형태적인 특성을 비교하여 볼 때, PDA 배지에서의 균총의 색깔, 균사의 생장 속도 등에 차이를 보이고, 분생포자의 장경에는 미묘한 차이가 있을 뿐이다. C.
- 서로 다튼 빼지 상에서의 CoUetotrichum spp의 생육. C. gloeosporioides KACC40690은 다른 CoUetotrichum 종의 병원균들보다 PDA상에서의 생육이 가장 빨랐으며, PDA 배지에 다른 항생물질이나 살균제를 첨가하였을 때 생육이 가장 크게 억제되었다(Table 1). 배지에 carbendazim 과 diethofbncarb를 첨가하였을 때는 C.
- 고추 열매와 토양에서의 병원균 조삭. Fig. 1에서 보는 것과 같이 포장에서 채집한 이병 고추에서는 반선택 배지의 종류에 따라서 균총의 크기는 다르지만 회색의 C. aczmrtwm의 전형적인 균총이 나타나는 것을 확인할 수 있었다. 병원균을 접종하여 열매 당 5~25%의 병 발생을 보이는 고추에서 병원균을 분리하였다.
- 의 CFU는 토양보다는 이병 식물의 잔재물에서 더 많이 나타났다. 결국 C. acutatume 포장에서 토양 과 이병 잔재물 모두에서 월동하고 생존할 수 있으나, 토 양보다는 이병 잔재물에서 월동하는 수가 30배 정도 높 음을 보여주고 있다. 따라서 고추 탄저병의 방제를 위해서 초기 전염원의 밀도를 줄이기 위해서는 포장에서 이 병 식물의 잔재물을 제거하는 매우 중요하다는 것을 알 수 있다.
- acWatum의 반선택 배지에 도말한 결과, 발병 정도와 반선택 배지에 나타나는 병원 균의 균총 수는 정의 상관 관계를 나타냈다. 고추를 재배 했던 포장에서 이병 잔재물과 토양을 채집하여 반선택 배 지 상에서 병원균의 수를 조사한 결과, C acwatwie 토 양보다는 이병 잔재물에서 더 많은 수가 검출되었다. 반 선택 배지에 나타난 병원균을 무작위로 10균주를 선발하여 동정하였다.
- acutatum 만의 생존율 조사가 불가능할 것으로 생각한다. 따라서 본 실험에서는 carbendazim과 diethofbncarb의 혼합 살균 제를 배지에 첨가함으로써 C. aczmrtwm만을 좀 더 선택 적으로 선발할 수 있는 반선택 배지를 확립할 수 있었다. 그러나 Table 1에서도 보는 바와 같이 C.
- 6X106 CFU/생체중 1 g의 균총이 나타났다. 발병의 정도가 낮아짐에 따라서 나타나는 균총의 수도 감소하였으며, 5% 미만의 발병 정도를 보였던 고추 열매에서는 1CFU/생체중 1.0×104 g의 균총이 나타났다.
- gloeosporioides KACC40690은 다른 CoUetotrichum 종의 병원균들보다 PDA상에서의 생육이 가장 빨랐으며, PDA 배지에 다른 항생물질이나 살균제를 첨가하였을 때 생육이 가장 크게 억제되었다(Table 1). 배지에 carbendazim 과 diethofbncarb를 첨가하였을 때는 C. gloeosporioides KACC40690과 C. dematiume 전혀 생육할 수 없었지만, C. acutatum JC24와 C. coccodes KACC40010은 무처리에 비하여 생육은 억제되지만, 제한적으로 생육이 가능하였다.
- acutatum 종 특이적인 primer에 대하여 반응하 지 않기 때문에 무작위적인 균주 선발을 통하여 두 균을 분류함으로써 반선택 배지의 효율을 상승시킬 수밖에 없 다고 생각한다. 본 실험에서는 실험 중에 반선택 배지 상 에 형성된 균총을 임의로 10개 선발하여 종 특이적 primer 인 Cal-1과 Cglnt와 ITS4를 사용하여 PCR을 수행한 결과, Fig. 2에서와 같이 모두 C. 에 대한 특이적 primer에 대해서만 반응을 나타냄으로써, 반선택 배지 상 에서 나타난 균총의 대부분은 C. aczmrtwm임을 알 수 있었다.
- 반 선택 배지에 나타난 병원균을 무작위로 10균주를 선발하여 동정하였다. 선발한 균주들의 DNA를 추출하여 C. acutatum 특이적인 primer를 사용한 PCR을 수행한 결과, 모든 균주가 C. aczmrtwm으로 확인되었다.
- 이상과 같이 고추 탄저병균의 주요 병원균인 C. acutatum의 선택적인 분리와 포장에서의 밀도를 정량화하기 위해서는 본 실험에서 확립한 반선택 배지가 효율적으로 사 용될 수 있음을 확인하였다.
- 반선택배지 상에서 형성된 균총 중에서 무작위로 10개를 선발하여 새로운 배지로 옮겨 배양한 후, 균사로부터 DNA를 추출하였다. 추출한 DNA를 template로 사용하고 C. acutatum의 특이적인 primer를 이용하여 ITS영역의 특정부분을 증폭한 결과, Fig. 2에서처럼 선발 한 모든 균주는 C. 에 대하여 특이적인 primer에 의해서만 증폭되는, 약 498 bp의 산물을 확인할 수 있었다.
- 고주 탄저 병균인 Colletotrichum acutatume 100 ㎍/ml의 ampicillin과 tetracycline과 같은 항생물질과 100 ㎍/ml의 carbendazim과 diethofencarb의 혼합제를 첨가한 PDA배지에서 특이적으로 생장하였다. 탄저병의 발병 정도가 다른 고추 열매를 갈아서 C. acWatum의 반선택 배지에 도말한 결과, 발병 정도와 반선택 배지에 나타나는 병원 균의 균총 수는 정의 상관 관계를 나타냈다. 고추를 재배 했던 포장에서 이병 잔재물과 토양을 채집하여 반선택 배 지 상에서 병원균의 수를 조사한 결과, C acwatwie 토 양보다는 이병 잔재물에서 더 많은 수가 검출되었다.
후속연구
- aczmrtwm이 토양과 식물의 잔재물에서 어느 정도 생존할 수 있는 지를 조사하기 위하여 PDA 배지에 benomyl을 첨가하여 반선택배지로 사용하였다. 그러나 benomyl에 대하여 저항성을 나타내는 C. gloeosporioides 이 토양이나 식물체의 잔재물에 존재한다면 benomyl을 첨가한 반선택 배지에서 생존이 가능하기 때문에 C. acutatum 만의 생존율 조사가 불가능할 것으로 생각한다. 따라서 본 실험에서는 carbendazim과 diethofbncarb의 혼합 살균 제를 배지에 첨가함으로써 C.
- 다주기성 식물병인 고추 탄저병을 효율적으로 방제하기 위해서는 초기 전염원의 밀도를 감소시키거나 병 발생 속도를 낮추어야 한다. 따라서 탄저병균의 월동처, 월 동 후 포장에서의 밀도 변화, 전반의 경로 등과 각 단계 에서의 병원균의 양을 정량적으로 조사할 필요가 있다. 따라서 본 실험에서는 주요한 고추 탄저병균인 C.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.