[국내논문]한우 체외수정란이 이식된 수란우의 임신과 유산에 영향을 미치는 수란우 측 요인들 Effects of Recipient Factors on the Pregnancy and Abortion after Transfer of In Vitro Produced Korean Native Cow Embryos원문보기
본 연구는 임상 조건하에서 수정란이식의 효율성 증대를 위하여 수란우 측면의 산차, 체점수(BCS), 발정 발현과 유도, 황체 형태, 자궁 크기 및 자궁각 위치가 체외수정란이 이식된 수란우의 임신과 유산에 미치는 효과를 검토하였다. 미경산우의 임신율$(43.5\%)$이 경산우$(33.6\%)$에 비하여 유의하게 높았으나, 유산율$(12.6\;vs.\;7.5\%)$은 유사한 경향이었다. BCS에 따른 임신율은 차이가 없었으나 유산율은 BCS 3.0 미만군$(55.6\%)$이 $3.0\~3.9$군 $(10.8\%)$에 비하여 유의하게 높았다. 수란우의 발정 발현과 유도 방법, 황체 형태, 자궁 크기 및 자궁각 위치에 따른 임신율과 유산율은 유사한 경향이었다.
본 연구는 임상 조건하에서 수정란이식의 효율성 증대를 위하여 수란우 측면의 산차, 체점수(BCS), 발정 발현과 유도, 황체 형태, 자궁 크기 및 자궁각 위치가 체외수정란이 이식된 수란우의 임신과 유산에 미치는 효과를 검토하였다. 미경산우의 임신율$(43.5\%)$이 경산우$(33.6\%)$에 비하여 유의하게 높았으나, 유산율$(12.6\;vs.\;7.5\%)$은 유사한 경향이었다. BCS에 따른 임신율은 차이가 없었으나 유산율은 BCS 3.0 미만군$(55.6\%)$이 $3.0\~3.9$군 $(10.8\%)$에 비하여 유의하게 높았다. 수란우의 발정 발현과 유도 방법, 황체 형태, 자궁 크기 및 자궁각 위치에 따른 임신율과 유산율은 유사한 경향이었다.
This study was conducted to investigate the effects of various factors of recipients such as recipient parity, body condition score(BCS), estrus type, corpus luteum, uterine size and uterine horn, on pregnancy and abortion after transfer of in vitro produced Korean Native Cow embryos. The pregnancy ...
This study was conducted to investigate the effects of various factors of recipients such as recipient parity, body condition score(BCS), estrus type, corpus luteum, uterine size and uterine horn, on pregnancy and abortion after transfer of in vitro produced Korean Native Cow embryos. The pregnancy rate of nulliparous $(43.5\%)$was significantly higher than that of multiparous $(33.6\%)$, but there were no difference in the abortion rates $(122.6\;vs.\;7.5\%)$. There were no difference in pregnancy among the groups of BCS treatment, but the abortion rate was significantly higher in the group of below BCS $2.0\~3.0\;(55.6\%)$ than the group of BCS $3.0\~3.9\;(10.8\%)$. The pregnancy and abortion rates from the estrus type, corpus luteum, uterine size and uterine hem were not differ among treatment groups.
This study was conducted to investigate the effects of various factors of recipients such as recipient parity, body condition score(BCS), estrus type, corpus luteum, uterine size and uterine horn, on pregnancy and abortion after transfer of in vitro produced Korean Native Cow embryos. The pregnancy rate of nulliparous $(43.5\%)$was significantly higher than that of multiparous $(33.6\%)$, but there were no difference in the abortion rates $(122.6\;vs.\;7.5\%)$. There were no difference in pregnancy among the groups of BCS treatment, but the abortion rate was significantly higher in the group of below BCS $2.0\~3.0\;(55.6\%)$ than the group of BCS $3.0\~3.9\;(10.8\%)$. The pregnancy and abortion rates from the estrus type, corpus luteum, uterine size and uterine hem were not differ among treatment groups.
* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.
문제 정의
본 연구는 2002부터 2004년까지 3년간에 걸친 2,000여 건의 수정란 이식에서 수란우 측면의 요인들, 즉 산차, BCS, 발정 발현과 유도, 황체 형태, 자궁 크기 및 자궁각 방향이 임신과 유산에 미치는 효과를 검토하였다.
본 연구는 수정란 이식을 이용한 한우 송아지 생산 효율을 증가시키기 위하여, 2002부터 2004년까지 3년간에 걸친 2,000여 건의 수정란 이식에서 수란우 측면의 요인들, 즉 산차, 체 점수(Body Condition Score; BCS), 발정 발현과 유도, 황체 형태, 자궁 크기 및 자궁각 방향이 수란우의 임신과 유산에 미치는 효과를 검토하였다.
본 연구는 임상 조건하에서 수정란이식의 효율성 증대를 위하여 수란우 측단의 산차, 체점수(BCS), 발정 발현과 유도, 황체 형태, 자궁 크기 및 자궁각 위치가 체외수정란이 이식된 수란우의 임신과 유산에 미치는 효과를 검토하였다. 미경산우의 임신율(43.
제안 방법
2mg/ml pyruvate(Sigma, P3662), 1 µg/ml FSH(Sigma, F8174), 10(µg/ml LH(Sigma, L9773) 및 10% FBS(Sigma, F0643)가 첨가된 TCM-199(Gibco, 12340-030)용액, 체외수정용은 6 mg/ml BSA와 10µg/ml heparin(Sigma, H3149)이 첨가된 TALP 용액, 체외배 양용은 3mg/ml BSA 또는 10% FBS가 첨가된 CRlaa 용액을 각각 이용하였다. 그리고 실험에 제공되는 배양액의 미세소적은 mineral oil(Sigma, M8410)을 도포하여 39℃, 5% CO2 배양기에서 최소한 4시간 이상 평형을 하였다.
한우 동결정액 1개를 실온에서 10초간, 37℃의 항온수조에서 30초간 처리하여 융해한 후 90%percoll(Sigma, P4937) 2ml 용액이 담겨져 있는 15 ml 원심분리관(Coming, 430052)에 조심스럽게 놓은 후 700g에서 20분간 원심분리 후 하층부의 정자 괴만을 회수하여, 2ml의 신선 체외수정용액으로 350g에서 다시 10분간 원심 분리함으로써 정자를 세척하였다. 그리고 정자농도는 25x106 sperms/ml가 되도록 조절하여, 15개씩의 난포란이 함유되어져 있는 46µ1의 체외수정용액에 heparin 2µ1와 정자 2µ1를 각각 첨가하여(최종 정자농도 1x106 sperms/ml) 39℃, 5% CO2 배양기에 20시간동안 배양함으로써 체외수정을 유도하였다.
수란우는 발정 발현에 따라 용모발정(Standing estrus; 울음, 점액의 분비, 승가 및 승가 허용)과 둔성발정(Subcstrus; 무증상 발정 또는 외음부에서 출혈이 확인된 경우)으로 분류하였다. 자연 발정을 제외한 수란우의 발정유기는 PGF2a(Estron; Bioveta, Czech) 의 1회 주사법과 GnRH(Receptal; Intervet, Holland)와 PGF2a를 병용하는 배란동기화법(Ov- synch)을 각각 이용하였다.
이식 1일전 또는 당일에 직장검사를 이용하여 황체를 검사하였다. 황체형태는 Type A(황체의 크기가 2.
한우 수정란을 이식한 후 60일에 직장검사로 임신을 판정하였다. 임신이 확인된 수란우가 재발정 및 태아 또는 태반의 배출이 확인된 경우에 직장 검사를 다시 실시하여 태아의 존재 유무와 자궁변화의 소견을 기초로 유산을 판정하였다.
직장검사를 통하여 수란우의 황체를 확인하였고, 황체가 존재하는 좌측 또는 우측 자궁각에 수정란을 각각 이식하였다.
한우 수정란을 이식한 후 60일에 직장검사로 임신을 판정하였다. 임신이 확인된 수란우가 재발정 및 태아 또는 태반의 배출이 확인된 경우에 직장 검사를 다시 실시하여 태아의 존재 유무와 자궁변화의 소견을 기초로 유산을 판정하였다.
이식 1일전 또는 당일에 직장검사를 이용하여 황체를 검사하였다. 황체형태는 Type A(황체의 크기가 2.5cm이상, crown의 직경이 lOnm이상), Type B(황체의 크기가 1.5~2.5cin, crown의 직경이 5mm 내외), Type C(황체의 크기가 1.5 cm 미만, crown이 존재하지 않는 것)로 분류하였다.
수집된 난소는 penicillin G(Sigma, P3032)가 첨가된 생리식염수로 3~4회 세척하여, 18G 주사침이 부착된 10ml 주사기를 이용하여 직경 2~8m의 가시난포로부터 난포란을 회수하였다. 회수된 난포란은 실체현미경 하에서 난구세포의 부착상태가 치밀한 것만을 선별하여, 50µl의 체외성숙용 배지에 15개 난포란을 옮겨 22시간 동안 39 5% CO2 배양기에 배양함으로써 체외성숙을 유도하였다.
본 연구에 사용된 배양액 중 난소로부터 난포란의 세척 및 회수용은 25mM HEPES와 3 mg/ml BSA(Sigma, A6003)가 첨가된 Hepes-TALP 용액, 체외성숙용은 0.2mg/ml pyruvate(Sigma, P3662), 1 µg/ml FSH(Sigma, F8174), 10(µg/ml LH(Sigma, L9773) 및 10% FBS(Sigma, F0643)가 첨가된 TCM-199(Gibco, 12340-030)용액, 체외수정용은 6 mg/ml BSA와 10µg/ml heparin(Sigma, H3149)이 첨가된 TALP 용액, 체외배 양용은 3mg/ml BSA 또는 10% FBS가 첨가된 CRlaa 용액을 각각 이용하였다. 그리고 실험에 제공되는 배양액의 미세소적은 mineral oil(Sigma, M8410)을 도포하여 39℃, 5% CO2 배양기에서 최소한 4시간 이상 평형을 하였다.
수란우는 2003년 3월부터 2004년 9월까지 경상북도 경산, 영천, 성추, 달성, 청도, 칠곡, 대구 및 상주 지역의 젖소 사육농가에서 사육중인 홀스타인을 이용하였다. 수정란이식은 준비된 한우 배반 포(2개/straw)를 비외과적 이식기(MVE, France) 에 장착하여 황체가 존재하는 자궁각에 이식하였다.
9% 생리식염수 (30~33℃)가 들어있는 보온병에 담아 2~3시간에 실험실로 운반하였다. 수집된 난소는 penicillin G(Sigma, P3032)가 첨가된 생리식염수로 3~4회 세척하여, 18G 주사침이 부착된 10ml 주사기를 이용하여 직경 2~8m의 가시난포로부터 난포란을 회수하였다. 회수된 난포란은 실체현미경 하에서 난구세포의 부착상태가 치밀한 것만을 선별하여, 50µl의 체외성숙용 배지에 15개 난포란을 옮겨 22시간 동안 39 5% CO2 배양기에 배양함으로써 체외성숙을 유도하였다.
데이터처리
실험 결과에 대한 통계학적 분석은 x2-test를 이용하였고, p<0.05 수준에서 유의성을 검정하였다.
이론/모형
수란우는 발정 발현에 따라 용모발정(Standing estrus; 울음, 점액의 분비, 승가 및 승가 허용)과 둔성발정(Subcstrus; 무증상 발정 또는 외음부에서 출혈이 확인된 경우)으로 분류하였다. 자연 발정을 제외한 수란우의 발정유기는 PGF2a(Estron; Bioveta, Czech) 의 1회 주사법과 GnRH(Receptal; Intervet, Holland)와 PGF2a를 병용하는 배란동기화법(Ov- synch)을 각각 이용하였다.
성능/효과
4배 정도 높았다. 본 연구에서도 BCS가 3.0 미만인 수란우가 임신율은 낮았으나, 유산율은 오히려 높았다. 임신의 성립과 유지에는 모축의 충분한 영양 수준이 요구되며, 특히 이식 후 착상된 수정란은 성장에 필요한 영양분을 모체로부터 공급받아야 한다(Dunn, 1980).
자궁의 용적이 작은 수란우가 임신 초기(25~65 일)에 더 많은 태아 손실이 발생하였고(Sakakibara 등, 1996), 이러한 태아 손실의 원인은 자궁 용적의 감소 또는 태아와 자궁벽 사이의 접촉면 감소 (Rowson 등, 1971) 및 태반엽수와 관련(Sakakibara 등, 1996)이 있다고 하였다. 본 연구에서도 유의한 차이는 없었으나, 자궁 크기가 작을수록 임신율이 증가하였고, 유산율도 높아지는 경향이었다. 이러한 원인은 수정란이식에서 난소보다 자궁의 상태가 임신율에 더 중요하기 때문이며(Peterson 과 Lee, 2003), 이식 후의 유산 등을 고려하면 자궁 용 적이 충분한 수란우를 선발하는 것이 임신과 태아의 성장에 매우 중요하다고 생각된다.
후속연구
또한 체외수정란이 이식된 수란우의 유산율은 인공수정의 2~5%(Suzuki 등, 1986)와 체내수정란의 4~8% (Hasler 등, 1987)보다 훨씬 높고, 송아지의 체중, 임신기간, 난산 및 기형이 증가하였다(Knmip와 den Dass, 1997). 따라서 수정란 이식의 산업화를 위해서는 수정란 생산 효율 증진과 더불어 임신율 향상, 유산, 분만 및 신생 송아지에 대한 연구가 더 필요하다.
한편 본 연구에서는 Peterson과 Lee(2003)의 보고와 같이 발정 발현과 유도 방법에 따른 임신율의 차이가 없었으며, 유산 율도 비슷한 경향이었다. 특히 본 연구에서는 발정의 발견 실수 또는 발정 증상이 없더라도 외음부 에서의 출혈을 확인한 경우에 약 2일 전에 발정이 왔던 것으로 추정하여 수정란 이식을 하여 다른 방법과 유사한 임신율을 얻을 수 있었기 때문에 출혈 발정을 나타낸 수란우도 수정란 이식에 충분히 활용할 수 있다고 사료된다.
참고문헌 (34)
Boland MP, Crosby TF and Gordon I. 1976. Birth of twin calves following a simple transcervical non-surgical egg transfer technique. Vet. Rec., 99:274-275
Chagas ESJ, Cidadao MR and Lopes DCL. 1999. Effect of parity and type of estrus of recipient on pregnancy rate following embryo transfer in dairy cattle. Abst., Proc. of the 15th Scientific Meeting of the AETE. Lyon, France, pp. 132
del Campo MR, Rowe RF, Chaichareon D and Ginther OJ. 198. Effect of the relative locations of embryo and corpus luteum on embryo survival in cattle. Reprod. Nutr. Dev., 23:303-308
Dochi O, Yamamoto Y, Saga H, Yoshiba N, Kano N, Maeda J, Miyata K, Yamauchi A, Tominaga K, Oda Y, Nakashima T and Inohae S. 1998. Direct transfer of bovine embryos frozenthawed in the presence of propylene glycol or ethylene glycol under on-farm conditions in an integrated embryo transfer program. Theriogenology, 49:1051-1058
Ghafouri MTA, Ludwick TM, Rader ER and Marcinkowski DP. 1980. Some effects of side of pregnancy on performance in dairy cattle implications on embryo transfer procedures. Theriogenology, Abst., 13:96
Hasler JF, Henderson WB, Hurtgen PJ, Jin ZQ, McCauley AD, Mower SA, Neely B, Shuey LS, Stokes JE and Trimmer SA. 1995. Production, freezing and transfer of bovine IVF embryos and subsequent calving results. Theriogenology, 43:141-152
Hasler JF, McCauley AD, Lathrop WF and Foote RH. 1987. Effect of donor-recipient interaction on pregnancy rate in a large-scale bovine embryo transfer program. Theriogenology, 27:139-168
Mapletoft RJ, Lindsell CE and Pawlyshyn V. 1986. Effects of clenbuterol, body condition and non-surgical embryo transfer equipment on pregnancy rates in bovine recipients. Theriogenology, Abst., 25:172
Nelson LD and Nelson CF. 1985. Effect of estrus detection and corpus luteum development on pregnancy rates in bovine embryo recipients. Theriogenology, Abst., 23:212
Niemann H, Tenhumberg H, Sacher B and Kruip B. 1985. Pregnancy rates after nonsurgical transfer of cattle embryos frozen and thawed by a field method. Anim. Breed. Abst., 53:206-207
Numabe T, Oikawa T, Kikuchi T and Horiuchi T. 2000. Production efficiency of Japanese black calves by transfer of bovine embryos produced in vitro. Theriogenology, 54:1409-1420
Pope WF, Maurer RR and Stormshak F. 1982. Distribution of progesterone in the uterus, broad ligament and uterine arteries of beef cows. Anat. Rec., 203:245-250
Sakakibara H, Kudo H, Boediono A and Suzuki T. 1996. Induction of twinning in Holstein and Japanese Black cows by ipsilateral frozen embryo transfer. Anim. Reprod. Sci., 44:203-210
Schmidt M, Greve T, Avery B, Beckers JF, Sullon J and Hansen HB. 1996. Pregnancies, calves and calf viability after transfer of in vitro produced bovine embryos. Theriogenology, 46:527-539
Silke V, Diskin MG, Kenny DA, Boland MP, Dillon P, Mee, IF and Sreenan JM. 2002. Extent, pattern and factors associated with late embryonic loss in dairy cows. Anim. Reprod. Sci., 71:1-12
Sreenan JM and Beshan D. 1976. Embryonic survival and development at various stages of gestation after bilateral egg transfer in the cow. J. Reprod. Fert., 47:127-128
Sreenan JM. 1983. Methods of consistent supply, recovery and transfer of embryos in cattle. In: Strategies for the most efficient beef production, Proc. Int. Symposium Beef Prod. Kyoto, pp. 197-212
Sreenan JM and Diskin, MG. 1987. Factors affecting pregnancy rate following embryo transfer in the cow. Theriogenology, 27:99-113
Sreenan JM and Diskin MG. 1989. Effect of unilateral or bilateral twin embryo distribution on twinning and embryo survival rate in the cow. J. Reprod. Fertil., 87:657-664
Walton JS, Martineau NA and Stubbings RB. 1986. Pregnancy rates in Holstein embryo transfer recipient: Effect of treatment with progesterone or clenbuterol and of natural versus induced cycles. Theriogenology, 26:837-845
Weems CW, Lee CN, Weems YS and Vincent DL. 1988. Distribution of progesterone to the uterus and associated vascularize of cattle. Endocrinol. Jpn,. 35:625-630
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.