선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 본 연구에서는 심한 설사증상을 보이는 칠면조 분변에서 분리한 조류 로타바이러스 AvRV-1와 AvRV-2를 대상으로 로타바이러스의 병원성에 중요한 역할을 하는 것으로 보고 되어진 NSP4의 염기서열을 분석하고, baculovirus expression system에서 발현하여 특성을 규명하기 위한 실험을 수행하였다. 염기서열분석 결과, AvRV1와 AvRV-2의 NSP4유전자는 모두 727개의 핵산으로 구성되며 169개의 아미노산을 coding하는 1개의 open reading frame과 2개의 glycosylation 부위가 존재하는 것으로 확인되었다.
- 본 연구에서는 조류 로타바이러스 NSP4 유전자의 염기서열을 비교 분석하고, 병원성에 중요한 역할을 하는 것으로 보고된 NSP4의 분자생물학적인 특성을 규명하기 위해 baculovirus expression system을 이용하여 발현시키고 Western blotting을 실시하여 특성을 분석하였다.
제안 방법
- 5)에서 하룻밤 동안 blocking 시킨 후 TBS로 강하게 흔들며 3회 세척하였다. 1차 항체로 제조한 NSP4 특이 항혈청을 사용하여 1시간동안 실온에서 흔들며 반응시킨 후 TBS로 3회 세척하였으며 2차 항체로 alkaline phosphatase-conjugated goat anti-mouse IgG(Kirkegaard Perry Laboratory)을 1:2000 희석하여 1시간 반응 시킨 뒤 이를 다시 TBS로 3회 세척하였다. 발색제로는 NBT/BCIP stock solution(Boehringer mannheim) 200 µl을 alkaline phosphatase buffer(0.
- 1차 항체로 로타바이러스 NSP4에 특이적인 항혈청을 1:100으로 희석하여 100 µl 씩 넣어 37℃에서 1시간 반응 후 phosphate buffer saline(PBS)로 5회 세척하였다. 2차 항체로 FITC-conjugated goat anti-mouse IgG(Kirkegaard Perry Laboratory)를 1:100으로 희석하여 100 µl 씩 넣어 1시간 배양 후 PBS로 5회 세척한 뒤 mounting buffer를 넣어 형광현미경으로 관찰하였다.
- Baculovirus expression vector인 pBacPAK8(Clontech)에 NSP4 유전자를 삽입하여 발현 vector pBacPAK8-NSP4를 제작하고 BacPAKTM transfection kit(Clontech)를 이용하여 제조사의 술식에 의하여 Sf21 cell에서 cotransfection을 실시하였다.
- NSP4 PCR 산물의 크로닝은 pGEM® T easy vector system(Promega)를 사용하여 실시하였다. 재조합 클론으로부터 플라스미드 추출은 one step plasmid minipreparation방법을 사용하였으며 [7], EcoRI(10 U/µl, Gibco BRL)으로 37℃에서 1시간 반응하고 1% agarose gel 상에서 전기영동 하여 insert의 삽입 유무와 크기를 확인하였다.
- NSP4 유전자를 증폭하기 위한 foward primer(5'-GGCTTTAAAAACTCAATATC-3')와 reverse primer(5'-GGTCATATTAAACCCAACTA-3')는 비둘기 유래 PO-13(GeneBank accession number: AB009627)을 기초로 하여 727 bp의 NSP4 유전자 전체를 증폭할 수 있도록 제작하였다. RT-PCR은 추출한 RNA 10 µl에 1 µl의 reverse primer를 넣고 95℃에서 5분간 변성시킨 후 얼음에 옮겨 5분간 방치한 후 DEPC 처리된 증류수 20 µl, 5× first strand buffer 10 µl, 0.
- 재조합 클론으로부터 플라스미드 추출은 one step plasmid minipreparation방법을 사용하였으며 [7], EcoRI(10 U/µl, Gibco BRL)으로 37℃에서 1시간 반응하고 1% agarose gel 상에서 전기영동 하여 insert의 삽입 유무와 크기를 확인하였다. NSP4 유전자의 염기서열 결정은 BigDye Terminatior Cycle Sequencing Kit(Applied Biosystems)으로 반응한 후 ABI PRISM 310 Genetic Analyzer(Applied Biosystems)를 이용하여 수행하였다. 분석한 유전자 염기서열은 Clustal_X(1.
- 1. Neighbour-joining tree based on NSP4 nucleotide sequences of avian rotavirus AvRV-1 and AvRV-2 comparisons with representative strains of serogroup A, B and C rotavirus. The numbers at the nodes indicate the level of bootstrap support based on a neighbour-joining analysis of 1,000 resampled datasets; only values above 50% are given.
- 상층액에 phenol-chloroform을 넣어 잘 섞은 후 원심 분리하여 조심스럽게 취한 상층액에 3M sodium acetate와 isopropyl alcohol을 넣어 가볍게 섞은 후 원심 분리하여 상층액을 버리고 70% 에탄올로 2회 세척하였다. Pellet은 원심진공농축기(Spinvac, Hanil Corp.)로 건조시키고 DEPC(diethyl pyrocarbonate, Sigma) 처리된 증류수로 용해한 후 RNAaid® kit(BIO 101)를 이용하여 정제하였다. 정제한 RNA는 DEPC water에 용해하여 -20℃에 보관하면서 실험에 사용하였다.
- Recombinant virus를 접종하여 27℃에서 48시간동안 배양하여 수확한 Sf21 cell을 SDS-PAGE 및 Western blot의 샘플로 사용하였다. 또한 tunicamycin의 효과를 알아보기 위해 recombinant virus를 cell에 접종 후 tunicamycin을 처리한 것과 처리하지 않은 것, 그리고 recombinant virus를 접종하지 않은 Sf21 cell 모두를 수확하여 원심분리한 후 얻은 상층액과 pellet을 샘플로 사용하였다. 각각의 cell pellet은 lysis buffer로 처리한 후 원심 분리하여 상층액을 취하고 sample buffer(60 mM Tris-HCl, pH 6.
- 로타바이러스에서 병원성에 중요한 역할을 하는 것으로 보고된 NSP4 유전자를 조류 로타바이러스를 이용하여 RT-PCR로 증폭하고 크로닝한 후 염기서열을 분석비교하였으며 baculovirus expression system을 이용하여 발현시킨 후 발현된 NSP4의 특성을 규명하였다.
- 합성된 cDNA template 10 µl에 DEPC 처리된 증류수 63 µl, 10× PCR buffer 10 µl, 25 mM MgCl2 12 µl, 10 mM dNTP 2 µl, foward primer 1 µl, reverse primer 1 µl, Taq DNA polymerase(5 U/ µl) 1 µl를 넣어 95℃, 5 min, 25 cycles의 94℃/45 sec, 43℃/45 sec, 72℃/1 min 그리고 72℃, 7 min의 반응을 핵산증폭기(GeneAmp PCR system 2400, Perkin-Elmer)에서 실시하였다. 반응 산물은 1% agarose gel 상에서 전기영동한 뒤 ethidium bromide로 염색하여 band를 확인하였으며 1 kb DNA ladder(Gibco BRL)와 비교하여 크기를 확인하였다.
- T easy vector system(Promega)를 사용하여 실시하였다. 재조합 클론으로부터 플라스미드 추출은 one step plasmid minipreparation방법을 사용하였으며 [7], EcoRI(10 U/µl, Gibco BRL)으로 37℃에서 1시간 반응하고 1% agarose gel 상에서 전기영동 하여 insert의 삽입 유무와 크기를 확인하였다. NSP4 유전자의 염기서열 결정은 BigDye Terminatior Cycle Sequencing Kit(Applied Biosystems)으로 반응한 후 ABI PRISM 310 Genetic Analyzer(Applied Biosystems)를 이용하여 수행하였다.
- 조류 로타바이러스 AvRV-1과 AvRV-2의 NSP4와 Serogroup A 로타바이러스들의 NSP4와 유전적 상관성을 알아보기 위하여 NSP4 유전자의 염기서열을 비교 분석하였다. AvRV-1과 AvRV-2의 NSP4 유전자는 727개의 염기로 구성되며 두 개의 glycosylation site(62-71 nt, 89-97 nt)가 존재함을 확인하였다.
- 조류 로타바이러스의 특이 다가 항체를 생산하기 위하여 lysis buffer(0.01 M Tris pH 7.4, 0.15 M NaCl, 0.001 M EDTA, 1% NP-40, 0.5% deoxycholate, 0.1% SDS, 0.1% NaN3)로 용해한 후 원심한 바이러스 상층액과 Freund's complete adjuvant(Gibco BRL)를 동량으로 섞어서 BALB/c 마우스에 복강으로 1차 접종하였다. 2차와 3차는 각각 접종 2주 후에 Freund's incomplete adjuvant를 항원과 동량으로 섞어서 복강으로 접종하였다.
- 1 M DTT 5 µl, 10 mM dNTP 2 µl, RNase inhibitor 1 µl, reverse transcriptase(200 U/µl) 1 µl 을 순서대로 넣어 37℃에서 60분간 반응시켜 cDNA합성을 하였다. 합성된 cDNA template 10 µl에 DEPC 처리된 증류수 63 µl, 10× PCR buffer 10 µl, 25 mM MgCl2 12 µl, 10 mM dNTP 2 µl, foward primer 1 µl, reverse primer 1 µl, Taq DNA polymerase(5 U/ µl) 1 µl를 넣어 95℃, 5 min, 25 cycles의 94℃/45 sec, 43℃/45 sec, 72℃/1 min 그리고 72℃, 7 min의 반응을 핵산증폭기(GeneAmp PCR system 2400, Perkin-Elmer)에서 실시하였다. 반응 산물은 1% agarose gel 상에서 전기영동한 뒤 ethidium bromide로 염색하여 band를 확인하였으며 1 kb DNA ladder(Gibco BRL)와 비교하여 크기를 확인하였다.
대상 데이터
- 작성한 tree의 위상은 PHYLIP package의 SEQBOOT과 CONSENSE option을 이용하여 neighbour-joining method의 1,000회 resampling을 통한 bootstrap 분석으로 평가하였다 [13]. Out group으로는 serogroup B 로타바이러스 Human ADRV(AY548957)와 serogroup C 로타바이러스 Porcine Cowden (AF093202)를 사용하였다.
- Recombinant virus를 접종하여 27℃에서 48시간동안 배양하여 수확한 Sf21 cell을 SDS-PAGE 및 Western blot의 샘플로 사용하였다. 또한 tunicamycin의 효과를 알아보기 위해 recombinant virus를 cell에 접종 후 tunicamycin을 처리한 것과 처리하지 않은 것, 그리고 recombinant virus를 접종하지 않은 Sf21 cell 모두를 수확하여 원심분리한 후 얻은 상층액과 pellet을 샘플로 사용하였다.
- 2차와 3차는 각각 접종 2주 후에 Freund's incomplete adjuvant를 항원과 동량으로 섞어서 복강으로 접종하였다. 마지막 복강 접종 2주후에 BALB/c 마우스로부터 항혈청을 얻어 AvRV-1 특이 다가 항체로 사용하였다.
- 본 실험에서 사용된 조류 로타바이러스 AvRV-1, AvRV-2는 미네소타주립대학교의 Dr. Nagaraja KV로부터 분양받은 것으로 MA104 세포를 이용하여 배양하였다.
- 7) program [24]을 이용하여 GeneBank에 수록된 그룹 A 로타바이러스들의 NSP4 유전자 염기서열과 유사성 행렬을 구하였다. 이 연구에서 비교한 serogroup A 로타바이러스들은 총 17주로 다음과 같다; Human KUN(D88829), Simian SA11(AF087678), Rabbit ALA(AF144792), Bovine NCVP5(X06806), Equine H-2(AF144801), Equine H-1(AF144800), Porcine OSU(D88831), Human Wa(AF093199), Human AU-1(D89873), Canine CU-1(AF144806), Feline FRV1(D89874), Murine EHP(U96336), Murine EW(U96335), Pigeon PO-13(AB009627), Turkey Ty-1(AB065285), Turkey Ty-3(AB065286), Chicken Ch-1(AB065287). 다중 정렬한 염기서열은 PHYLIP package [14]를 이용하여 계통수를 작성하였으며 유전적 계통도(phylogenetic tree)는 neighbour-joining algorithm [23]을 이용하여 추론하였고 진화적 거리 행렬은 Jukes와 Cantor의 distance model [16]을 이용하여 구하였다.
데이터처리
- NSP4 유전자의 염기서열 결정은 BigDye Terminatior Cycle Sequencing Kit(Applied Biosystems)으로 반응한 후 ABI PRISM 310 Genetic Analyzer(Applied Biosystems)를 이용하여 수행하였다. 분석한 유전자 염기서열은 Clustal_X(1.7) program [24]을 이용하여 GeneBank에 수록된 그룹 A 로타바이러스들의 NSP4 유전자 염기서열과 유사성 행렬을 구하였다. 이 연구에서 비교한 serogroup A 로타바이러스들은 총 17주로 다음과 같다; Human KUN(D88829), Simian SA11(AF087678), Rabbit ALA(AF144792), Bovine NCVP5(X06806), Equine H-2(AF144801), Equine H-1(AF144800), Porcine OSU(D88831), Human Wa(AF093199), Human AU-1(D89873), Canine CU-1(AF144806), Feline FRV1(D89874), Murine EHP(U96336), Murine EW(U96335), Pigeon PO-13(AB009627), Turkey Ty-1(AB065285), Turkey Ty-3(AB065286), Chicken Ch-1(AB065287).
- 다중 정렬한 염기서열은 PHYLIP package [14]를 이용하여 계통수를 작성하였으며 유전적 계통도(phylogenetic tree)는 neighbour-joining algorithm [23]을 이용하여 추론하였고 진화적 거리 행렬은 Jukes와 Cantor의 distance model [16]을 이용하여 구하였다. 작성한 tree의 위상은 PHYLIP package의 SEQBOOT과 CONSENSE option을 이용하여 neighbour-joining method의 1,000회 resampling을 통한 bootstrap 분석으로 평가하였다 [13]. Out group으로는 serogroup B 로타바이러스 Human ADRV(AY548957)와 serogroup C 로타바이러스 Porcine Cowden (AF093202)를 사용하였다.
이론/모형
- Recombinant virus가 NSP4를 발현하는가를 확인하기 위하여 간접형광항체법을 사용하였다. 즉 Sf21 cell이 배양된 96-well plate에 recombinant baculovirus를 접종하여 48시간 배양한 후 80% acetone으로 고정하였다.
- 이 연구에서 비교한 serogroup A 로타바이러스들은 총 17주로 다음과 같다; Human KUN(D88829), Simian SA11(AF087678), Rabbit ALA(AF144792), Bovine NCVP5(X06806), Equine H-2(AF144801), Equine H-1(AF144800), Porcine OSU(D88831), Human Wa(AF093199), Human AU-1(D89873), Canine CU-1(AF144806), Feline FRV1(D89874), Murine EHP(U96336), Murine EW(U96335), Pigeon PO-13(AB009627), Turkey Ty-1(AB065285), Turkey Ty-3(AB065286), Chicken Ch-1(AB065287). 다중 정렬한 염기서열은 PHYLIP package [14]를 이용하여 계통수를 작성하였으며 유전적 계통도(phylogenetic tree)는 neighbour-joining algorithm [23]을 이용하여 추론하였고 진화적 거리 행렬은 Jukes와 Cantor의 distance model [16]을 이용하여 구하였다. 작성한 tree의 위상은 PHYLIP package의 SEQBOOT과 CONSENSE option을 이용하여 neighbour-joining method의 1,000회 resampling을 통한 bootstrap 분석으로 평가하였다 [13].
성능/효과
- 조류 로타바이러스 AvRV-1과 AvRV-2의 NSP4와 Serogroup A 로타바이러스들의 NSP4와 유전적 상관성을 알아보기 위하여 NSP4 유전자의 염기서열을 비교 분석하였다. AvRV-1과 AvRV-2의 NSP4 유전자는 727개의 염기로 구성되며 두 개의 glycosylation site(62-71 nt, 89-97 nt)가 존재함을 확인하였다. 아미노산 서열을 추정한 결과 AvRV-1과 AvRV-2의 NSP4 유전자는 염기서열 41에서 시작하여 550을 끝으로 169개의 아미노산을 encode하는 한 개의 open reading frame이 존재하고 있음을 확인하였다.
- AvRV-1과 AvRV-2의 NSP4 유전자의 염기서열은 서로 97.4%의 상동성을 보였으며, GenBank에서 등록된 그룹 A 로타바이러스들의 NSP4 유전자 염기서열과 비교 분석한 결과, 상동성의 범위는 48.4%에서 98.3%로 나타났다. 가장 높은 상동성은 NSP4[E]에 속하는 칠면조 유래주인 Ty-3(AvRV-1: 98.
- 칠면조에서 분리된 조류 로타바이러스(AvRV-1, AvRV2)의 NSP4 유전자는 727개의 염기로 구성되어 있으며 base 41에서 시작하여 base 550을 끝으로 169개의 아미노산을 coding하는 1개의 open reading frame과 2개의 glycosylation 부위가 존재함을 확인하였다. AvRV-1과 AvRV-2의 NSP4 유전자의 염기서열은 서로 97.4%의 상동성을 보였으며, serogroup A 로타바이러스들의 NSP4 유전자 염기서열과 비교 분석한 결과, 상동성의 범위는 48.4%에서 98.3%로 포유류의 로타바이러스와는 낮은 일치성을 보였으나 조류에서 분리된 로타바이러스와는 높은 상동성을 나타냈다. Baculovirus expression system에 의해 발현된 NSP4를 간접형광항체법과 Western blotting 기법으로 확인하였으며 발현된 NSP4가 glycosylation된 정도에 따라 그 성상을 28, 26, 20 kDa 등으로 달리함을 확인할 수 있었다.
- 3%로 포유류의 로타바이러스와는 낮은 일치성을 보였으나 조류에서 분리된 로타바이러스와는 높은 상동성을 나타냈다. Baculovirus expression system에 의해 발현된 NSP4를 간접형광항체법과 Western blotting 기법으로 확인하였으며 발현된 NSP4가 glycosylation된 정도에 따라 그 성상을 28, 26, 20 kDa 등으로 달리함을 확인할 수 있었다.
- N-linked mannose glycosylation을 억제시키는 물질인 tunicamycin을 사용하여 NSP4의 glycosylation을 관찰한 결과 NSP4가 tunicamycin에 의해 glycosylation이 억제되어 glycosylation이 안된 20 kDa의 NSP4만이 관찰되었다. 따라서 NSP4가 glycoprotein임을 확인할 수 있었다.
- Recombinant baculovirus을 Sf21 cell에 접종하여 24, 48, 72시간동안 배양하여 수확한 cell lysate에서 모두 glycosylation 정도에 따른 28, 26, 20 kDa의 NSP4를 관찰할 수 있었다. 또한 N-linked glycosylation의 특이 억제물질인 tunicamycin을 처리한 결과 Fig.
- 4%)에서 나타났다. 각 NSP4 유전자형과의 비교에서는 AvRV-1과 AvRV-2는 NSP4[E]에 속하는 pigeon PO-13, turkey Ty-1, turkey Ty-3와 88.1±7.6%, NSP4[F]에 속하는 chicken Ch-1과 78.5±0.1%, NSP4[B]에 속하는 equine H-1, porcine OSU, human Wa와 49.8±0.8%, NSP4[A]에 속하는 human KUN, simian SA11, rabbit ALA, bovine NCVP5, equine H-2와 49.8±0.5%, NSP4[C]에 속하는 human AU-1, canine CU-1, feline FRV-1와 51.6±2.4%, NSP4[D]에 속하는 murine EHP, murine EW와 49.3±0.2%의 상동성을 보였다. 대조 바이러스로 사용한 serogroup B 로타바이러스인 human ADRV와는 39.
- SDS-PAGE를 하여 Coomassie blue로 염색하여 본 결과 뚜렷한 NSP4 band를 확인할 수 없었다. 그러나 조류 로타바이러스에 특이한 항혈청을 사용하여 Western blot한 결과 뚜렷한 NSP4를 확인할 수 있었으며 NSP4가 glycosylation된 정도에 따라 크기를 달리하는 것을 관찰하였다. 즉, baculovirus가 감염된 Sf21 cell lysate에서 baculovirus에 의해 발현된 NSP4를 관찰할 수 있었으며 28, 26, 20 kDa의 NSP4 모두 뚜렷하게 관찰되었다.
- 2%의 상동성을 보였다. 대조 바이러스로 사용한 serogroup B 로타바이러스인 human ADRV와는 39.2±0.2%, serogroup C 로타바이러스인 porcine Cowden과는 36.2±0.4%의 매우 낮은 상동성을 보였다.
- Ito 등 [15]은 비둘기 유래 조류 로타바이러스인 PO13의 NSP4 아미노산 염기서열이 포유류 로타바이러스 NSP4와는 32-35%의 낮은 상동성을 가짐을 보고하였다. 본 실험에서 칠면조의 설사 분변에서 분리된 AvRV1과 AvRV-2의 NSP4 유전자 염기서열은 외국 조류 로타바이러스인 칠면조 유래 Ty-1, Ty-3 및 비둘기 유래 PO-13과 모두 82.7% 이상의 높은 상동성을 보였다. 특히 AvRV-1과 AvRV-2는 칠면조 유래 Ty-3와 각각 97.
- 본 실험에서는 NSP4의 특성을 규명하기 위한 실험으로 재조합 baculovirus에 의해 발현된 NSP4를 조류 로타바이러스 특이 항혈청을 사용한 간접 형광항체법과 Western blotting으로 확인할 수 있었다. 간접형광항체법 결과 NSP4 유전자가 삽입된 재조합 바이러스가 감염된 cell에서만 강한 형광이 관찰되었는데 이는 재조합 바이러스에 의해 발현된 NSP4가 AvRV-1 특이 항혈청과 반응하였기 때문이다.
- AvRV-1과 AvRV-2의 NSP4 유전자는 727개의 염기로 구성되며 두 개의 glycosylation site(62-71 nt, 89-97 nt)가 존재함을 확인하였다. 아미노산 서열을 추정한 결과 AvRV-1과 AvRV-2의 NSP4 유전자는 염기서열 41에서 시작하여 550을 끝으로 169개의 아미노산을 encode하는 한 개의 open reading frame이 존재하고 있음을 확인하였다.
- 본 연구에서는 심한 설사증상을 보이는 칠면조 분변에서 분리한 조류 로타바이러스 AvRV-1와 AvRV-2를 대상으로 로타바이러스의 병원성에 중요한 역할을 하는 것으로 보고 되어진 NSP4의 염기서열을 분석하고, baculovirus expression system에서 발현하여 특성을 규명하기 위한 실험을 수행하였다. 염기서열분석 결과, AvRV1와 AvRV-2의 NSP4유전자는 모두 727개의 핵산으로 구성되며 169개의 아미노산을 coding하는 1개의 open reading frame과 2개의 glycosylation 부위가 존재하는 것으로 확인되었다.
- 조류 로타바이러스 AvRV-1과 AvRV-2의 RNA를 추출하여 전기영동을 한 결과 로타바이러스 특유의 11개 분절로 된 RNA를 관찰할 수 있었으며, 추출된 RNA를 NSP4 primer set을 이용하여 RT-PCR을 실시한 결과 727 bp 크기의 NSP4가 증폭되었음을 확인할 수 있었다.
- 조류 로타바이러스에 특이적인 항혈청을 사용하여 간접형광항체법으로 확인한 결과 Fig. 2와 같이 recombinant virus가 감염된 세포에서만 강한 형광이 관찰되었다. 그러나 바이러스를 접종하지 않은 대조군(B)에서는 어떠한 형광도 관찰되지 않았다.
- 그러나 조류 로타바이러스에 특이한 항혈청을 사용하여 Western blot한 결과 뚜렷한 NSP4를 확인할 수 있었으며 NSP4가 glycosylation된 정도에 따라 크기를 달리하는 것을 관찰하였다. 즉, baculovirus가 감염된 Sf21 cell lysate에서 baculovirus에 의해 발현된 NSP4를 관찰할 수 있었으며 28, 26, 20 kDa의 NSP4 모두 뚜렷하게 관찰되었다.
- 칠면조에서 분리된 조류 로타바이러스(AvRV-1, AvRV2)의 NSP4 유전자는 727개의 염기로 구성되어 있으며 base 41에서 시작하여 base 550을 끝으로 169개의 아미노산을 coding하는 1개의 open reading frame과 2개의 glycosylation 부위가 존재함을 확인하였다. AvRV-1과 AvRV-2의 NSP4 유전자의 염기서열은 서로 97.
- 7% 이상의 높은 상동성을 보였다. 특히 AvRV-1과 AvRV-2는 칠면조 유래 Ty-3와 각각 97.7%, 98.3%의 가장 높은 상동성을 보여 유전적으로 가장 근연관계에 있음을 알 수 있었다. 그러나 Ito 등 [15]의 보고와 같이 사람, 원숭이, 소, 말, 개, 고양이, 토끼, 쥐 등 포유류의 NSP4 유전자와는 48.
- 각 유전형에 속하는 바이러스들은 동일 그룹을 형성하였으며 AvRV-1과 AvRV-2는 조류의 유전형인 NSP4[E]에 속하였다. 특히 turkey 유래 Ty-3과 가장 유전적으로 가장 근연관계에 있음을 알 수 있었다.
후속연구
- 본 연구에서 실험한 조류 로타바이러스의 NSP4 유전자에 대한 염기서열 분석과 NSP4의 특성은 조류 로타바이러스 NSP4 유전자를 이해하는데 도움이 될 것으로 사료된다. 그러나 조류 로타바이러스 NSP4 유전자가 장관독소로 작용하여 병원성과 관련되어 있는지에 대한 여부는 이 실험을 토대로 더 많은 연구가 수행되어져야 할 것으로 생각한다.
- 5%의 낮은 상동성을 보여, 포유류 로타바이러스의 NSP4 유전자가 장관독소로 작용하는 것처럼 본 실험에서 발현된 NSP4 유전자도 장관독소로 작용하는 의문이다. 따라서 추후에 이러한 부분에 대한 연구가 수행되어져야 할 것으로 생각한다.
- 본 연구에서 실험한 조류 로타바이러스의 NSP4 유전자에 대한 염기서열 분석과 NSP4의 특성은 조류 로타바이러스 NSP4 유전자를 이해하는데 도움이 될 것으로 사료된다. 그러나 조류 로타바이러스 NSP4 유전자가 장관독소로 작용하여 병원성과 관련되어 있는지에 대한 여부는 이 실험을 토대로 더 많은 연구가 수행되어져야 할 것으로 생각한다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.