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제안 방법
- 무의 주 매운 성분인 MTB-ITC의 분리 및 정제는 김 등의 방법에 따라 RP-HPLC에 의한 성분 분리 및 정제를 시행하였다. 각 분획별로 자외선 흡수 곡선을 분석하였고 동시에 관능검사를 실시하여 매운 성분을 분리 · 정제하였다. 순도 확인을 위해 상기 후)조건 하에서">조건하에서 분리된 분획을 다시 RP-HPLC 분석을 하였다. 또한, GC/MS기기 (MD-800, FISON Instrument, USA)에 주입하여 GC profile을 얻은 후 각각의 peak에 해당되는 질량의 스펙트럼을 비교분석하여 각 peak의 성분을 분리, 동정하였다.
- 무를 깨끗이 씻어 잔뿌리를 제거한 후 2x2x2cm 크기로 썰어 모든 부위가 골고루 섞이도록 한 후 300g씩 나누어 고추가루 7g, 파 10g, 마늘 5g, 생강 1.5g, 설탕 7g, 97% 정제염 6g, 물 50m£ 씩 넣고 버무려 섞은 뒤 polyethylene bag에 담아 공기를 제거하고 밀봉하여 용기에 담아 실온 (20±2°C)에서 저장하면서 실험에 사용하였다.
- 본 연구에서는 기존의 소형무인 알타리무와 최근 새로 육종된 동자무, 옥동무를 선정하고, 기존에 깍두기 제조용으로 사용되어 오던 대형무 (봄 ; 백광무, 비안 대형무, 여름 ; 여름 대형무, 가을; 태백무, 추석무)를 선정하여 생무 및 깍두기의 숙성 중 일반 주 매운성분의 함량 및 항발암 효과를 평가하기 동물 실험을 통해서 간 cytosol 중의 glutathione S-transferase 활성을 측 정하였다.
- 후)분양받아">분양 받아 7일간 적응시킨 후 실험에 사용하였다. 사육실의 온도와 습도는 각각 20±l°C, 55±1%로 맞추었으며, 채광은 12시간을 주기로 자동조정하여 1 주일간 사육하였다. 식이는 일반 사료를 사용하였으며 MTB-ITC 이외의 무의 매운맛 성분인 isothiocyanates의 함량은 다음과 같이 측정하였다. 생무 600g에 증류수 600ml를 넣고 와링블랜더에서 곱게 마쇄 후 실온에서 1시간 방치하여 MTB-ITC를 분해시킨 후에, 그리고 깍두기는 증류수로 깨끗이 씻어 고추가루를 제거한 후 곱게 마쇄하여 1시간 방치 후에 동결 건조하여 건조물 6g을 취하여 증류수 600ml를 넣고 1시간 방치 한 후, 이들 각각을 시료로 사용하였다. 이들 생무와 깍두기 시료 각각을 Liken and Nickerson 장치를 변형한 simultaneous steam distillation and extraction 후)분리·">분리 · 정제하였다. 순도 확인을 위해 상기 조건하에서 분리된 분획을 다시 RP-HPLC 분석을 하였다. 또한, GC/MS기기 (MD-800, FISON Instrument, USA)에 주입하여 GC profile을 얻은 후 각각의 peak에 해당되는 질량의 스펙트럼을 체중은 시료를 투여하기 전과 투여가 끝난 5일 후에 측정하여 체중의 변화를 알아보았다. 시료 투여 후 24시간 단식시킨 후 희생시켜 간을 추출하였다.
- 후)1주일간">1 주일간 사육하였다. 식이는 일반 사료를 사용하였으며 각군은 오전 10시에 각 시료를 com oil에 녹여 0.2ml씩 복강 주사하였다. 실험군은 숫쥐 ">복강 주사하였다. 실험군은 숫쥐 30 마리를 5마리씩 6개군으로 나누고 제1군은 control군인 com oil을, 제2군은 BHA군으로 BHA를 1.5mg/head 농도로, 제3군은 BITC군으로 benzyl isothiocyanate를 다른 시료군과 같은 농도로 처리시 동물이 치사되어 0.5mg/head 농도로, 제4군은 무의 사염화탄소추출군 (MTB-ITC)으로 추출물을 1.5mg/head 농도로, 제5군은 무의 수증기증류군(SDE)으로 증류물을 Img/head 농도로, 제6군은 깍두기의 사염화 탄소추출군 (kakdoogi extract)은 깍두기 추출물을 1.5mg/head 농 도로 만들어 이들 각각을 복강내로 1일 1회씩 5일간 투여하였다. 체중은 시료를 투여하기 전과 투여가 끝난 5일 후에 측정하여 체중의 변화를 알아보았다.
- 후)방치한">방치 한 후, 이들 각각을 시료로 사용하였다. 이들 생무와 깍두기 시료 각각을 Liken and Nickerson 장치를 변형한 simultaneous steam distillation and extraction (SDE)장치에서 ether로 추출하여 정유 성분을 얻고 rotatory evaporator를 이용하여 용매를 완전 제거 . 농축하였다.
- 쥐에게 투여한 생무 및 깍두기 사염화탄소 추출물과 생무 수증기증류물을 정성하기 위하여 GC/MS 를 이용하여 분석하였다.
- 생무 및 깍두기의 시료는 다음과 같이 처리하였다. 즉, 생무는 파종후 45일에 수확한 무 30g을, 깍 두기는 각 숙성기간별로 30g 씩을 취하여 차거운 증류수로 씻어 고추가루 및 양념을 제거한 후, 생무 및 깍두기 각각에 0.1 M borate 완추층액 ( pH 8.5 ) 60ml를 넣고 와링블랜더에서 1분간 마쇄한 후 상온에서 1분간 방치시켜 간편한 김 등의 RP-HPLC 법에 의한 MTB-ITC 분석을 하였다.
- 후)복강 내로">복강내로 1일 1회씩 5일간 투여하였다. 체중은 시료를 투여하기 전과 투여가 끝난 5일 후에 측정하여 체중의 변화를 알아보았다. 시료 투여 후 24시간 단식시킨 후 희생시켜 간을 추출하였다.
대상 데이터
- 생후 4-5 주령의 평균 체중 25g의 ICR종 숫쥐를 분양 받아 7일간 적응시킨 후 실험에 사용하였다. 사육실의 온도와 습도는 각각 20±l°C, 55±1%로 맞추었으며, 채광은 12시간을 주기로 생후 4-5주경의 평균 체중 25g의 1CR 종 숫쥐를 분양받아 5일간 시료 투여전· 후의 체중 변화와 치 5-methylthiopentyl isothiocyanate, 4-methylsulfinyl-3- butenyl isotiHocyanate등이었으며 이들의 함량은 Table 2와 같다. 깍두기의 경우 숙성이 진행되면서 이들 isothiocyanates는 서서히 감소하기 시작하였으며, 숙성 3일 이후 급격히 감소하여 숙성 7일째에는 그 함량을 측정하기 어려웠다.
- 후)재배·">재배 · 수확하여 시료로 사용하였다. 여름에는 기후 관계로 평지 재배가 불가능하여 고냉지에 재배된 대형무를 대전 오정동 농수산물 시장에서 구입하여 사용하였으며, 다른 김치재료는 대전 오정동 농수산물 시장에서 구입하여 사용하였다.
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주재료인 무는 소형무로 알타리무, 동자무, 옥동무 3품종의 종자를, 대형무로 봄에는 백광무와 비안 대형 봄무를, 가을에는 추석무와 태백무를 흥농종 묘사에서 구입 · 파종하여 소형무는 45일간 재배 · 수확하여 사용하였고 대형무는 55-60일 재배 · 수확하여 시료로 사용하였다. 여름에는
이론/모형
- Acid-soluble sulfhydryl group은 Ellman의 방법에 의해 측정하였다. Cytosol glutathione S-transferase의 활성은 Habig 등의 방법에 따라 흡광도 측정법을 사용하여 측정 하였다.
- MTB-ITC 함량은 김 등의 방법에 따라 RP-HPLC 법에 의해 정량하였다. 이때, column은 G8을 사용하였고, 간의 단백질의 정량은 bovine serum albumin을 표준 단백질로 사용하여 Bradford 측정법에 기초를 둔 Bio-Rad 단백질 정량법에 의한 흡광도 측정치와 280nm에서의 흡광도 비교치를 사용하여 나타내었다.
- 무의 주 매운 성분인 MTB-ITC의 분리 및 정제는 김 등의 방법에 따라 RP-HPLC에 의한 성분 분리 및 정제를 시행하였다. 각 분획별로 자외선 흡수 곡선을 분석하였고 동시에 관능검사를 실시하여 매운 성분을 농축하였다. 이 정유성분에 Daxenbichler 등의 방법에 따라 분석 하였다.
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