연교적패독산(連翹敗毒散) 물 추출물(抽出物)의 마우스 Th1/Th2 사이토카인 조절(調節)에 의한 항알레르기 효과 Effect of Yeongyupaedog-san on Cytokine Levels of Mouse Th1/Th2 Cells and Anti-allergic Activity in Ovalbumin-sensitized Allergic Inflammation Model원문보기
This study was to evaluate the effect of Yeongyupaedog-san (YGPDS) on mouse Thl and Th2 cells' differentiation and ovalbumin (OVA)-induced allergic inflammation. The proliferation of mouse CD4 T cells and the secretion of Th1/Th2 cytokines under the influence of YGPDS extract were measured as well a...
This study was to evaluate the effect of Yeongyupaedog-san (YGPDS) on mouse Thl and Th2 cells' differentiation and ovalbumin (OVA)-induced allergic inflammation. The proliferation of mouse CD4 T cells and the secretion of Th1/Th2 cytokines under the influence of YGPDS extract were measured as well as the amount of ${\beta}-hexosaminidase$ in RBL-2H3 cells and the levels of $TNF-{\alpha}$ and 1L-6 secretion in Raw264.7 cells. BALB/c mice were orally administered with YGPDS extract and simultaneously inoculated with OVA to induce allergic reaction and measure the level of total IgE, OVA-specific IgE and the production of IFN- g, IL-4, IL-5 by the spleen cells. When mouse CD4 T cell were stimulated with anti-CD3 and anti-CD28 for 48 hours in various concentrations of YGPDS extract, it increased proliferation of CD4 cells by 11% in $100\;{\mu}g/^{ml}$ concentration but it showed an inhibition by 37% at $200\;{\mu}g/^{ml}$ CD4 T cells under Th1/Th2 polarizing conditions for 3 days with YGPDS resulted in mild decrease of IFN- g in Thl cells and significant decrease of IL-4 in Th2 cells at $500\;{\mu}g/^{ml}\;and\;100\;{\mu}g/^{ml}$ by 18% and 21%, respectively. YGPDS extract had a dose-dependent inhibitory effect on antigen-induced release of ${\beta}-hexosaminidase$ in RBL-2H3 cells. Treatment of YGPDS extract on LPS stimulated Raw 264.7 cells showed dose-dependent decrease in TNF-n production. Oral administration of YGPDS extract on OVA-induced allergic mice showed an inhibitory effect on the levels of total serum IgE and OVA-specific IgE by 25% and 34% , respectively. Culture of spleen cells with OVA resulted in significant increase of IFN- g by 44% and significant decrease of IL-4 and IL-5 by 56%, and 24%, respectively. The results show that YGPDS does not strongly induce mouse T cells to transform into Thl or Th2 but it has an anti-allergic effect in vitro, and that it also corrects the unbalance between the reactions of Th cells in allergic diseases.
This study was to evaluate the effect of Yeongyupaedog-san (YGPDS) on mouse Thl and Th2 cells' differentiation and ovalbumin (OVA)-induced allergic inflammation. The proliferation of mouse CD4 T cells and the secretion of Th1/Th2 cytokines under the influence of YGPDS extract were measured as well as the amount of ${\beta}-hexosaminidase$ in RBL-2H3 cells and the levels of $TNF-{\alpha}$ and 1L-6 secretion in Raw264.7 cells. BALB/c mice were orally administered with YGPDS extract and simultaneously inoculated with OVA to induce allergic reaction and measure the level of total IgE, OVA-specific IgE and the production of IFN- g, IL-4, IL-5 by the spleen cells. When mouse CD4 T cell were stimulated with anti-CD3 and anti-CD28 for 48 hours in various concentrations of YGPDS extract, it increased proliferation of CD4 cells by 11% in $100\;{\mu}g/^{ml}$ concentration but it showed an inhibition by 37% at $200\;{\mu}g/^{ml}$ CD4 T cells under Th1/Th2 polarizing conditions for 3 days with YGPDS resulted in mild decrease of IFN- g in Thl cells and significant decrease of IL-4 in Th2 cells at $500\;{\mu}g/^{ml}\;and\;100\;{\mu}g/^{ml}$ by 18% and 21%, respectively. YGPDS extract had a dose-dependent inhibitory effect on antigen-induced release of ${\beta}-hexosaminidase$ in RBL-2H3 cells. Treatment of YGPDS extract on LPS stimulated Raw 264.7 cells showed dose-dependent decrease in TNF-n production. Oral administration of YGPDS extract on OVA-induced allergic mice showed an inhibitory effect on the levels of total serum IgE and OVA-specific IgE by 25% and 34% , respectively. Culture of spleen cells with OVA resulted in significant increase of IFN- g by 44% and significant decrease of IL-4 and IL-5 by 56%, and 24%, respectively. The results show that YGPDS does not strongly induce mouse T cells to transform into Thl or Th2 but it has an anti-allergic effect in vitro, and that it also corrects the unbalance between the reactions of Th cells in allergic diseases.
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문제 정의
본 연구에서는 BALB/c mouse를 이용하여 알레르기성 면역반응을 연구하는데 적합한 OVA 모델을 통해 連翹敗毒散 물 抽 出物이 면역반응을 어떻게 조절하는지 살펴보았다5°미. 마우스에게 連翹敗毒散 물 抽出物을 4주간 직접 경구투여하면서 동시에 OVA 으로 알레 르기 를 유발하여 혈청 내의 total IgE 와 OVA-specific IgE를 측정하였고 아울러 이들 마우스의 spleen cell을 분리하여 OVA를 넣고 배양한 후에 이들 cello] 분비하는 Thl 및 Th2 cytokine의 양을 측정해 본 결과 連翹敗毒散 물 抽出 物은 매우 우수한 항알레르기 효과가 있음이 in vivo 실험을 통해 증명되었다.
본 연구에서는 連翹敗毒散의 항균작용과 알레르기성 접촉성피부염에 대한 효과 이외에 T helper cell에 대한 선택적 면역조절 작용과 아울러 항알레르기 작용이 있는지 알아보기 위해 마우스 및 RBL-2H3와 Raw 264.7 cell line을 이용하여 실험하였다.
이에 본 硏究는 連翹敗毒散 물 抽出物의 T cell에 대한 면역조절과 항알레르기 효과를 알기위해 마우스의 脾臟에서 CD4 T cell을 분리하여 Thl cell과 Th2 cell로 分化시켜 이것을 조절하는 능력을 측정하였고 RBL-2H3 cell과 Raw 264.7 cell을 이용하여 抗炎症效果를 확인하였으며 아울러 마우스에게 連翹敗毒散 물 抽出液을 경구투여하여 ovalbumin(OVA)으로 알레르기 염증을 유발시킨 후 혈청의 IgE와 cytokine 변화를 測定하였던 바, 유의성 있는 結果를 얻었기에 이에 보고하는 바이다
제안 방법
1000 rpmz 10분간 원심분리한 후 RBC lysis buffer로 적혈구를 파괴하였다. 2회 원심분리한 후 spleen cell을 trypan blue exclusion assay를 통해 生存率을 확인한 후세 포수를 측정하였다.
정상군과 대조군은 동량의 PBS를 투여하였다. A1(OH)3 와 PBS를 동량으로 섞은 용액에 0.1%의 OVA를 넣은 후 실험 시작 0일, 7일, 14일째 복강 내에 투여하여 감작하였으며 정상군은 PBS를 복강 내에 투여하였다. 항원 유발을 위해 마지막 복강투여 1주일 후부터 다시 7일간 對照群과 실험군 마우스의 비강에 OVA 용액을 20 以씩 점적하였다.
levels. All mice were intraperitoneally immunized with OVA on day Oth, 7th, 14th, and subsequently inoculated intranasall/ with OVA from day 21th to 28th. The mice were orally administered with YGPDS (1g/1kg) or PBS (Normal and Control) three times a week for 4 w能ks 서nd serum was obtained on day 28th.
in spleen cell culture. All mice were intraperitoneally immunized with OVA on dayOth, 7th, 14th, and subsequently oculaied intranasalty with OVA from day21th to 28th. The mice were orally administered with YGPDS (1g/1kg) or PBS (normal and cont「이 group) three times per week from day Oth to 27th.
Anti-CD3e (10 陽/畝)가 coating된 12-w이 1 plate에 cells/m2의 농도로 CD4 T cell을 seeding하고 anti-CD28 및 rIL-2 (5 ng/戒)을 첨가하였다. Thl polarizing condition을 만들기 위해서는 rIL-12 (5ng/n粉과 anti-IL-4 (lO/zg/n的을 넣었으며 Th2 polarizing condition을 위해서는 rIL-4 (5ng/n比)과 anti-IL-12 (10 您/副)을 추가한 후 3일간 배양하였다
OVA로 감작된 마우스를 치사시킨 후 얻은 spleen cell을 72 시간동안 OVA로 자극하여 그 상층액을 ELISA로 측정하였다. 정상군에서 얻은 spleen c이1의 IFN-g는 1553.
RBL-2H3 c이1을 IgE 와 항원으로 유도하여 P -hexosaminidase를 유리시키는 반응에 대해 連翹敗毒散 물 抽出 物이 억제하는 효과를 측정하였다. 連翹敗毒散 抽出物은 농도 의존적으로 P-hexosaminidase 유리를 유의하게 抑制하였는데 50 鹿/国에서 26%, 100 瘗/畝에서는 23%, 200 傩/畝에서는 27%, 400 陽/皿에서는 55%의 抵制率을 보여주었다(Fig.
All mice were intraperitoneally immunized with OVA on day Oth, 7th, 14th, and subsequently inoculated intranasall/ with OVA from day 21th to 28th. The mice were orally administered with YGPDS (1g/1kg) or PBS (Normal and Control) three times a week for 4 w能ks 서nd serum was obtained on day 28th. The levels of tot기 IgE are calculated by reference to standard curves of purified mouse IgE.
All mice w이e intraperitoneally immunized with OVA on day Oth, 7th, 14th, and subseauently inoculated intranasally with OVA from day 거 th to 28th. The mice were orally administered with YGPDS (1g/1kg) or PBS (Normal and Control) three times per week from day Oth to 27th. Spleen cells were obtained on day 28th and cultured in the presence of OVA.
All mice 附e intraperitoneally immunized with OVA on day Oth, 7th, 14th, and subsequently inomlated intranasally with OVA from day 21th to 28th. The mice were orally administered with YGPDS (1g/1kg) or PBS (Normal and Control) three times per week irom day Oth to 27th. Spleen cells were obtained on day 28th and cultured in the presence of OVA.
All mice were intraperitoneally immunized with OVA on dayOth, 7th, 14th, and subsequently oculaied intranasalty with OVA from day21th to 28th. The mice were orally administered with YGPDS (1g/1kg) or PBS (normal and cont「이 group) three times per week from day Oth to 27th. Spleen cells were obtained on day 28th and cultured in the presence of OVA, The levels of IFN-g are calculated by reference to standard curves of recombinant mouse st히ida「d IFN-g.
ng/戒)을 첨가하였다. Thl polarizing condition을 만들기 위해서는 rIL-12 (5ng/n粉과 anti-IL-4 (lO/zg/n的을 넣었으며 Th2 polarizing condition을 위해서는 rIL-4 (5ng/n比)과 anti-IL-12 (10 您/副)을 추가한 후 3일간 배양하였다
脾臟의 CD4 T cell을 mitogen으로 자극받았을 때의 증식 능을 測定하기 우】해, CellTiter 96 TM non-radioactive cell proliferation assay (Promega, USA.)의 protocol에 준하되 4xl05 cells/200 j以의 농도로 anti-CD3e (10 “g/i旭)가 coating된 96~well plate 에 seeding 하였다. 여기에 anti-CD28 (2傩/畝)를 넣고 co-stimulation하였다 약물은 0, 10, 50, 100, 200, 400 喝 戒의 농도로 48시간 37℃, 5% CO2 incubatoi에 배양한 후 cell titer 96R aqueous one solution reagent를 첨가하였다.
물 抽出物을 phosphate buffered saline (PBS)에 Ig/kg의 농도로 마우스에게 일주일에 세 번씩 4주간 경구투여하였다. 정상군과 대조군은 동량의 PBS를 투여하였다.
連翹敗毒散 물 抽出物이 마우스 면역세포의 Thl, Th2 반응과 OVA로 유도한 알레르기성 염증에 미치는 영향을 알아보기 위하여 連翹敗毒散 물 抽出物의 마우스 CD4 T cell의 증식률 및 Thl/Th2 cytokine 분비량을 측정하였고 RBL-2H3 cell의 p -hexosamindase 본비량과 Raw 264.7 cell의 TNF-a 분비량을 측정하였다. 또한 BALB/c 마우스에게 連翹敗毒散 물 抽出物을 경구투여하면서 동시에 OVA으로 감작시킨 후 알레르기 반응을 유도하여 total IgE와 OVA-specific IgE 및 spleen cell의 IFN-g, IL4 IL-5 생산량을 측정하여 다음과 같은 結論을 얻었다.
7 cell의 세포독성 검사를 위해서 먼저 10% FBS, 1% antibiotic-antimycotic 이 함유된 DMEM으로 배양한 후 2xl04 cells/100 以의 농도로 96-w이1 plate에 seeding하여 24시간을 배양한 후 배양액을 갈아주었다. 교체한 모든 배양액에는 50, 100, 200, 400 您/砒의 농도로 약물을 처리하여 20시간을 배양한 후에 동일한 시약을 첨가하였다. Fomaz죠n product는 microplate reader (Tecan, Austria) 를 이용하여 optical density 490-650 nm에서 측정하였다.
7 cell의 TNF-a 분비량을 측정하였다. 또한 BALB/c 마우스에게 連翹敗毒散 물 抽出物을 경구투여하면서 동시에 OVA으로 감작시킨 후 알레르기 반응을 유도하여 total IgE와 OVA-specific IgE 및 spleen cell의 IFN-g, IL4 IL-5 생산량을 측정하여 다음과 같은 結論을 얻었다.
실험동물은 12시간 낮 12시간 밤의 생활리듬을 주었으며 항온 항습 상태에서 일주일간의 적응기간을 거친 후 실험에 사용하였다. 飼料는 방사선 멸균처리한 실험동물용 사료를 정도산업(주)에서 구입하여 공급하였으며, 飮用水는 멸균처리한 증류수를 사용하였다.
)의 protocol에 준하되 4xl05 cells/200 j以의 농도로 anti-CD3e (10 “g/i旭)가 coating된 96~well plate 에 seeding 하였다. 여기에 anti-CD28 (2傩/畝)를 넣고 co-stimulation하였다 약물은 0, 10, 50, 100, 200, 400 喝 戒의 농도로 48시간 37℃, 5% CO2 incubatoi에 배양한 후 cell titer 96R aqueous one solution reagent를 첨가하였다. Raw264.
1%의 OVA를 넣은 후 실험 시작 0일, 7일, 14일째 복강 내에 투여하여 감작하였으며 정상군은 PBS를 복강 내에 투여하였다. 항원 유발을 위해 마지막 복강투여 1주일 후부터 다시 7일간 對照群과 실험군 마우스의 비강에 OVA 용액을 20 以씩 점적하였다. 28일째에 마우스를 마취시킨 후 심장 채혈하여 혈액을 채혈한 후 응고시켰다.
대상 데이터
다시 7회 wa아ling한 후 horseradish-peroxidase(HRP) conjugated streaptavidin을 100 讹씩 분주한 후 1시간 상온에 두었다. Biotinylated OVA 은 biotin N hydroxysuccinimide ester-water s이uble과 OVA를 혼합한 후 투석하여 사용하였다. 7 회 washing후 tetramethylbenzidine substrate reagent 100 [戊를 가하고 30분이 지나서 IM.
Fetal bovine serum (FBS)와 OVA (grade V)z recombinant IL-2 (rIL-2), anti-dinitrophenol(DNP)-IgE, DNP-human serum albumin (HSA), bovine serum albumin (BSA)는 Sigma에서 구입하였으며 antibiotic-antimycotic 와 RPMI 1640, DMEM 은 Invitrogen Life Technology에서 구입하였다. Magnetic cell sorting CD4(L3T4) microbeads는 Miltenyi Biotec (U.
Life Technology에서 구입하였다. Magnetic cell sorting CD4(L3T4) microbeads는 Miltenyi Biotec (U.S.A.)에서구입하였다. anti-CD3e, anti-CD28z anti-mouse IL-4, anti-mouse IL-12, rIL-4z rILJ2와 IL-4, IL-5, IFN-g 및 total IgE의 ELISA 측정에 사용된 OPT EIA set는 BD Pharmingen에서 구입하였으며 Biotin NHS는 Vector Laboratories에서 구입하였다.
)에서구입하였다. anti-CD3e, anti-CD28z anti-mouse IL-4, anti-mouse IL-12, rIL-4z rILJ2와 IL-4, IL-5, IFN-g 및 total IgE의 ELISA 측정에 사용된 OPT EIA set는 BD Pharmingen에서 구입하였으며 Biotin NHS는 Vector Laboratories에서 구입하였다.
실험동물은 12시간 낮 12시간 밤의 생활리듬을 주었으며 항온 항습 상태에서 일주일간의 적응기간을 거친 후 실험에 사용하였다. 飼料는 방사선 멸균처리한 실험동물용 사료를 정도산업(주)에서 구입하여 공급하였으며, 飮用水는 멸균처리한 증류수를 사용하였다. 飼 料와 飮用水는 충분히 공급하여 자유롭게 섭취시켰다.
본 실험은 생후 8주된 BALB/c 수컷 마우스로 멸균상태로 관리된 것을 오리엔트(주)에서 구입하여 사용하였다. 실험동물은 12시간 낮 12시간 밤의 생활리듬을 주었으며 항온 항습 상태에서 일주일간의 적응기간을 거친 후 실험에 사용하였다.
세포주는 Rat basophilie leukemia-2H3 (RBL-2H3) cell line 과 Raw264.7 macrophage cell line이며 한국세포주은행에서 분양받아 사용하였다・
염증반응과 관련한 連翹敗毒散 물 抽出物의 효과를 알아보 7] 위해 Raw 264.7 macrophage cell을 사용하였다. Raw 264.
이용액을 filter papei■로 여과한 다음 rotary vacuum evaporator (Eyelaz Japan)으로 감압 농축한 뒤 1000ml round flask에 옮겨 freezing dryer (Eyelaz Japan)로 24시간 동안 동결건조하여 건조된 분말(yield: 9.95 %)을 실험에 사용하였다.
데이터처리
實驗結果는 평균값으로 표시하였으며 SPSS 1L0을 이용하여 Student's test로 처리하였다,
이론/모형
Total IgE와 OVA-specific IgE는 28일간 連翹敗毒散 물 抽出 物을 경구 투여 후 마우스틀 심장 채혈하여 얻은 혈청에서 ELISA 방법을 이용하여 측정하였다. 連翹敗毒散 물 抽出物을 경구 투여한 마우스의 total IgE는 대조군에 비해 減少하였으나 통계적으로 유의성은 없었다.
마우스 CD4 T cell을 Thl cell과 Th2 cell로 polarization 한 후 3일간 배양하여 그 상층액의 IFN-g과 IL-4를 ELISA 방법을 이용하여 측정하였다. Thl cell의 경우 약물을 처리했을 때 IFN-g의 양은 약간 減少하였으나 통계적으로 유의하지는 않았다.
성능/효과
7 cell을 LPS로 자극한 후 連翹敗毒散 물 抽出物을 처리했을 때 TNF-a의 合成이 유의하게 농도 의존적으로 抑制하였다., 連翹敗毒散 물 抽出物은 OVA으로 알레르기성 反應을 유도한 마우스 혈청의 total IgE, OVA-specific IgE를 유의하게 減少시켰고, 마우스의 spleen cell를 OVA 처리하여 배양한 結果, IFN-ge 44% 유의하게 增加하였고, IL-4, IL-5는 각각 56%, 24% 유의하게 減少하였다.
Ⅱ.-4를 ELISA 방법을 이용하여 측정한 결과, 連翹敗毒散 抽出液이 in vitro에서는 Th2 cell로 分化하는 것을 抑制하는 경향이 있음을 확인할 수 있었다.
물 抽出物은 마우스 CD4 T cell의 증식을 100 昭 /戒에서 11%의 增加시켰으나 200 俸/i戒에서는 37% 유의하게 억제하였다. 마우스 CD4 T cell을 Thl c이1과 Th2 cell로 분극화한 후 3일간 連翹敗毒散 물 抽出物과 함께 배양한 結果, Thl cell 에서 IFN-g의 量은 약간 減少하였으나 Th2 cell에서 IL-4 값은 50 娼/畝에서 18%, 100 傩/i成에서 21%로 유의하게 減少하였다.
連翹敗毒散 물 抽出物을 경구 투여한 마우스의 total IgE는 대조군에 비해 25% 減少하였으며 OVA-specific IgE도 대조군에 비해 34% 減少 하였는데 모두 통계적으로 유의성이 있었다. 또한 IgE의 생산은 IL-4와 IL-5를 만들어내는 Th2 cell에 의해 增加하거나 IFN-g에 의해 IgE 형성을 촉진시키는 IL-4를 길항적으로 억제하는데히54) 連翹敗毒散 물 抽出物을 투여한 마우스의 spleen cell에서 분비되는 IFN-g, IL-4, IL-5를 보면 IFN-g의 경우 대조군보다 44% 增 加하였고 IL-4는 56% 減少하였으며 IL-5는 24% 減少하였으며 모두 통계적으로 유의성이 있었다.
連翹敗毒散 물 抽出物을 농도별로 넣고 마우스 CD4 T cell 을 anti-CD3 및 anti-CD28로 48시간 자극한 結果 100 姻/做보다 낮은 농도에서는 藥材를 넣지 않은 c이1과 유의한 차이가 없었으나 100 娼/戒에서 11%의 增加率을 보여주었다. 그러나 200 陽/ I圳에서 세포증식이 37% 유의하게 減少하였다(p=0.
連翹敗毒散 물 抽出物을 경구 투여한 마우스의 total IgE는 대조군에 비해 25% 減少하였으며 OVA-specific IgE도 대조군에 비해 34% 減少 하였는데 모두 통계적으로 유의성이 있었다. 또한 IgE의 생산은 IL-4와 IL-5를 만들어내는 Th2 cell에 의해 增加하거나 IFN-g에 의해 IgE 형성을 촉진시키는 IL-4를 길항적으로 억제하는데히54) 連翹敗毒散 물 抽出物을 투여한 마우스의 spleen cell에서 분비되는 IFN-g, IL-4, IL-5를 보면 IFN-g의 경우 대조군보다 44% 增 加하였고 IL-4는 56% 減少하였으며 IL-5는 24% 減少하였으며 모두 통계적으로 유의성이 있었다.
또한 連翹敗毒散 물 抽出物을 OVA 감작과 동시에 마우스에게 경구 투여했을 때 항원으로 유도된 IgE 반응을 減少시키고 Thl 반응을 유도하면서 Th2 반응을 減少시킴을 확인하였다. 따라서 連翹敗毒散 물 抽出物은 면역세포의 활성저하를 유발하지 않으면서도 不均衡한 Th2 cell로의 分化를 抑制함으로써 Thl 间을 增加하여 알레르기 질환을 발생하는 免疫不均衡을 調節하는 것으로 思料된다.
마우스 CD4 T cell을 Thl c이1과 Th2 cell로 분극화한 후 3일간 連翹敗毒散 물 抽出物과 함께 배양한 結果, Thl cell 에서 IFN-g의 量은 약간 減少하였으나 Th2 cell에서 IL-4 값은 50 娼/畝에서 18%, 100 傩/i成에서 21%로 유의하게 減少하였다. RBL-2H3 cell을 IgE와 抗原으토 감작했을 때 連翹敗毒散 물 抽 出物은 0-hexosaminidase를 유리를 유의하게 농도 의존적으로 抑制하였다.
마우스에게 連翹敗毒散 물 抽出物을 4주간 직접 경구투여하면서 동시에 OVA 으로 알레 르기 를 유발하여 혈청 내의 total IgE 와 OVA-specific IgE를 측정하였고 아울러 이들 마우스의 spleen cell을 분리하여 OVA를 넣고 배양한 후에 이들 cello] 분비하는 Thl 및 Th2 cytokine의 양을 측정해 본 결과 連翹敗毒散 물 抽出 物은 매우 우수한 항알레르기 효과가 있음이 in vivo 실험을 통해 증명되었다.
본 硏究에서는 連翹敗毒散 물 抽出物이 in vitro에서는 마우스 T cell을 Th2 cell로 유도하는 것을 抑制하는 경향이 있음을 확인하였고 아울러 알레르기 반응에 관여하는 cell의 탈과립과 염증성 사이토카인의 합성을 抑制하는 작용이 있음을 알 수 있었다. 또한 連翹敗毒散 물 抽出物을 OVA 감작과 동시에 마우스에게 경구 투여했을 때 항원으로 유도된 IgE 반응을 減少시키고 Thl 반응을 유도하면서 Th2 반응을 減少시킴을 확인하였다.
우선 連翹敗毒散 물 추출물이 anti-CD3/CD28로 CD4 T cell 을 자극했을 때 미치는 영향을 확인하기 위해 連翹敗毒散 물 추출물을 농도별로 투여한 후 MTS assay를 한 결과, cell 增殖率은 100 陽/畝 미만의 농도에서는 藥材를 넣지 않은 cell과 유의한 차이가 없었으나 100 陽/戒에서 11%의 增加率을 보여주었다. 그러나 200 陽/祀에서는 cell增殖을 37% 유의하게 抑制하였다.
Rat basophil leukemia cell (RBL-2H3)을 IgE로 감작하여 韓藥 처리후 0 -hexosaminidase의 유리되는 양을 측정한 결과, 50 陽/!圳에서 26%, 100 姻/诫에서는 23%, 200 姻/砒에서는 27%, 400健/祉에서는 55%의 抑制率을 보여주었다. 이로써 連翹敗毒散 抽出液이 in vitro에서 항원으로 유도되는 탈과립을 抑制하는 항알레르기효과가 있음을 확인할 수 있었다.
참고문헌 (53)
타다 토미오著, 황상익譯. 면역의 의미론. 서울:한울, pp 145-148, 1998
R.네스, G.윌이엄즈 共著, 최재천譯. 인간은 왜 질병에 걸리는가. 서울:사이언스북스, p 241, 1999
전필근, 권지영, 황은미, 편복양. 초기 유아기의 식이 형태와 알레르기 질환에 관한 조사. 小兒알레르기 및 호흡기, 13(1):33-46, 2003
정태호 등 共著. 최신 면역학 강의. 경북대학교 출판부, pp 332-334, 1996
Stansfield, K.A. Th1 and Th2 cells in Health and Disease. The Journal of parasitoligy, 82(6):910, 1997
서창훈, 박동일. 加味麥門冬湯이 알레르기 喘息의 호흡양상 및 기관조직의 호산구 침윤에 미치는 影響. 동의한의연구, 4:19-31, 2000
김정진, 양성완, 손낙원, 안규석. 加味生料四物湯의 抗炎症효과와 止痒膏의 아토피피부염 손상 및 止痒효과에 미치는 영향. 동의생리병리학회지. 17(3):428-435, 2003
Kobayashi, H., Mizuno N., Kutsuna H., Teramae H., Ueoku S., Onoyama J., Yamanaka K., Fujita N., Ishii M. Hochu-ekki-to suppresses development of dermatitis and elevation of serum IgE level in NC/Nga mouse. Drug Exp Clin Res. 29(2):81-84, 2003
Suzuki T., Takano I., Nagai F., Ushiyma K., Okubo T., Seto T., Ikeda S., Kano I. Suppressive effects of Hochu-ekki-to, a traditional Chinese medicine on IgE production and histamine release in mice immunized with ovalubumin. Biol. Pharm. Bull. 22:1180-1184, 1999
Kaneko Metal. Suppression of IgE produciton in mice treated with a traditional Chinese medicine, bu-zhong-yi-qi-tang (Japanese name: hochu-ekki-to). Immunopharmacology, 36(1):79-857, 1997
Ikeda Y., Kaneko A., Yamamoto M., Ishige A., Sasaki H. Possible involvement of suppression of Th2 differentiation in the anti-allergic effect of Sho-seiryu-to in mice. Jpn. J Pharmacol, 90:328-336, 2004
유태섭. 형개연교탕이 항알레르기작용에 관한 實驗的 效果. 대한한방소아과학회지, 4(1):20-29, 1990
Singh, V.K., Mehrotra, S., Agarwal, S.S. The paradigm of Th1 and Th2 cytokines: its relevance to autoimmunity and allergy. Immunol Res, 20:147-161, 1990
Jacobson, N.G,, Szabo, S.J., Weber-Nordt, R.M., Zhong, Z., Schreiber, R.D., Darnell, J.E. Interleukin 12 signaling in T helper type 1(Th1) cells involves tyrosine phosphorylation of signal tranducer and activator of transcription (Stat)3 and Stat4. J Exp Med, 181(5):1755-1762, 1995
Abehsira-Amar, O., Gibert, M., Joliy, M., Theze, J., Jankovic, D.L. IL-4 plays a dominant role in the differential development of Th0 into Th1 and Th2 cells. J Immunol, 148(12):3820-3829, 1992
Williams, C.M., Galli, S.J. The diverse potential effector and immunoregulartory roles of mast cells in allergic disease. J Allergy Clin Immunol, 105(5):847-859, 2000
Carlos, A.G., Carlos, M.L., Conceisao, S.M., Alcinda, M. Cytokines and asthma. J Invest Allergy Clin Immunol, 7(5):270-273, 1997
Hogan, S.P., Koskinen, A., Matthaei, K.I., Young, I.G., Foster, P.S. IL-5 producing CD4 T cells play a pivotal role in aeroallergen-induced eosinophilia, bronchial hyperreactivity and lung damage in mice. Am J Respir Crit Care Med, 157(1):210-218, 1998
Spergel, J.M., Mizoguchi, E., Oettgen, H., Bhan, A.K., Geha, R.S. Roles of Th1 and Th2 cytokines in a murine model of allergic dermatitis. J Clin Invest, 103:1103-1111, 1999
Hofstra, C.L., Van Ark, I., Hofman, G.l., Nijkamp, F.P., Jardieu, P.M., Van Oosterhout, A.J. Differential effects of endogenous and exogenous interferon-gamma on imunoglobulin E, celular infiltration, and aiway responsiveness in a murine model of allergic asthma. Am J Respir Cell Mol Biol. 19:826-835, 1998
Tanaka, Y., Takagaki, Y., Nishimune, T. Effects of metal elements on beta-hexosaminidase release from rat basophilic leukemia cells(RBL-2H3). Chem. Pharm. Bull, 39(8):2072-2076, 1991
Hong, C.C., Shimomura-Shimizu, M., Muroi, M., Tanamato, K. Effect of endocrine disrupting chemicals on lipopolysaccharide-induced tumor necrosis factor- $\alpha$ and nitric oxide production by mouse macrophage. Biol Pharm Bull, 27(7):1136-1139, 2004
Herz, U., Braun, A., Ruckert, T., Renz, H. Various immunological phenotypes are associated with increased airway responsiveness. Clin Exp Allergy, 28:628-634, 1998
Jarmann, E.R., Kuba, A., Montermann, E., Barlett, R.R., Reske-Kunz, A.B. Inhibition of murine IgE and immediate cutaneous hypersensitivity responses to ovalbumin by the immunomodulatory agent leflunomide. Clin Exp Immunol, 115:221-228, 1999
Boothby, M., Mora, A.L., Aronica, M.A., Youn, J., Sheller, J.R., Goenka, S. IL-4 signaling, gene transcription regulation and the control of effector T cells. Immunol Res, 23:179-191, 2001
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