A rapid, selective and sensitive reversed-phase HPLC method for the determination of promethazine in human serum was developed, validated, and applied to the pharmacokinetic study of promethazine. Promethazine and internal standard, chlorpromazine, were extracted from human serum by liquid-liquid ex...
A rapid, selective and sensitive reversed-phase HPLC method for the determination of promethazine in human serum was developed, validated, and applied to the pharmacokinetic study of promethazine. Promethazine and internal standard, chlorpromazine, were extracted from human serum by liquid-liquid extraction with n-hexane containing 0.8% isopropanol and analyzed on a Capcell Pak CN column with the mobile phase of acetonitrile-0.2 M potassium dihydrogen phosphate (42:58, v/v, adjusted to pH 6.0 with 1 M NaOH). Detection wavelength of 251 nm and flow rate of 0.9 mL/min were fixed for the study. The assay robustness for the changes of mobile phase pH, organic solvent content, and flow rate was confirmed by $3^{3}$ factorial design using a fixed promethazine concentration (10 ng/mL) with respect to its peak area and retention time. In addition, the ruggedness of this method was investigated at three different laboratories using same quality control (QC) samples. This method showed linear response over the concentration range of 1-40 ng/mL with correlation coefficients greater than 0.999. The lower limit of quantification using 1 mL of serum was 1 ng/mL, which was sensitive enough for pharmacokinetic studies. The overall accuracy of the quality control samples ranged from 96.15 to 105.40% for promethazine with overall precision (% C.V.) being 6.70-11.22%. The relative mean recovery of promethazine for human serum was 63.54%. Stability (freeze-thaw and short-term) studies showed that promethazine was stable during storage, or during the assay procedure in human serum. However, the storage at $-80^{\circ}C$ for 4 weeks showed that promethazine was not stable. Extracted serum sample and stock solution were not allowed to stand at ambient temperature for 12 hr prior to injection. The peak area and retention time of promethazine were not significantly affected by the changes of mobile phase pH, organic solvent content, and flow rate under the conditions studied. This method showed good ruggedness (within 15% C.V.) and was successfully used for the analysis of promethazine in human serum samples for the pharmacokinetic studies of orally administered Himazin tablet (25 mg as promethazine hydrochloride) at three different laboratories, demonstrating the suitability of the method.
A rapid, selective and sensitive reversed-phase HPLC method for the determination of promethazine in human serum was developed, validated, and applied to the pharmacokinetic study of promethazine. Promethazine and internal standard, chlorpromazine, were extracted from human serum by liquid-liquid extraction with n-hexane containing 0.8% isopropanol and analyzed on a Capcell Pak CN column with the mobile phase of acetonitrile-0.2 M potassium dihydrogen phosphate (42:58, v/v, adjusted to pH 6.0 with 1 M NaOH). Detection wavelength of 251 nm and flow rate of 0.9 mL/min were fixed for the study. The assay robustness for the changes of mobile phase pH, organic solvent content, and flow rate was confirmed by $3^{3}$ factorial design using a fixed promethazine concentration (10 ng/mL) with respect to its peak area and retention time. In addition, the ruggedness of this method was investigated at three different laboratories using same quality control (QC) samples. This method showed linear response over the concentration range of 1-40 ng/mL with correlation coefficients greater than 0.999. The lower limit of quantification using 1 mL of serum was 1 ng/mL, which was sensitive enough for pharmacokinetic studies. The overall accuracy of the quality control samples ranged from 96.15 to 105.40% for promethazine with overall precision (% C.V.) being 6.70-11.22%. The relative mean recovery of promethazine for human serum was 63.54%. Stability (freeze-thaw and short-term) studies showed that promethazine was stable during storage, or during the assay procedure in human serum. However, the storage at $-80^{\circ}C$ for 4 weeks showed that promethazine was not stable. Extracted serum sample and stock solution were not allowed to stand at ambient temperature for 12 hr prior to injection. The peak area and retention time of promethazine were not significantly affected by the changes of mobile phase pH, organic solvent content, and flow rate under the conditions studied. This method showed good ruggedness (within 15% C.V.) and was successfully used for the analysis of promethazine in human serum samples for the pharmacokinetic studies of orally administered Himazin tablet (25 mg as promethazine hydrochloride) at three different laboratories, demonstrating the suitability of the method.
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문제 정의
11. 22.)에 따라 염산프로메타진 제제인 히마진정 25 mg(염산프로메타진) 1내지 2정을 1회 경구 투여한 생체이용률 시험을 순차적으로 수행하여 한국인에서의 약물 동태 학적 특성을 파악하고자 하였다. 본 시험은 각 시험기관별로 별도의 기관별 임상시험 심사위원회(institutional review board, IRBX 거쳐 시험계획서의 승인을.
검증하여 분석의 견고성과 확신성이 확립된 혈청 중 프로메타진의 최종 분석법을 확립하고자 하였다. 아울러 이렇게 검증된 분석법을 이용하여 서로 다른 세 기관에서 각각 8명씩 총 24 명의 건강한 성인을 대상으로 식품의약품안전청이 고시한 생물학적 동등성 시험 기준*식품의약품안전청 고시 제 2002-60 호, 2002.
본 연구에서는 혈청 중 프로메타진의 분석법을 개발하여 그 견고성을 검증하고, 개발한 분석법의 확신성 확보를 위하여 별도의 다른 두 기관에서 이를 순차적으로 확인 . 검증하여 분석의 견고성과 확신성이 확립된 혈청 중 프로메타진의 최종 분석법을 확립하고자 하였다.
제안 방법
생체이용률시험을 위하여 각 기관에서는 8명의 피험자에 대하여 난수발생법에 따라 무작위 배열한 다음, “히마진 정 25 mg(염산프로메타진)” 동일 투약일에 투여하고, 투약량은 ''히마진 정 25 mg(염산프로메타진)” 1내지 2정을 1회 경구투여하였다. 피험자들 모두에게 heparin-locked(l 50 unit/mL) Angiocatheter(JELCO™, 22Q Johnson & Johnson Medical, Pomezia, 이탈리아)를 팔 또는 손등 정맥부위에 설치하고 240 ml 물과 함께 복용시켰다.
채혈 후마다 LV. catheter 안에 잔류하는 혈액의 응고를 방지하기 위하여 주사용 헤파린을 넣은 주시용 생리식염수를 주입하였다. 채혈된 혈액은 3, 000이에서 20분간 원심분리한 후 즉시 혈청 분리 관을 사용하여 혈청을 채취하고 분석 시까지 영하 80 에서 보관하였다.
«히마진 정 25 mg(염산프로메타진)” 1내지 2정을 각 기관별로 8명의 피험자에게 경구 투여하여 얻은 각 피험자의 약물속도론 적 파라미터 인 최고혈청중농도 (j), 최고 혈청 중농도 도달 시간(Tmax), 채혈시간 t와 무한대까지의 혈청중 약물농도- 시간곡선하 면적 (AUG) 및 소실반감기 (tm) 등은 WinNonlin 프로그램이용하여 구하였다. 모든 측정치와 계산치는 평균 ± 표준편차로 나타내었다.
분석법을 확립 . 검증하여 생물학적동등성시험을 위한 표준지침을 마련하고자 식품의약품안전청이 고시한 생물학적 동등성 시험 기준5)에 따라 서로 다른 세 기관에서 각 8 명의 건강한 한국인 성인 남성 총 24명을 대상으로 “히마진정 25 mg(염산프로메타진)”을 제1기관에서는 1정을, 제2 및 3기관에서는 2정씩을 경구 투여하여 생체이용률시험을 한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다.
여기에서 얻은 내부표준물질의 피크 면적에 대한 프로메타진의 피크 면적비를 구하여 검량선을 작성하였으며 하루에 실험을 5번 시행하여 일내 재현성을 구하였고 연속하여 5일간 실험을 행하여 일간 재현성을 구하였을 뿐만 아니라 1, 2, 10 및 20ng/mL 농도에서 각각 5 회 측정하여 정확성을 평가하였고 상기 농도에서 물에 대한 평균 상대추출율을 구하였다. 또한, 동결해동 안정성(-80。。 24시간 동결/상온 해동), 단기실온 안정성(24시간 상온 보관) 및 장기 안정성 (-8(TC 4주 보관) 시험은 QL(2ng/mL) 및 QH(20ng/mL) 농도 각 3개씩 이용하여 각각 3회 반복 측정하여 프로메타진 면적으로부터 안정성을 평가하였고 조제 후 안정성(시료 추출 후 6 및 12시간 보관) 시험은 프로메타진(10ng/mL) 및 내부표준물질 (50imL), 표준원액 안정성(상온 6시간 보관) 시험은 프로메타진QOng/mL) 및 내부표준물질(0.2 ng/mL) 각 3개씩 이용하여 각각 3회 반복 측정하여 안정성을 평가하였다.
모든 피험자는 정해진 투약일 일주일 전부터 항생제 및 진통제 등을 포함한 일체의 약물 복용을 금지하였을 뿐 아니라 흡연, 크산틴계 음료 및 음주 등을 제한 관리하였고, 시험 전날 오후 8시부터 시험 당일 투약 후 4시간까지는 금식시켰다. 또한 시험 기간 중에는 각 기관 연구자의 지시에 따라 모두 같은 식단의 식사 및 경미한 활동을 하게 하였다.
32세 이었다. 본 시험에 참여하는 지원자를 대상으로 각 시험기관에서는 생체 이용률 시험 설명회를 실시하여 이 시험의 목적, 방법, 약물 유해반응 발생 가능성 및 이에 대한 대책 등에 대하여 설명한 후 이들로부터 자유의사에 의한 시험참가동의서를 받은 후 생체이용률시험을 실시하였다.
9mL/min, 주입 량 50 μL 및 UV 검출기(251 nm)를 이용하여 정량하였다. 분석법의 확신성 확보를 위하여 제 1기관에서 분석법을 확립한 후 동일 검량 선용 표준혈청과 QC 시료를 이용하여 순차적으로 제 2 및 3기관에서 이를 확인하였으며 다음과 같이 최종 분석법을 확립하고 각각의 검량선을 작성하였다.
아울러, 분석법의 견고성을 확보하기 위해 혈청 중 프로메타진 농도분석 시 가장 영향을 크게 미칠 가능성이 있는 이 동상의 pH, 유기용매의 함량 및 유속의 변동에 의한 영향을 일정농도의 프로메타진 혈청 시료(lOng/mL)를 이용하여 나타난 피크 면적과 출현시간을 기준값으로 하여 그 변동 영향을 평가하였다(Table I). 이때, 각 변동요인이 결합되어 나타나는 효과를 분석하기 위하여 상호작용효과를 고려한 아래와 같은 모형을 가정하여 얻은 상기 기준값에 대하여 SPSS 프로그램을 이용하여 일반선형모형에 의한 ANOVA 분석을 실시하였다.
약물분석 기기로는 HPLC용 펌프(LC lOADvp, Shimadzu, Kyoto, 일본), 컬럼은 Capcell Pak CN(입자경 5 jim, 4.6 mm x 250 mm, Shiseido Co., Tokyo, 일본), 적분계 (Model Class LC-10, Shimadzu, Kyoto, 일본), 원심분리기 (URION 55R, Hanil Science Industrial Co., 인천, 한국), 탁상용 혼합기 (G560, Scientific Co., Bohemia, NY, 미국), PH측정기 (Model 7, Coming Ltd., Halstead Essex England, 영국)를사용하였다.
상층을 제거한 후 이 용액 50iL를 취하여 HIIC에 주입하였다. 여기에서 얻은 내부표준물질의 피크 면적에 대한 프로메타진의 피크 면적비를 구하여 검량선을 작성하였으며 하루에 실험을 5번 시행하여 일내 재현성을 구하였고 연속하여 5일간 실험을 행하여 일간 재현성을 구하였을 뿐만 아니라 1, 2, 10 및 20ng/mL 농도에서 각각 5 회 측정하여 정확성을 평가하였고 상기 농도에서 물에 대한 평균 상대추출율을 구하였다. 또한, 동결해동 안정성(-80。。 24시간 동결/상온 해동), 단기실온 안정성(24시간 상온 보관) 및 장기 안정성 (-8(TC 4주 보관) 시험은 QL(2ng/mL) 및 QH(20ng/mL) 농도 각 3개씩 이용하여 각각 3회 반복 측정하여 프로메타진 면적으로부터 안정성을 평가하였고 조제 후 안정성(시료 추출 후 6 및 12시간 보관) 시험은 프로메타진(10ng/mL) 및 내부표준물질 (50imL), 표준원액 안정성(상온 6시간 보관) 시험은 프로메타진QOng/mL) 및 내부표준물질(0.
염산프로메타진 투여 후 사람 혈청 중 프로메타진의 HPLC 분석법을 확립 . 검증하여 생물학적동등성시험을 위한 표준지침을 마련하고자 식품의약품안전청이 고시한 생물학적 동등성 시험 기준5)에 따라 서로 다른 세 기관에서 각 8 명의 건강한 한국인 성인 남성 총 24명을 대상으로 “히마진정 25 mg(염산프로메타진)”을 제1기관에서는 1정을, 제2 및 3기관에서는 2정씩을 경구 투여하여 생체이용률시험을 한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다.
염산프로메타진 표준품을 물에 녹여 농도를 프로메타진으로서 1000μg/mL로 만든 후 4℃에서 냉장 보관시키고, 이용액을 검량선용 표준혈청으로 희석하여 혈청 중 약물농도가 각각 1, 2, 5, 10, 20 및 40ng/mL씩 되도록 검량 선용 표준혈청 액을 조제하였다. 각각의 검량선용 표준혈청 ImL 에 내부표준물질로 클로르프로마진 메탄올 용액 (0.
5, 2, 3, 4, 6, 8, 12 24 및 36시간에 총 12회 채혈하였다. 채혈 방법은 I.V. catheter 중에 남아 있는 헤파린 처리 생리식염수를 완전히 제거하기 위해 매번 약 2mg 혈액을 빼내어 버리고 약 8 mb의 혈액을 채취하여 피험자 관리번호와 채혈 시간이 기재되어 있는 vacutainer에 넣었다. 채혈 후마다 LV.
채혈은 염산프로메타진 투약 시 최종상 반감기는 5-14시간,최고 혈중 농도에 도달하는 시간은 3.07 ±121시간임을6) 토대로 반감기의 3배 이상인 36시간 동안 실시하였고, 채혈 횟수는 약물 투약 직전과 투약 후 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 6, 8, 12 24 및 36시간에 총 12회 채혈하였다. 채혈 방법은 I.
피험자들 모두에게 heparin-locked(l 50 unit/mL) Angiocatheter(JELCO™, 22Q Johnson & Johnson Medical, Pomezia, 이탈리아)를 팔 또는 손등 정맥부위에 설치하고 240 ml 물과 함께 복용시켰다. 피험자 간 복약 시간의 차이는 채혈시간을 고려하여 약 2분 간격으로 하였다.
피험자들 모두에게 heparin-locked(l 50 unit/mL) Angiocatheter(JELCO™, 22Q Johnson & Johnson Medical, Pomezia, 이탈리아)를 팔 또는 손등 정맥부위에 설치하고 240 ml 물과 함께 복용시켰다. 피험자 간 복약 시간의 차이는 채혈시간을 고려하여 약 2분 간격으로 하였다.
한편, 혈청 시료의 분석은 먼저 피험자로부터 각 시간별로 채취하여 영하 80℃에 보관했던 혈청 시료를 실온에 방치하여 녹인 후 3초간 진탕한 다음 이 혈청 1 mL를 취하여 시험관에 옮기고 여기에 내부표준물질로 클로르프로마진 메탄올 용액 (0.5 /mL) 100 gL 및 1M 수산화나트륨액 500를 가한 후 상기 검량선 작성을 위한 추출법에 따라 추출하여 얻어진 크로마토그램으로부터 내부표준물질의 피이 크면 적에 대한 프로메타진의 피이크 면적비를 구하여 미리 작성된 검량선에 의해 혈청 시료 중 프로메타진의 농도를 산출하였다.
혈청 중 프로메타진의 정량은 이미 보고된 프로메타진 HPLC 분석법을 참고하고, 6, 7)일부 수정하여 상기 기기 조건하 실온에서 이동상으로는 아세토니트릴 :0.2M 인산이수소 칼륨 액 =42:58(v/v, 1 M NaOH로 pH를 6.0으로 조정)의 혼합용액을 사용하였으며 유속 0.9mL/min, 주입 량 50 μL 및 UV 검출기(251 nm)를 이용하여 정량하였다. 분석법의 확신성 확보를 위하여 제 1기관에서 분석법을 확립한 후 동일 검량 선용 표준혈청과 QC 시료를 이용하여 순차적으로 제 2 및 3기관에서 이를 확인하였으며 다음과 같이 최종 분석법을 확립하고 각각의 검량선을 작성하였다.
대상 데이터
건강한 성인 지원자를 각각 모집하였다. 각 기관별로 전문의사의 건강진단을 실시하여 선정기준에 모두 합당하고 제외기준에 해당되지 않은 자로서 생체 이용률 시험에 적합한 건강인으로 판정된 자 각 8명씩 총 24명을 피험자로 선정하였다. 이 시험의 피험자로 선정된 사람들의 평균 체중은 70.
염산프로메타진 표준품 및 내부표준물질로 사용한 클로르프로마진(이상 Sigma Chemical Co., St Louis, MO, 미국, Figure 1), HPLC용 아세토니트릴(Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ, 미국), 인산이수소칼륨(YMoi Pure Chemicals Co., Kyoto, 일본), 생리식염수 및 헤파린(이상 중외제약, 서울, 한국)은 시판품을, 증류수는 Milli Q(Millipore Co., Milford,MA, 미국)에서 18MQ-cm로 통과시킨 것을 사용하였다. 기타 시약들은 특급 및 1급 시약들을 그대로 사용하였다.
피 험자는 식품의 약품안전청 이 고시 한 생물학적동등성 시 험기준5) 제 10조(피험자의 선정 ) 및 제11조(피험자의 제외기준) 에 따라 서로 다른 세 기관에서 지원자 모집공고를 통하여 19~55세의 건강한 성인 지원자를 각각 모집하였다. 각 기관별로 전문의사의 건강진단을 실시하여 선정기준에 모두 합당하고 제외기준에 해당되지 않은 자로서 생체 이용률 시험에 적합한 건강인으로 판정된 자 각 8명씩 총 24명을 피험자로 선정하였다.
데이터처리
이용하여 구하였다. 모든 측정치와 계산치는 평균 ± 표준편차로 나타내었다.
평가하였다(Table I). 이때, 각 변동요인이 결합되어 나타나는 효과를 분석하기 위하여 상호작용효과를 고려한 아래와 같은 모형을 가정하여 얻은 상기 기준값에 대하여 SPSS 프로그램을 이용하여 일반선형모형에 의한 ANOVA 분석을 실시하였다.
이론/모형
건강 성인의 대조혈청과 대조혈청에 내부표준물질인 클로르프로마진과 프로메타진을 함께 가한 것 및 염산프로메타진 정제 투여 후 1.5시간째의 혈청을 본 시험방법에 따라 HPLCS. 분석하여 얻은 크로마토그램을 Figure 2에 나타내었다.
성능/효과
1. 내부표준물질을 클로르프로마진으로 하여 HPLC 크로마토그램을 분석한 결과 혈청 성분 등 내인성 물질의 간섭없이 프로메타진 및 내부표준물질이 양호하게 분리되었다.
2. 혈청시료로부터 구한 프로메타진 검량선은 l~40ng/mL 범위에서 양호한 직선성을 나타내었고 최저 정량한계는 1 ng/mL이었다. 확립한 분석법을 검증한 결과 intra- 및 inter- day의 정확성 및 정밀성이 모두 15% 이내로 나타나 이 분석법은 충분한 감도, 정확성 및 정밀성이 있음을 확인할 수 있었다.
3. 프로메타진에 대해 확립한 HPLC 분석조건에서의 이동상의 pH, 유기용매의 함량 및 유속의 변화에 따른 약물 피크 면적이나 출현시간에 미치는 영향을 측정하여 요인분석을 실시한 결과 각 변동요인에 대한 수준에서는 약물 피크 면적은 유의한 차이가 나타나지 않아 이 분석법에 대한 견고성을 확보할 수 있었을 뿐 아니라 서로 다른 세 기관에서 QC 시료를 사용하여 각각 검증한 결과 정확성과 정밀성의 상대표준 편차가 모두 15% 이내로 나타나 이 분석법은 확신성이 있음을 알 수 있었다
4. 총 24명의 건강한 성인 지원자를 대상으로 “히마진 정 25 mg(염산프로메타진)”을 제 1기관에서는 1정, 제 2 및 3기관에서는 2정을 경구 투여하였고, 염산프로메타진 50 mg을 16 명에게 경구 투여한 결과 프로메타진의 평균 AUCt(ng . hr/ mL)는.59 ±80.32, Cmax(ng/mL)fe 12.57 ±8.78, Whr) 는 2.34±1.09, tm(hr)는 7.89±3.38이었다.
확립한 분석법을 검증한 결과 intra- 및 inter- day의 정확성 및 정밀성이 모두 15% 이내로 나타나 이 분석법은 충분한 감도, 정확성 및 정밀성이 있음을 확인할 수 있었다. 또한 동결해동 및 단기실온 안정시험 결과 초기 측정치에 대한 변동성이 모두 10% 이내로 나타나 안정하였으나 장기, 조제 후 및 표준원액 안정성이 확보되지 않은 결과를 나타내어 표준 용액은 사용할 때마다 새로이 조제하여 바로 사용할 것이 권장되며 모든 시료의 분석은 채취 즉시 시행하고 최종 추출 시료는 곧바로 분석하는 것이 바람직함을 알 수 있었다.
)는 세 기관 모두 15% 이하로 나타났고, 1, 2, 10 및 20ng/mL의 농도에서 5회 반복 측정하여 얻은 표준편차(% deviation)도 세 기관 모두 ±15% (최저 정량한계농도에서는 ±20%)이내로 나타나 확신성을 확보할 수 있었다(Table II). 또한, Table Ⅲ에는 피크 면적을 기준으로 분산분석한 결과를 나타내었으며 이동상의 pH, 유기용매의 함량 및 유속의 변화에 따른 약물 피크 면적에 미치는 영향을 측정하여 요인분석을 실시한 결과 각 변동요인에 대한 각 수준에서는 유의한 차이 (p< 0.05)가 나타나지 않아 이 분석법에 대한 견고성을 확보할 수 있었다. 그렇지만 피크 출현 시간을 기준으로 하였을 때에는 유의성(p< 0.
01; 제3기관)로 1 ~40ng/mL 범위에서 모두 양호한 직선성을 나타내었다. 또한, 이 농도범위에 있어서 프로메타진의 일내 및 일간 변동계수(C.V.)는 세 기관 모두 15% 이하로 나타났고, 1, 2, 10 및 20ng/mL의 농도에서 5회 반복 측정하여 얻은 표준편차(% deviation)도 세 기관 모두 ±15% (최저 정량한계농도에서는 ±20%)이내로 나타나 확신성을 확보할 수 있었다(Table II). 또한, Table Ⅲ에는 피크 면적을 기준으로 분산분석한 결과를 나타내었으며 이동상의 pH, 유기용매의 함량 및 유속의 변화에 따른 약물 피크 면적에 미치는 영향을 측정하여 요인분석을 실시한 결과 각 변동요인에 대한 각 수준에서는 유의한 차이 (p< 0.
3분이었으며 각 물질의 분리상태는 양호하였다. 신호대 잡음비 (S/N ratioX 5 이상으로 하고 일내 및 일간 변동계수의 크기를 20% 미만으로 하였을 때의 최저정 량한계(LLOQ, lower limit of quantitation) 는 Ing/mL이었으며, 수용액 중 약물을 추출한 것의 평균피이크 면적에 대한 추출 시료 중 약물의 피이크 면적 비로부터 구한 평균 추출회수율(%)은 63.54이었다. 혈청 시료로부터 구한 염산프로메타진의 검량선은 피이크 면적비(y)= 0.
05) 있는 차이를 나타내었다. 아울러 동결해동 및 단기실온 안정성 시험 결과, 각 QC 시료에 대해 각각 3회 반복 측정하여 얻은 측정 초기치에 대한 변동계수가 모두 10% 이내로 안정함을 나타내었으나 장기, 조제 후 및 표준원액 안정성이 확보되지 않은 결과를 나타내어 표준 용액은 사용할 때마다 새로이 조제하여 바로 사용할 것이 권장되며 모든 시료의 분석은 채취 즉시 시행하고 최종 추출 시료는 곧바로 분석하는 것이 바람직함을 알 수 있었다.
이로부터 혈청 중 프로메타진에 대한 상기 HPLC 분석법은 인체에 대한 생체이용률 시험에 이용될 수 있는 충분한 감도와 정밀성, 정확성, 견고성 및 확신성을 갖고 있음을 알 수 있었다.
혈청시료로부터 구한 프로메타진 검량선은 l~40ng/mL 범위에서 양호한 직선성을 나타내었고 최저 정량한계는 1 ng/mL이었다. 확립한 분석법을 검증한 결과 intra- 및 inter- day의 정확성 및 정밀성이 모두 15% 이내로 나타나 이 분석법은 충분한 감도, 정확성 및 정밀성이 있음을 확인할 수 있었다. 또한 동결해동 및 단기실온 안정시험 결과 초기 측정치에 대한 변동성이 모두 10% 이내로 나타나 안정하였으나 장기, 조제 후 및 표준원액 안정성이 확보되지 않은 결과를 나타내어 표준 용액은 사용할 때마다 새로이 조제하여 바로 사용할 것이 권장되며 모든 시료의 분석은 채취 즉시 시행하고 최종 추출 시료는 곧바로 분석하는 것이 바람직함을 알 수 있었다.
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