선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- , 2002). 본 연구에서는 삼투조절에 관여하는 호르몬과 수용체의 발현변화를 조사하여 호르몬유전자의 발현과 어떠한 상관관계가 있는지 알아보았다. 염분농도 차이에 따른 GHR의 mRNA 발현변화는 유의적인 차이가 없었으나, PRLR의 mRNA 발현은 저염분 환경에서 약간 증가되었다.
- 본 연구의 목적은 저염분 환경조건에 일시적으로 순치된 넙치의 PRL과 GH mRNA 발현변화를 분자 수준에서 밝히고, 삼투압조절 기관의 PRLR과 GHR의 mRNA 발현양상을 조사하는데 있다. 본 연구는 넙치의 염분변화에 따른 항상성 유지에 필요한 삼투조절기구에 관한 있는 기초자료를 제공할 것이며, 광염성 어류의 PRL과 GH의 기능 해석 및 작용기전 연구에도 도움이 될 것으로 판단된다.
제안 방법
- 사용된 Oligoprimers는 각 유전자에 특이적으로 보존된 영역을 기초로 주문·제작되 었다 (Bioneer) (Table 1). PCR반응의 로그함수적 분석을 위하여 total volume 10mL에 template 100ng, oligo primer 각 10 mM 농도를 사용하여 뇌하수체 PRL, GH, β-actin 및 신장, 장, 아가미 PRLR, GHR, β-actin의 적정 cycle수를 조사한 후, RT-PCR을 수행하였다 (Fig. 1). 각각의 PCR산물에 대한 예상되는 크기는 β-actine 350 bp, PRLe 529 bp, GH는 376 bp, PRLRe 287 bp 그리고 GHRe 328 bp이며.
- 5% agarose gel에서 확인하였으며, band intensity는 BioCapt 전기영동장치 (V L, France)로 즉정하였다. 또한 증폭된 cDNA band는 제한효소로 절단하여 확인한 후, TA cloning방법으로 TOPO vector (Invitrogen, CA, USA)에 삽입하여 염기서열을 분석하여 확인하였다.
- 4 g), 국립수산과학원 동해수산연구소 연어연구센터에서 자연일장조건 및 수온 17℃로 조정된 원통형수조 (200 L) 4개에 수조당 8마리씩 수용하였다. 이후 지하수를 이용하여 1일 간격으로 염분농도 32 psu, 25 psu, 15 psu 및 5 psu로 각각 맞추었으며, 3일 동안 소형 폭기장치로 산소를 동일하게 공급하며 무급이 상태로 수용하였다.
- 1). 조직별 PRLR과 GHR의 mRNA levele optimized 된 조건과 동일한 RT-PCR방법으로 조사하였다. 장의 PRLR mRNA 발현변화는 32 psu 대조군 보다 15 psu와 5 psu의 저염분 환경에서 약간 증가하는 경향이 관찰되었으나, GHR mRNA는 염분에 따른 유의적인 차이를 보이지 않았다 (Fig.
- 보관하였다 (n=4). 조직으로부터 total RNA는 RNA prep kit (Bioneer, Daejeon, Korea)로 주줄한 후 (각 1 ㎍), M-MLV reverse transcriptase (Bioneer)를 사용하여 역전사반응을 실시하여 cDNA를 합성하였다.
- PCR조건은 95℃ (30 sec), 52℃ (30 sec), 72℃ (30 sec)로 하였다. 증폭된 RT-PCR산물은 1.5% agarose gel에서 확인하였으며, band intensity는 BioCapt 전기영동장치 (V L, France)로 즉정하였다. 또한 증폭된 cDNA band는 제한효소로 절단하여 확인한 후, TA cloning방법으로 TOPO vector (Invitrogen, CA, USA)에 삽입하여 염기서열을 분석하여 확인하였다.
대상 데이터
- 실험에 사용된 넙치치어는 해동수산(강릉시, 강원도)으로부터 제공 받았으며 (32마리, 평균전장 17.5±0.8cm, 평균체중 28±0.4 g), 국립수산과학원 동해수산연구소 연어연구센터에서 자연일장조건 및 수온 17℃로 조정된 원통형수조 (200 L) 4개에 수조당 8마리씩 수용하였다. 이후 지하수를 이용하여 1일 간격으로 염분농도 32 psu, 25 psu, 15 psu 및 5 psu로 각각 맞추었으며, 3일 동안 소형 폭기장치로 산소를 동일하게 공급하며 무급이 상태로 수용하였다.
데이터처리
- 실험결과로부터 얻어진 자료 값 사이의 유의성 검정은 SPSS 통계 패키지 (V.12)에 의한 ANOVA 및 Duncan's multiple range test로 검정하였다 (P< 0.05).
이론/모형
- 염분변화에 따른 GH, PRL, GHR 및 PRLR 유전자발현 변화는 semi-quantitative RT-PCR 방법으로 확인하였다. 사용된 Oligoprimers는 각 유전자에 특이적으로 보존된 영역을 기초로 주문·제작되 었다 (Bioneer) (Table 1).
- 1). 염분변화에 따른 넙치의 뇌하수체 PRL 및 GH의 mRNA levele optimized cycle에 따라 semi-quantitative RT-PCR 분석법으로 측정하였다. 각각의 PCR 산물의 염기서열을 무작위 분석한 결과, 기존의 넙치 염기서열이 확인되었다 (data not shown).
성능/효과
- 염분변화에 따른 넙치의 뇌하수체 PRL 및 GH의 mRNA levele optimized cycle에 따라 semi-quantitative RT-PCR 분석법으로 측정하였다. 각각의 PCR 산물의 염기서열을 무작위 분석한 결과, 기존의 넙치 염기서열이 확인되었다 (data not shown). 넙치치어의 뇌하수체 PRL mRNA levele 대조군 해수(32 psu)와 비교하였을 때, 어체가 수용된 사육수의 염분 농도에 반비례하여 유의적으로 증가하였으며, 25 psu에서는 약 2.
- 경골어류의 대표적인 삼투압조절기관으로 알려진 장, 신장 및 아가미의 PRLR, GHR, β-actin을 20, 25, 30, 35, 40 및 45 PCR cycle을 실시한 결과, PRLRe 35 cycles, GHR는 35 cycles, β-actine 30 cycles 전후에서 지수함수적으로 증가하였다 (Fig. 1). 조직별 PRLR과 GHR의 mRNA levele optimized 된 조건과 동일한 RT-PCR방법으로 조사하였다.
- 각각의 PCR 산물의 염기서열을 무작위 분석한 결과, 기존의 넙치 염기서열이 확인되었다 (data not shown). 넙치치어의 뇌하수체 PRL mRNA levele 대조군 해수(32 psu)와 비교하였을 때, 어체가 수용된 사육수의 염분 농도에 반비례하여 유의적으로 증가하였으며, 25 psu에서는 약 2.3배, 15 psu와 5 psu 에서는 4배 이상 증가하였다 (Fig. 2). 한편, 뇌하수체 GH mRNA의 발현은 염분농도에 따른 유의적인 차이를 보이지 않았다 (Fig.
- 뇌하수체 PRL, GH, β-actin을 15, 20, 25, 30, 35 및 40 PCR cycle을 실시한 결과, PRLe 30 cycles, GH는 23 cycles, β-actine 30 cycles전후에서 지수함수적으로 증가하였다 (Fig. 1). 염분변화에 따른 넙치의 뇌하수체 PRL 및 GH의 mRNA levele optimized cycle에 따라 semi-quantitative RT-PCR 분석법으로 측정하였다.
- 염분농도 차이에 따른 GHR의 mRNA 발현변화는 유의적인 차이가 없었으나, PRLR의 mRNA 발현은 저염분 환경에서 약간 증가되었다. 따라서, GHRe 넙치의 저염분 환경에 있어 큰 역할을 하고 있지 않으며, 삼투압 조절 기관에서 발현되는 PRLRe 뇌하수체에서 생산되는 PRL과 함께 저염분 환경에 적응할 때 중요한 역할을 담당하고 있을 가능성이 시사되었다. 광염성 해산어인 복어 (Takifugu rubripes)의 경우 100% 해수보다 25% 해수환경에서 PRL의 mRNA level이 증가되 었고, 아가미의 염류세포에서는 저염분환경에 적응시켰을 때 Na+/K+-ATPase활성이 저하되고, 개구부의 크기는 작아지며, 그 수 또한 적어지면서 어체내의 이온유출이 억제되는 메커니즘이 알려져 있다(Lee et al.
- , 2006). 본 실험에서도 데이터로 나타내지는 않았지만, 혈장내 칼슘 및 인산염의 농도는 환경수중의 염분 농도에 관계없이 일정하였다. 향후, 광염성 해산어가 저염분 환경에 적응하는 과정에서 PRL과 GH의 역할을 더욱 잘 이해하기 위해서는 수용체에 대한 GH, PRL의 직접적인 작용을 in vivo 및 in vitro 실험을 통하여 조사하여야 할 것이다.
- , 2002). 본 연구에서도 넙치를 저염분 환경에 3일 동안 순치시킨 후 뇌하수체로부터 PRL mRNA 발현수준을 조사한 결과, 염분농도가 낮을수록 증가하는 경향을 보였다. 따라서, 넙치의 담수적응에 PRL이 중요한 역할을 하고 있다고 판단된다.
- 4). 아가미에서도 이와 유사한 결과로 저염분 환경에 수용한 넙치에서 PRLR mRNA 발현이 증가되었고, GHR의 발현은 유의적인 차이가 없었다 (Fig. 5).
- 이상의 결과를 정리하면, 넙치치어가 저염분 환경수에 3일간 순치되었을때 뇌하수체 PRL 및 신장, 장, 아가미의 PRLR 생산이 증가되었으나, GH 및 GHRe 큰 변화가 없었다. 따라서, PRLe 넙치의 저염분 해양환경에 적응하는 과정에 중요한 역할을 담당하는 호르몬으로 판단되며, 그 수용체인 PRLR의 발현과도 밀접한 관련이 있음을 시사하고 있다.
- 조직별 PRLR과 GHR의 mRNA levele optimized 된 조건과 동일한 RT-PCR방법으로 조사하였다. 장의 PRLR mRNA 발현변화는 32 psu 대조군 보다 15 psu와 5 psu의 저염분 환경에서 약간 증가하는 경향이 관찰되었으나, GHR mRNA는 염분에 따른 유의적인 차이를 보이지 않았다 (Fig. 3). 신장에서도 PRLR mRNA 발현양상은 저염분 환경수에서 약간 증가하였으며, GHR mRNA는 유의적인 변화가 없었다 (Fig.
후속연구
- 있다. 본 연구는 넙치의 염분변화에 따른 항상성 유지에 필요한 삼투조절기구에 관한 있는 기초자료를 제공할 것이며, 광염성 어류의 PRL과 GH의 기능 해석 및 작용기전 연구에도 도움이 될 것으로 판단된다.
- 본 실험에서도 데이터로 나타내지는 않았지만, 혈장내 칼슘 및 인산염의 농도는 환경수중의 염분 농도에 관계없이 일정하였다. 향후, 광염성 해산어가 저염분 환경에 적응하는 과정에서 PRL과 GH의 역할을 더욱 잘 이해하기 위해서는 수용체에 대한 GH, PRL의 직접적인 작용을 in vivo 및 in vitro 실험을 통하여 조사하여야 할 것이다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.