지역사회 및 병원 임상검체에서 분리한 대장균의 항생제 내성 양상 The Trend of Antimicrobial Resistance of Escherichia coli isolated from Healthy Volunteers of Community and Hospital Patients in Incheon원문보기
본 연구에서는 지역사회 일반인에게 분리된 대장균과 종합병원을 내원한 설사환자에서 분리한 대장균에 대하여 항생제 내성현황을 모니터링 하였다. 2006년 2월$\sim$7월까지 인천의 지역사회 일반인 692명의 대변으로부터 순수하게 분리된 대장균 491 균주에 대해 항생제 내성균을 조사한 결과, tetracycline 내성이 46.6%, ampicillin 내성이 41.1% ticarcillin 내성이 37.9%였다. 또한 3차 의료기관의 설사환자에서 분리된 대장균 120 균주에 대하여 ampicillin 내성이 66.9%, ticareillin 내성이 63.8%, tetracycline 내성이 47.2%였다. $\beta$-lactam 분해효소(extended spectrum $\beta$-lactamase)를 생성하는 대장균은 지역사회 일반인의 경우 0.6%, 설사질환자의 경우4..1%로 각각 분리되었다.
본 연구에서는 지역사회 일반인에게 분리된 대장균과 종합병원을 내원한 설사환자에서 분리한 대장균에 대하여 항생제 내성현황을 모니터링 하였다. 2006년 2월$\sim$7월까지 인천의 지역사회 일반인 692명의 대변으로부터 순수하게 분리된 대장균 491 균주에 대해 항생제 내성균을 조사한 결과, tetracycline 내성이 46.6%, ampicillin 내성이 41.1% ticarcillin 내성이 37.9%였다. 또한 3차 의료기관의 설사환자에서 분리된 대장균 120 균주에 대하여 ampicillin 내성이 66.9%, ticareillin 내성이 63.8%, tetracycline 내성이 47.2%였다. $\beta$-lactam 분해효소(extended spectrum $\beta$-lactamase)를 생성하는 대장균은 지역사회 일반인의 경우 0.6%, 설사질환자의 경우4..1%로 각각 분리되었다.
We monitored antibiotic resistance of Escherichia coli isolates from healthy volunteers of community and hospital patients from February to July in 2006. From disc diffusion test on 4915 E. coli isolates from healthy volunteers of the community, the resistance rates were as follows; tetracycline res...
We monitored antibiotic resistance of Escherichia coli isolates from healthy volunteers of community and hospital patients from February to July in 2006. From disc diffusion test on 4915 E. coli isolates from healthy volunteers of the community, the resistance rates were as follows; tetracycline resistant, 46.6%; ampicillin resistant, 41.1%; ticarcillin resistant,37.9%. From disc diffusion test on 120 E. coli isolates from hospital patients, the resistance rates were as follows: ampicillin resistant, 66.9%; ticarcillin resistant, 63.8%; tetracycline resistant, 47.2%. Extended spectrum $\beta$-lactamase producing E. coli were isolated 0.6% and 4.1% from healthy volunteers and hospital patients.
We monitored antibiotic resistance of Escherichia coli isolates from healthy volunteers of community and hospital patients from February to July in 2006. From disc diffusion test on 4915 E. coli isolates from healthy volunteers of the community, the resistance rates were as follows; tetracycline resistant, 46.6%; ampicillin resistant, 41.1%; ticarcillin resistant,37.9%. From disc diffusion test on 120 E. coli isolates from hospital patients, the resistance rates were as follows: ampicillin resistant, 66.9%; ticarcillin resistant, 63.8%; tetracycline resistant, 47.2%. Extended spectrum $\beta$-lactamase producing E. coli were isolated 0.6% and 4.1% from healthy volunteers and hospital patients.
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문제 정의
본 연구는 인천지역 일반인들을 대상으로 대장균의 항생제 내성 현황을 병원 내원환자와 비교하여 단면적 연구를 통해 살펴보았다. 다제내성균의 병원-지역사회간 교류의 양상에 대한 규명은 현재까지 거의 연구가 거의 없는 실정으로 전파경로의 파악은 다제내성균 감염관리 대책 마련에 필수적이다.
본 연구에서는 지역사회에서 식품 및 약국 또는 소규모 병 • 의 원 등에서 항생제 등이 남용되면서 내성균이 출현하고 일반사희에 파급되어 있을 가능성이 있다 사료되어, 건강한 사람들의 대변에서 대장균을 분리, 항생제 내성 현황을 조사하였으며 종합병원의 임상검체와 그 내성률을 비교하여 항생제 치료와 내성 관리를 위한 기초 자료로 제공하고자 수행하였다(19, 21).
제안 방법
세균 현탁액을 MHA 한천배지에 고르게 접종한 후, 일정한 간격을 두고 cefotaxime (30㎍), cefotaxime (30 ㎍)+clavulanic acid (10 gg), ceftazidime (30)xg), ceftazidime (30 ㎍)+clavulanic acid (10㎍)를 각 각 함유한 디스크를 올려놓았다. 37℃ 항온기에 18시간 배양한 후 각 항생제 디스크 주위에 생긴 성장 억제환의 크기를 측정하여, clavulanic acid의 P- lactamase 억제효과에 의한 억제대의 확장현상이 5 mm 이상으로 관찰되면 ESBL 생산 양성으로 판정하였다. 결과의 정확성을 위해 대조균주 K.
면봉으로 균액을 묻혀서 MHA plate 배지 표면에 골고루 바른 다음 실온에 5분간 방치한 후 항생제 disc (BBL, Becton Dickinson)를 올려놓았다. 37℃에서 24 시간 배양한 후 억제환의 크기를 mm 단위로 측정한 후 CLSI 기준에 따라 판정하였다. 본 시험에 사용한 항생제 디스크는 Table 1과 같이 총 21종을 사용하였으며, 정도관리 균주로 E.
13). TSA (Difco, USA)에 순수배양된 E. coli 단독 집락을 멸균 MHB (Mueller Hinton Broth, Difco, USA)에 McFarland No. 0.5가 되도록 현탁하였다. 면봉으로 균액을 묻혀서 MHA plate 배지 표면에 골고루 바른 다음 실온에 5분간 방치한 후 항생제 disc (BBL, Becton Dickinson)를 올려놓았다.
5가 되도록 현탁하였다. 면봉으로 균액을 묻혀서 MHA plate 배지 표면에 골고루 바른 다음 실온에 5분간 방치한 후 항생제 disc (BBL, Becton Dickinson)를 올려놓았다. 37℃에서 24 시간 배양한 후 억제환의 크기를 mm 단위로 측정한 후 CLSI 기준에 따라 판정하였다.
수행하였다. 세균 현탁액을 MHA 한천배지에 고르게 접종한 후, 일정한 간격을 두고 cefotaxime (30㎍), cefotaxime (30 ㎍)+clavulanic acid (10 gg), ceftazidime (30)xg), ceftazidime (30 ㎍)+clavulanic acid (10㎍)를 각 각 함유한 디스크를 올려놓았다. 37℃ 항온기에 18시간 배양한 후 각 항생제 디스크 주위에 생긴 성장 억제환의 크기를 측정하여, clavulanic acid의 P- lactamase 억제효과에 의한 억제대의 확장현상이 5 mm 이상으로 관찰되면 ESBL 생산 양성으로 판정하였다.
(EMB agar, Difco, USA) 배지에 도말하였다. 전형적인 금속성의 녹색 광택을 띄는 콜로니를 Kligler Iron Agar (KIA, Difco, US A) 에 접종한 후 A/A (acid/acid) 성상을 띄면서 gas 가 발생한 균주에 대해 PCR (Applied Biosystems 2720 Thermal cycler)을 실시하여 대장균을 동정하였다(II). 사용된 primer는 대장균의 glucuronidase 유전자를 검출하기 위한 primer로 염기서열 754번째에서 773번째에 해당하는 UAL-754; 5'-AAAACGGCA AGAAAAAGCAG-3, 와 UAR-900; 5'-ACGCGr(3GITACACTCT TGCG-3을 사용하였다.
대상 데이터
2006년 2월부터 7월까지 인천 지역에 거주하는 일반인 692명의 대변을 수거하였으며, 대조군으로 인천시내 K 종합병원을 내원한 환자 중 447명을 대상으로 E. coli를 분리하고 항균제 감수성 검사를 실시하였다.
37℃ 항온기에 18시간 배양한 후 각 항생제 디스크 주위에 생긴 성장 억제환의 크기를 측정하여, clavulanic acid의 P- lactamase 억제효과에 의한 억제대의 확장현상이 5 mm 이상으로 관찰되면 ESBL 생산 양성으로 판정하였다. 결과의 정확성을 위해 대조균주 K. pneumoniae ATCC 70063를 동시에 시험하였다 (1, 6).
37℃에서 24 시간 배양한 후 억제환의 크기를 mm 단위로 측정한 후 CLSI 기준에 따라 판정하였다. 본 시험에 사용한 항생제 디스크는 Table 1과 같이 총 21종을 사용하였으며, 정도관리 균주로 E. coli ATCC 25922를 사용하였다.
전형적인 금속성의 녹색 광택을 띄는 콜로니를 Kligler Iron Agar (KIA, Difco, US A) 에 접종한 후 A/A (acid/acid) 성상을 띄면서 gas 가 발생한 균주에 대해 PCR (Applied Biosystems 2720 Thermal cycler)을 실시하여 대장균을 동정하였다(II). 사용된 primer는 대장균의 glucuronidase 유전자를 검출하기 위한 primer로 염기서열 754번째에서 773번째에 해당하는 UAL-754; 5'-AAAACGGCA AGAAAAAGCAG-3, 와 UAR-900; 5'-ACGCGr(3GITACACTCT TGCG-3을 사용하였다. PCR 조건은 denaturation을 94℃에서 20 초, annealing을 63℃에서 25초, extention을 72℃에서 45초의 과정을 40회 반복한 후 마지막으로 extention을 72℃에서 5분간 시행하였다.
이론/모형
Ampicillin과 Cephalothin에 내성이면서 [3-lactarnase를 생산하는 균주의 ESBL 생산여부를 확인하기 위해 double disk synergy 시험법을 수행하였다. 세균 현탁액을 MHA 한천배지에 고르게 접종한 후, 일정한 간격을 두고 cefotaxime (30㎍), cefotaxime (30 ㎍)+clavulanic acid (10 gg), ceftazidime (30)xg), ceftazidime (30 ㎍)+clavulanic acid (10㎍)를 각 각 함유한 디스크를 올려놓았다.
항생제에 대한 감수성 시험은 CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute)의 방법에 따라 디스크 확산법을 실시하였다 (12, 13). TSA (Difco, USA)에 순수배양된 E.
성능/효과
ESBL 생성 E. coli는 Table 4와 같이, 정상인의 경우 0.6%의 분리율을 보인 반면, 설사질환자의 경우 4.1%의 분리율을 보여 병원을 내원한 설사질환자의 ESBL 생성 E. coli의 평균 분리율이 정상인보다 높은 것으로 나타났다.
공시약제에 대한 분리주의 내성 유형은 최소 1종류 이상의 약제에 대해, 최고 17종류의 약제에 대해 내성을 나타내는 다양한 다 제 내성형을 나타내었으며, 일반인의 경우 1제 내성형(17.6%), 2제 내성형(8.7%), 3제 내성형(9.9%), 4제 내성형(8.1%), 5제 내 성형(8.5%), 6제 내성형(7.2%), 7제 내성형(4.8%), 8제 내성형 (3.5%)의 분포를 보였다. 설사환자의 경우 1제 내성형(12.
8%까지 보고되었다. 본 연구에서 ESBL 생성주의 분리율은 설사질환자의 경우 4.1%로 이는 송 등(5)이 발표한 2000년 전국 12개 병원에서 분리된 ESBL 생성 E. coli 의 평균 분리율인 95%보다 낮게 나타났다.
coli, EPEC) 대장균의 항생제 내성을 조사한 연구에 의하면 tetracycEne 56%, streptomycin 39%, ampicillin 33%, kanamycin 25%의 내성을 보였다(16). 본 연구의 설사질환자의 내성률은 전자의 연구 결과와 비교해봤을 때, 전체적으로 낮게 나타났다.
실험 대조군으로 인천시내 K 종합병원에 내원한 환자 중 설사 질환 증상을 나타내는 447명의 분변에서 대장균을 분리한 결과 26.8%의 분리율을 보였다. 또한 692명의 일반인을 대상으로 491 주의 대장균을 분리하여 70.
일반인들은 21종의 항생제 중 cephalosporin 계열인 cefoxitin, cabapenem 계열인 imipenem, aminoglycoside 계열인 strepto- mycin과 amikacin 및 tetracycline을 제외한 나머지 16종의 항생제에 대한 내성률이 설사환자군보다 유의한 수준으로 낮게 나타났다 (P<0.05).
일반인의 항생제 내성 양상을 보면, tetracycline에 대한 내성이 46.6%로 가장 높았으며, 다음으로 ampicillin 내성(41.1%), ticarcillin 내성(37.9%), streptomycin 내성(31.0%), nalidixic acid 내성(23.6%), sulfamethoxazole/trimethoprim 내성(21.8%), cephalothiii 내성(13.4%), chloramphenicol 내성(8.2%), gentamicin 내성(8.() %), kanamycin 내성(7.9%) 순으로 높았다. 한편 설사질환자2 경우, ampicilhn에 대한 내성이 66.
후속연구
다제내성균의 병원-지역사회간 교류의 양상에 대한 규명은 현재까지 거의 연구가 거의 없는 실정으로 전파경로의 파악은 다제내성균 감염관리 대책 마련에 필수적이다. 앞으로 내성세균이 분리된 환자들의 임상 역학적 자료 조사와 병원내 또는 지역사회 획득 여부를 조사함으로써, 항생제 내성 획득에 기여하는 위험요인을 규명할 필요가 있다. 즉, 항생제 내성 세균들을 대상으로 pulsed-field-gel electrophoresis (PFGE) typing을 이용한 분자 역학적 조사를 시행하고, 덴드로그램 분석(dendrogram analysis)을 하여, 병원내 획득 내성균 간의 분자적인 친밀도 (molecular relatedness)를 조사할 수 있다.
참고문헌 (23)
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