서울시내에서 유통되는 식품과 식품접객업소(집단급식소 포함)의 조리식품을 대상으로 식중독 원인균 분석 및 위생미생물 검사를 실시한 결과, 분리된 대장균의 항생제 감수성 시험을 통하여 이들의 내성 정도를 파악하고, 내성유전자와 병원성유전자의 분포도 알아보았다. 모두 1313건의 샘플 중 50건에서 대장균이 검출되어 3.8%의 검출률을 보였다. 이중 육회 1건에서 장출혈성대장균 O26 1건, 김밥에서 장병원성대장균 1건이 각각 검출되었다. 50건의 대장균중 50%가 16종의 항생제에 모두 감수성을 보였으며 내성이 높게 나타난 항생제는 ampicillin(36%), amoxicillin/clavulanic acid(32%) 그리고 tetracycline(22%)의 순이었다. 이들의 내성유전자 분포는 TEM이 1건, tetB 4건이 각각 검출되었다.
서울시내에서 유통되는 식품과 식품접객업소(집단급식소 포함)의 조리식품을 대상으로 식중독 원인균 분석 및 위생미생물 검사를 실시한 결과, 분리된 대장균의 항생제 감수성 시험을 통하여 이들의 내성 정도를 파악하고, 내성유전자와 병원성유전자의 분포도 알아보았다. 모두 1313건의 샘플 중 50건에서 대장균이 검출되어 3.8%의 검출률을 보였다. 이중 육회 1건에서 장출혈성대장균 O26 1건, 김밥에서 장병원성대장균 1건이 각각 검출되었다. 50건의 대장균중 50%가 16종의 항생제에 모두 감수성을 보였으며 내성이 높게 나타난 항생제는 ampicillin(36%), amoxicillin/clavulanic acid(32%) 그리고 tetracycline(22%)의 순이었다. 이들의 내성유전자 분포는 TEM이 1건, tetB 4건이 각각 검출되었다.
Distribution of foodborne E. coli strains, antimicrobial resistant genes and antimicrobial susceptibility have been carried out on E. coli isolated from commercial and cooked foods distributed food in Seoul. Of total 1,313 samples, fifty samples(3.8%) were found E. coli that included one of the ETEC...
Distribution of foodborne E. coli strains, antimicrobial resistant genes and antimicrobial susceptibility have been carried out on E. coli isolated from commercial and cooked foods distributed food in Seoul. Of total 1,313 samples, fifty samples(3.8%) were found E. coli that included one of the ETEC and EPEC, respectively. The serotype of ETEC in seasoning raw meat was E. coli O26 and produced Verotoxin 2. Fifty percentage of total isolates were susceptible to all antimicrobial agents. Specially, there were ampicillin(36%), amoxicillin/clavulanic acid(32%) and tetracycline(22%) etc. Resistant gene (tetB) were found in four tetracycline resistant E. coli strains, and TEM gene was found in one ampicillin resistant E. coli isolate.
Distribution of foodborne E. coli strains, antimicrobial resistant genes and antimicrobial susceptibility have been carried out on E. coli isolated from commercial and cooked foods distributed food in Seoul. Of total 1,313 samples, fifty samples(3.8%) were found E. coli that included one of the ETEC and EPEC, respectively. The serotype of ETEC in seasoning raw meat was E. coli O26 and produced Verotoxin 2. Fifty percentage of total isolates were susceptible to all antimicrobial agents. Specially, there were ampicillin(36%), amoxicillin/clavulanic acid(32%) and tetracycline(22%) etc. Resistant gene (tetB) were found in four tetracycline resistant E. coli strains, and TEM gene was found in one ampicillin resistant E. coli isolate.
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문제 정의
병원성 대장균 역시 여러 항생제에 내성을 갖는 균주가 증가하였고, 각종 질환의 원인균으로 작용하는 병원성 대장균에 사용되던 항생제가 듣지 않아 새로운 계열의 항생제로 대체해서 치료하는 경우가 늘어나고 있다. 내성균은 다양한 경로를 통해 빠르게 전파될 수 있으며, 특히 현대사회는 전 세계가 1일 생활권이 가능하게 되고 식품오염에 의한 내성세균의 전파가 빠르게 진행될 수 있는 문제가 있음으로 식품에서 분리된 세균의 항생제 감수성 조사 분석을 통하여 식품에서 유래하는 병원성 세균의 식품위생학적 기초 자료를 제공하고자 한다.
east/과 aggR이 검출된 보고가 있었다23-28). 이처럼 EAEC 유전자는 이미 광범위하게 퍼져있다고 추정할 수 있기 때문에, 본 연구에서는 서울시내에 유통되는 식품에서 분리된 대장균의 항생제내성률과 EAEC 를 비롯한 병원성 대장균의 유전자 분포에 관하여 조사하였다. 그러나 실험 결과 EAEC 유전자는 한건도 검출되지 않았다.
제안 방법
8-lactam 계 항생제에 대한 내성유전자 분석을 위해 blaSHV(F:5'-TCG CCT GTG TAT TAT CTC CC-3', B:5'-CGC AGA TAA ATC ACC ACA ATG-3'), blaOXA(F:5'-GCA GCG CCA GTG CAT CAA C-3', B:5'-CCG CAT CAA ATG CCA TAA GTG-3') blaTEM(F:5'-GAG TAT TCA ACA TTT TCG T-3',B:5'-ACC AAT GCT TAA TCA GTG A-3')의 증폭은 95oC 에서 15분간 예비가열한 후 94oC에서 denaturation 30초, 58oC 에서 annealing 30초, 72oC에서 extention 1분을 30 cycles 실시하고, 72oC 에서 10분간 반응하였다16).
c이용 premix solution 10 l, Template DNA 7 l, primer mixture 3 l로 total volume 20 l로 하였으며 PCR condition온 다음과 같다. 94oC에서 10분간 예비가열한 후 94oC에서 30초, 62oC에서 20초, 72oC에서 40초를 35 cycles 실시하고, 72oC 에서 5분간 반응하였다. PCR 반응액은 1.
Brain heart infusion agar (Difco, US A) 에 균을 접종하여18〜24 시간 배양 후 균을 멸균식염수에 농후하게 풀어 균 부유액을 제조하였고, 이 균액을 slide glass 에 도말한후 시판되는 대장균 O 항혈청 (Denka Seiken, Japan) 을 동량 첨가하여 응집반응 유무로 혈청형 동정을 실시하였다.
E. coli detection kit (Genet bio, Seoul, Korea)를 사용해 multiplex PCR로 5 가지 병원성 대장균 유전자를 분석하였다. E.
3개의 9mL EC broth(Difco, USA)에 시험용액 1mL씩을 각각 접종하고 44oC에서 24시간 배양 후 가스발생 양성인 경우 EMB 배지 (DifCo, USA) 에 접종하여 35oC에서 24시간배양 하였다. EMB 배지에서 전형적인 집락을 분리하여 보통한천배지에 순수배양 후 API 20E kit (BioMerieux, France) 를 사용하여 동정하였다.
94oC에서 10분간 예비가열한 후 94oC에서 30초, 62oC에서 20초, 72oC에서 40초를 35 cycles 실시하고, 72oC 에서 5분간 반응하였다. PCR 반응액은 1.5% agarose gel 에서 전기 영동하여 특정 병원성 대장균 유전자가 존재하는지확인하였다 (Table 2).
그 결과 검출률이 가장 높은 대장균을 대상으로 그 분포를 살펴보았으며, 분리된 대장균의 항생제 감수성 시험을 통하여 이들의 내성 정도를 파악하고, 내성 유전자와 병원성유전자의 분포도 알아보았다.
디스크환 시험법에 의한 16종의 항생제 감수성 시험결과 내성이 높게 나타난 Ampicillin, amoxicillin/clavulanic acid, tetracycline 등 3 종류의 항생제를 대상으로 내성 유전자 분포를 조사 하였다. 모든 PCR의 증폭물질은 0.
등 3 종류의 항생제를 대상으로 내성 유전자 분포를 조사 하였다. 모든 PCR의 증폭물질은 0.5% ethidium bromide가 첨가된 1.5% agarose gel에서 전기영동을 실시하고 밴드를 확인하였다.
서울시내에서 유통되는 식품과 식품접객업소(집단급식소 포함)의 조리식품을 대상으로 식중독 원인균 분석 및우〕 생미생물 검사를 실시한 결과, 분리된 대장균의 항생제 감수성 시험을 통하여 이들의 내성 정도를 파악하고, 내성 유전자와 병원성유전자의 분포도 알아보았다. 모두 1313건의 샘플 중 50건에서 대장균이 검출되어 3.
대상 데이터
2010년 1월부터 6월까지 서울시내에서 유통되는 식품과 식품접객업소(집단급식소 포함)의 조리식품 중 각 구청을 통해 서울시보건환경연구원으로 검사 의뢰된 제품에서 분리된 대장균 50주를 시험대상으로 하였다. 검사 대상이 된 식품은 모두 1, 313건으로 김밥과 샌드위치 등을 포함한 즉석 섭취 식품이 635건으로 가장 많았으며, 접객업소 등에서 제공되는 조리음식이 374건, 선선편의식품 115건, 조미 건포류 85건, 조미식품 77건, 과채가공품 14건, 젓갈류 13건 등이었다.
본 연구에서는 2010년 1월부터 6월까지 서울 시내에서 유통되는 식품과 식품접객업소(집단급식소 포함)의 조리식품을 대상으로 식중독 원인균 분석 및 위생미생물 검사를 실시하였다. 그 결과 검출률이 가장 높은 대장균을 대상으로 그 분포를 살펴보았으며, 분리된 대장균의 항생제 감수성 시험을 통하여 이들의 내성 정도를 파악하고, 내성 유전자와 병원성유전자의 분포도 알아보았다.
이론/모형
순수 분리된 대장균을 Tryptic soy broth(Difco, USA)에서 37oC로 4시간 진탕 배양하고, Cole의 방법에 따라 DNA 를 주출하였다15). 증균 배양된 가검물 1 ml을 microcentrifuge tube 에 옮겨 14, 000 rpm 에서 10분간 원심분리 하였다.
항생제 감수성 시험은 Clinical and Laboratory Standards Institute (CL SI) guidelines 에 의해 disc diffusion method로 다음과 같이 실시하였다. Mueller Hinton broth (Difco, USA) 에서 진탕배양 된 균액의 농도를 MacFarland No.
성능/효과
2010년 상반기 유통식품에서 분리된 대장균의 항생제 감수성 시험 결과는 시험균주의 50%인 25균주는 16종의 항생제에 대한 내성을 보이지 않았으며, 각 항생제에 대한 내성은 ampicillin (AM)에 대한 내성이 36%로 가장 높았으며, amoxicillin/clavulanic acid (AMC) 과 tetracycline (TE)의 내성이 각각 32%, 22%였다. 이들의 내성 양상은 모두 17가지 패턴이었으며, 2제 내성을 가진 균주 중 8균주가 AM - AMC에 내성을 보였다(Fig.
이중 육회 1건에서 장출혈성대장균 O26 1건, 김밥에서 장병원성대장균 1건이 각각 검출되었다. 50건의 대장균 중 50%가 16종의 항생제에 모두 감수성을 보였으며 내성이 높게 나타난 항생제는 ampicillin(36%), amoxicillin/ clavulanic acid(32%) 그리고 tetracycline(22%)의 순이었다.이들의 내성유전자 분포는 TEM 이 1건, tetB 4건이 각각 검출되었다.
대장균 50주를 시험대상으로 하였다. 검사 대상이 된 식품은 모두 1, 313건으로 김밥과 샌드위치 등을 포함한 즉석 섭취 식품이 635건으로 가장 많았으며, 접객업소 등에서 제공되는 조리음식이 374건, 선선편의식품 115건, 조미 건포류 85건, 조미식품 77건, 과채가공품 14건, 젓갈류 13건 등이었다.
그러나 실험 결과 EAEC 유전자는 한건도 검출되지 않았다. 그리고 대표적인 그람 음성균인 E. coli에 대한 항생제 감수성 시험 결과는 세 파로스포린 계 항생제 와 아미 노글리 코시 드계 항생제 에 모두 감수성이 높았으며 전체 균주의 50%는 16가지 항생제에 모두 감수성을 보였다. 내성이 높게 나타난 항생제에 대한 내성 유전자 분포를 살펴보면, 최근 국내 대형병원의 임상검체에서 분리되는 E.
coli 중 하나로 현재 전 세계적으로 증가하고 있는 non-O157 strain중 가장 흔한 serotype으로 알려져 있다18-21). 그리고 포장마차에서 판매되는 김밥에서 검출된 대장균에서는 eaeA 유전자를 갖는 장병 원성 대장균 (EPEC)도 1건 검출 되었다.
식품에서 분리한 50건의 대장균을 대상으로 병원성 대장균 형별을 조사한 결과 vero toxin 2를 생산하는 장 출혈성 대장균 O26 1건, eaeA 유전자를 가진 장병원성대장균 1건이 검출되었다.
ampicillin (AM)에 대한 내성이 36%로 가장 높았으며, amoxicillin/clavulanic acid (AMC) 과 tetracycline (TE)의 내성이 각각 32%, 22%였다. 이들의 내성 양상은 모두 17가지 패턴이었으며, 2제 내성을 가진 균주 중 8균주가 AM - AMC에 내성을 보였다(Fig. 1, Table 5).
항생제 감수성 시험 결과 AM과 AMC에 내성을 갖는 20균주를 대상으로 8-lactam계 항생제 내성 유전자분포를 모니터링 한 결과 1균주에서 857bp의 크기를 가진 TEM 유전자가 검출되었으며 그 외 유전자는 검출되지 않았다.
항생제 감수성 시험 결과 TC 에 내성을 갖는 11균주를 대상으로 TC 내성유전자의 분포를 모니터링 한 결과 4균주 (8%)에서 tetB가 검출되 었고 그 외 유전자는 검출되지 않았다.
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