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문제 정의
- 액체 크로마토그래피 /질량분석법은 형광검출법이나 가스 크로마토그래피법 등과 달리 별도의 유도체화 과정이 필요하지 않으며, 내부표준물질 선택에 제한을 받지 않는 장점이 있다. 또한 기존의 가스크로마토그래피 법이나 형광검출법에 비해 시료의 전처리나 검량에 있어서 시간이 절약되는 장점을 갖고 있다 尸 따라서 본 연구는 젊은 성인의 혈장 콜린 농도를 액체 크로마토그래피 /질량분석법을 이용하여 분석하고, 식사 속의 콜린 섭취량은 효소법을 이용하여 분석하여 혈장 콜린 농도와 콜린 섭취량이나 다른 영양소 섭취량과의 상관성을 파악하고자 하였다.
- 본 연구는 대전지역에 거주하고 있는 만 20세 이상 30 세 미만의 성인 남녀 각각 15명씩 총 30명을 대상으로 1일 콜린 섭취량과 혈장 콜린농도를 분석하고, 그 상관성을 파악하고자 수행되었다. 식품 중의 콜린 분석은 효会법을 사용하였고, 혈장콜린 농도는 액체크로마토그래피/질량분석 방법 m을 사용하여 분석하였다.
제안 방법
- 원심분리된 상층액을 HP1100 series LC/MSD (Agilent, USA)를 이용하여 분석하였다. Choline과 Choline-trime- thyl-dg-choline의 분리는 순상 컬럼 (Nova-Pak®, Waters, USA) 를 사용하였으며, 이동상은 10 mM ammonium ace tate (pH 3, A) 와 메탄올(B)을 기울기용 리법을 이용하여 0.8 mL/min의 유속으로 흘려주었다. 질량분석기의 이온화법은 atmospheric pressure ionization- electrospray ioni zation (API—ESI)을 이용하였다.
- 질량분석기의 이온화법은 atmospheric pressure ionization- electrospray ioni zation (API—ESI)을 이용하였다. Choline과 Choline—tri- methyl-dg-choline은 positive ion mode에서 각각의 물질의 [M + H]4■ 형태를 선택적으로 selective ion monitc- ring (SIM) mode를 사용하여 분석하였다.
- 구하였다. 그 외상완위 측정용 줄자를 이용하여 상완 위를 측정하였고, Caliper (SKYNDEX, USA) 를 사용하여 상완 삼두근의 피하지 방 두겹집기를 측정하였다.
- 사용하였다. 그리고 앞에서 중량을 측정한 음식을 영양평가 프로그램 (CAN-PRO 2.0) 을 이용하여 콜린 이외의 영양소 섭취량을 산출하 였다.
- 정량하였다. 시료에 phospholipase D와 choline oxi- dase를 처리하여 생성되는 과산화수소를 peroxidase와 함께 4-aminoantipyrine 및 3, 5-dimethoxy-N-ethyl-N (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -sodium aniline와 반응시키면 정량적으로 산화축합해 청색 색소를 생성하는데, 그 청색색소의 흡광도를 비색 정량하여 대상자들의 콜린 섭취량을 산출하였다.
- 시료 60 “L에 내부표준 물질인 Choline -trimethyl-d9-choline 이 10 “mol/L농도로 포함된 Acetonitrile을 180 “L 첨가하여 제 단백시킨 후 12, 000 rpm에서 2분간 원심분리하였다. 원심분리된 상층액을 HP1100 series LC/MSD (Agilent, USA)를 이용하여 분석하였다. Choline과 Choline-trime- thyl-dg-choline의 분리는 순상 컬럼 (Nova-Pak®, Waters, USA) 를 사용하였으며, 이동상은 10 mM ammonium ace tate (pH 3, A) 와 메탄올(B)을 기울기용 리법을 이용하여 0.
- 조사 대상자들에 대한 식사 섭취 조사는 섭취한 식품을 동량 수거 (duplicate food collection严하여 직접 분석하는 방법을 이용하였다콜린 섭취량은 1일 섭취한 음식 전량을 수거하여 개개 음식의 중량을 재고, 함께 잘 혼합한 후 -70°C 의 deep freezer와 동결건조기를 사용하여 건조시켜서 분말화하고 진공포장하여 -20°C에서 냉동 보관하면서 콜린 분석에 사용하였다. 그리고 앞에서 중량을 측정한 음식을 영양평가 프로그램 (CAN-PRO 2.
- 조사 대상자들의 식품섭취 조사를 실시한 다음날 아침 12 시간 이상의 공복 혈액을 채취하여 혈장과 혈청을 분리한 후콜린 분석에 사용하였다. 조사 대상자들의 혈청 및 혈장내의콜린농도는 Koc 등의 방법场을 개량하여 분석하였다.
- 3 mg으로 본 연구 대상자가 2004년 대상자에 비해 콜린 섭취량이 남자에서는 20 mg가량 낮았고, 여자에서는 50 mg 가량 높았다. 조사 대상자들의 콜린 섭취 상태를 파악하기 위해서 미국의 AI (남자 550 mg, 여자 425 mg)를 기준으로 하여 남녀 각각 AI의 75% 미만, 75-125%, 125% 이상에 속하는 대상자의 분포를 살펴보았다. 미국 AI의 75-125%를 섭취하는 경우는 남녀 모두 동일하게 40% (6명)으로 나타났으나, 75%미만 섭취하는 경우가 남자는 26.
- 분석에 사용하였다. 조사 대상자들의 혈청 및 혈장내의콜린농도는 Koc 등의 방법场을 개량하여 분석하였다. 시료 60 “L에 내부표준 물질인 Choline -trimethyl-d9-choline 이 10 “mol/L농도로 포함된 Acetonitrile을 180 “L 첨가하여 제 단백시킨 후 12, 000 rpm에서 2분간 원심분리하였다.
- 조사 대상자의 신장과 체중을 측정하여 체질량지수[BMI = 체중 (kg)/신장 同勺를 계산하였고, 허리둘레와 엉덩이 둘레를 측정하여 허리/엉덩이 둘레비 (waist/hip ratio, WHR) 을 구하였다. 그 외상완위 측정용 줄자를 이용하여 상완 위를 측정하였고, Caliper (SKYNDEX, USA) 를 사용하여 상완 삼두근의 피하지 방 두겹집기를 측정하였다.
대상 데이터
- 본 연구는 대전광역시에 거주하고 있는 만 20세 이상 30 세 미만의 건강한 성인 중간질환이나 심장혈관계 질환의 가족력이 없는 사람으로서 본 연구의 취지에 동의한 성인 남녀 각 15명, 총 30명을 대상으로 2004년 2월 5일부터 2월 15일까지 식사섭취 조사, 공복 혈액 채취 및 신체계측을 실시하였다.
데이터처리
- 0 versionir 이용하였다. 신체계측치, 혈장과 혈청콜린 농도, 콜린 섭취량 및 기타영양소 섭취량 등은 평균과 표준편차로 제시하였고, 성별 차이검증은 t-test에 의해 p < 0.05 수준에서 유의성을 검증하였다. 혈장 콜린 농도와 콜린 섭취량 및 기타 영양소 섭취량들 간의상관관계는 스피어만의 상관계수 (Spearman's correlation coefficient) 를 구하여 분석하였다.
- 05 수준에서 유의성을 검증하였다. 혈장 콜린 농도와 콜린 섭취량 및 기타 영양소 섭취량들 간의상관관계는 스피어만의 상관계수 (Spearman's correlation coefficient) 를 구하여 분석하였다.
이론/모형
- 개인별 분말화한 식사 시료의 콜린 함량은 효소법s을 이용하여 정량하였다. 시료에 phospholipase D와 choline oxi- dase를 처리하여 생성되는 과산화수소를 peroxidase와 함께 4-aminoantipyrine 및 3, 5-dimethoxy-N-ethyl-N (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -sodium aniline와 반응시키면 정량적으로 산화축합해 청색 색소를 생성하는데, 그 청색색소의 흡광도를 비색 정량하여 대상자들의 콜린 섭취량을 산출하였다.
- 수행되었다. 식품 중의 콜린 분석은 효会법을 사용하였고, 혈장콜린 농도는 액체크로마토그래피/질량분석 방법 m을 사용하여 분석하였다. 조사 대상자들의 콜린 섭취량은 남자 253.
- 8 mL/min의 유속으로 흘려주었다. 질량분석기의 이온화법은 atmospheric pressure ionization- electrospray ioni zation (API—ESI)을 이용하였다. Choline과 Choline—tri- methyl-dg-choline은 positive ion mode에서 각각의 물질의 [M + H]4■ 형태를 선택적으로 selective ion monitc- ring (SIM) mode를 사용하여 분석하였다.
성능/효과
- 39 zmol/L로 남자에서 여자에 비해 약 2 “mol/L정도 높게 나타났으나 혈장 농도에서와 마찬가지로 남녀 간 차이에 유의성은 없었다 (Table 2). 2003년 발표된 Normal-phase chromatography-tandem mass spectrometry를 기본으로 한 방법m으로 혈장 콜린 농도를 분석한 보고에서 혈장의평균 콜린 농도는 8.0 zzmol/L, 혈청의 평균 콜린 농도는 9.8 Z/mol/L로 혈장의 콜린 농도는 본 연구 결과와 비슷한 수준으로 나타났으나, 혈청의 콜린 농도는 본 연구에서 보다 1 “mol/L정도 높게 나타났다 혈장 콜린 농도와 혈청 콜린 농도간에 피어슨 상관계수를 구해 본 결과 상관성이 나타나지 않았다. 전기화학적 검출기를 시용한 액체크로마토그래피방법을 이용하여 혈장 콜린 농도를 분석한 보고 切에서 혈장콜린농도의 범위는 5~16 /zmolZ兀로 나타났고 평균 혈장 농도는 9.
- 저하되었다고하였다.3F 정상 성인 남자에게 1주간 콜린을 함유한 식이를섭취시킨 후 다시 3주 동안 콜린을 제거한 반합성 식이를 먹였을 때 혈장의 콜린과 포스파티 딜콜린 농도가 3주동안 평균 30% 감소했고, 혈청 alanine aminotransferase (ALT) 활성이 꾸준히 증가했으며 조직 내 콜린 저장고가 고갈되고초기 간 기능 저하 증세를 나타내었다고 하였다.。 또한 콜린이 제외된 완전정맥 영양을 공급받은 사람이나 이와 비슷한특수상황에 처한 사람에서는 체내 필요량을 충족시킬 만한충분한 양이 생합성되지 않고 결핍증이 발생하였다는 보고彼가 나온 이후 인체에서의 콜린 섭취의 중요성이 알려지게 되었고 그 결과 콜린을 필수 영양소로 인정하게 되었다.
- 70 “mol/L로 나타났다. 대상자들의 혈장 콜린 농도가 콜린 섭취량이나 다른 영양소 섭취량과 상관성을 보이는지 살펴본 결과, 혈장 콜린 농도와 콜린 섭취량 간에 남자대상자와 전체 대상자에서는 상관성을 나타내지 않았으나, 여자대상자에서는 양의 상관관계를 나타냈다. 다른 영양소 중에서는 비타민 A와 엽산의 섭취량이 전체 대상자에서 혈장의 콜린 농도와 양의 상관성을 나타낸 반면, 그 밖의 영양소 섭취량과는 상관성을 나타내지 않았다.
- 000). 섭취 1, 000 kcal당 콜린 섭취량은 남자 291.93 ± 74.95 mg, 여자 364.10 ± 121.96 mg, 전체 328.02 ± 106.01 mg으로 남녀 간에 유의적인 차이는 없었으나, 여자에서 콜린 섭취량^ 70 mg가량 높았다. 2004 년 대전지역 성인 대상 연구网에서는 체중kg당 콜린 섭취량이 남자 9.
- 연구 대상자들의 혈장의 콜린 농도와 콜린 섭취량 및 다른영양소섭취량과 상관성을 살펴본 결과 혈장의 콜린 농도와콜린섭취량과의 상관성은 여자에서만 양의 상관관계를 나타내었으며, 남자와 전체 대상자에서는 상관성을 나타내지 않았다. 그 외 영양소 섭취량과 혈장 콜린 농도와 상관성을 살펴보면 전체 대상자에서 비타민A와 엽산의 섭취량이 혈장의 콜린 농도와 양의 상관성을 나타낸 반면, 그 밖의 영양소섭취량과는 상관성을 나타내지 않았다 (Table 6).
- 8 Z/mol/L로 혈장의 콜린 농도는 본 연구 결과와 비슷한 수준으로 나타났으나, 혈청의 콜린 농도는 본 연구에서 보다 1 “mol/L정도 높게 나타났다 혈장 콜린 농도와 혈청 콜린 농도간에 피어슨 상관계수를 구해 본 결과 상관성이 나타나지 않았다. 전기화학적 검출기를 시용한 액체크로마토그래피방법을 이용하여 혈장 콜린 농도를 분석한 보고 切에서 혈장콜린농도의 범위는 5~16 /zmolZ兀로 나타났고 평균 혈장 농도는 9.0 /zmol/L로 본 연구 결과와 비슷한 수준의 혈장 콜린 농도를 나타내었다.
- 76 mg으로 남자의 섭취량이 여자에 비해 평균치가 160 mg이상 통계적으로 유의성 있게 높았다. 전체 대상자들의 혈장 콜린 농도는 5.08-14.01 “mol/ L의 범위로 분포하였고, 혈장의 콜린 농도는 전체 8.65 ± 1.93 即nol/L, 남자는 9.19 ± 2.05여자는 8.11 ± 1.70 “mol/L로 나타났다. 대상자들의 혈장 콜린 농도가 콜린 섭취량이나 다른 영양소 섭취량과 상관성을 보이는지 살펴본 결과, 혈장 콜린 농도와 콜린 섭취량 간에 남자대상자와 전체 대상자에서는 상관성을 나타내지 않았으나, 여자대상자에서는 양의 상관관계를 나타냈다.
- 조사 대상자들의 콜린 섭취량은 남자 253.51~ 1724.14 mg 여자 240.85~938.06 mg의 범위 내에 분포하였고, 평균 섭취량은 남자 634.53 ± 353.68 mg, 여자 473.99 ± 183.76 mg으로 남자의 평균 섭취량이 여자에 비해 160 mg가량 유의적으로 높았다. 콜린 섭취량의 개인차가 4~5배 정도로 나타나는 것은 1일 섭취량만을 조사한 것으로 인한 개인 섭취량의 차이로 사료된다.
- 식품 중의 콜린 분석은 효会법을 사용하였고, 혈장콜린 농도는 액체크로마토그래피/질량분석 방법 m을 사용하여 분석하였다. 조사 대상자들의 콜린 섭취량은 남자 253.51~1724.14 mg, 여자 240.85~93&06 mg의 범위로 분포하였고 평균 콜린 섭취량은 남자 634.53 ± 353.68 mg, 여자 473.99 ± 183.76 mg으로 남자의 섭취량이 여자에 비해 평균치가 160 mg이상 통계적으로 유의성 있게 높았다. 전체 대상자들의 혈장 콜린 농도는 5.
- 93 pmol/几의 범위로 분포하였다. 혈장의 평균 콜린 농도는 전체 8.65 ± 1.93.rniol/L, 남자 9.19 ± 2.05 傾nol/L, 여자 8.11 ± 1.70 “mol/L로 남자에서 여자에 비해 1 pmol/L가량 높게 나타났으나 통계적 유의성은 없었다 혈청콜린 농도는 전체 8.56 ± 2.11 Amol/L, 남자 9.50 ± 2.32 /mol/L, 여자 7.62 ± 1.39 zmol/L로 남자에서 여자에 비해 약 2 “mol/L정도 높게 나타났으나 혈장 농도에서와 마찬가지로 남녀 간 차이에 유의성은 없었다 (Table 2). 2003년 발표된 Normal-phase chromatography-tandem mass spectrometry를 기본으로 한 방법m으로 혈장 콜린 농도를 분석한 보고에서 혈장의평균 콜린 농도는 8.
후속연구
- 다른 영양소 중에서는 비타민 A와 엽산의 섭취량이 전체 대상자에서 혈장의 콜린 농도와 양의 상관성을 나타낸 반면, 그 밖의 영양소 섭취량과는 상관성을 나타내지 않았다. 본 결과는 소수 대상자에 대한연구결과로서 대표성을 나타내기에는 부족하므로 좀 더 다수를 대상으로 한 연구가 요구된다.
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