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[국내논문] Bacillus subtilis BB-1으로부터 나토키나아제 유전자 크로닝 및 대량발현
Cloning and High Expression of Nattokinase Gene from Bacillus subtilis BB-1 원문보기

생명과학회지 = Journal of life science, v.16 no.2 = no.75, 2006년, pp.274 - 281  

이영훈 (진주산업대학교 미생물공학과) ,  이성호 (경상대학교 생물학과) ,  박기훈 (경상대학교 응용생명과학부) ,  최영주 (신라대학교 식품영양학부) ,  정영기 (동의대학교 미생물학과) ,  갈상완 (진주산업대학교 미생물공학과)

초록
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흑두청국으로부터 분리된 혈전용해력이 우수한 Bacillus subtilis BB-1(KFCC 11344P)으로부터 혈전용해효소 유전자를 PCR법에 의해 크로닝하였고 이를 BCF-1으로 명명하였다. BCF-1의 DNA 염기서열결정 결과 1,145 bp 크기의 혈전용해 효소로, 일본의 natto로부터 분리된 nattokinase 유전자와 99%의 상동성을 보임을 확인하였다. 혈전용해효소 유전자의 발현을 위하여 Bacillus 발현계인 Bacillus-E. coli의 shuttle vector인 pEB vector에 크로닝 하고 host로서 B. subtilis 168에 형질전환시켜 대량 발현시켰다. 생산된 혈전용해효소의 최 적활성 pH와 온도는 7.0과 $35^{\circ}C$로 확인되었다, 기질에 대한 분해양상을 조사한 결과 fibrin에서만 특이적으로 강한 분해가 일어났으며, skim milk에서 아주 약한 분해능을 보였으나 blood agar, gelatin, casein에서는 전혀 분해능을 보이지 않았다. 특히 blood agar plate에서 분해능이 없는 것으로 보아 혈액 내에서의 적혈구 파괴현상과 같은 부작용에 대한 위험을 배제할 수 있을 것으로 사료된다. BCF-1에 의해 생산된 혈전용해효소는 fibrin 특이적으로 활성을 나타냄을 확인할 수 있으며, 이는 임상적이나 산업적으로 적용하였을 때 부작용에 대한 위험적인 문제는 배제될 수 있으리라 생각된다.

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A fibrinolytic enzyme gene was isolated from Bacillus subtilis BB-1 by PCR method. Primers for PCR cloning were designed according to pre-identified gene for fibrinolytic enzymes from B. subtilis. The primer sequences were 5'-CGG ATC CGT GAG AGG CAA AAA GGT G-3' and 5'-TGA ATT CTT AAT GTG CTG CTG CT...

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AI 본문요약
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문제 정의

  • 하지만 이 효소의 대량발현이 어려워 효 소자체의 상업적 이용은 많이 이루어지지 않고 있으며, 나또 식품을 통하여 이 효소의 가치를 부여하고 있다. 현재까지는 Bacillus 유래의 혈전용해효소 유전자를 크로닝 후 대량생산 체계가 구축되지 않아 의학적 가치의 상품개발에 성공한 예가 없어 그 목적의 일환으로 본 연구에서는 혈전용해작용이 우수하며, 혈전만을.특이적으로 분해함으로서 섭취 시 인체나 혈액 내에서 부작용이 없는 혈전용해효소를 Bacillus sub­ Ulis BB-1 (KFCC11344P)로부터 크로딩하고 그 유전자를 Bacillus host에 대량발현 및 순수분리하고 효소의 특성을 조사하여 의학적 이용가능성을 검토하였다.
  • 이 효소를 natto에서 분리하여 실험을 이행하였고, 따라서 natto 자체를 상품화하여 판매되고 있지만 이 효소의.유전자를 크로닝하여 그 재조합 DNA를 대량 발현시키거나 혹은 의학적 이용은 전무한 실정으로 본 연구에서 이를 새롭게 크로딩하고 Bae에서 대량 발현시키고자 하였다.
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