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문제 정의
- 따라서, 본 연구는 고부가가치를 창출할 수 있는 시볼트전복을 이용하여 물리적 스트레스인 수온 스트레스에 대한 HSP70 mRNA의 발현과 항산화효소인 SOD 및 CAT 등을 측정하여 스트레스에 대한 생리학적 지표를 설정하고자 본 연구를 실시하였고, 본 연구진에서 이전에 연구되어진 참전복과 비교하여 전복류의 생리학적 반응을 알아보고자 본 연구를 실시하였다.
가설 설정
- 30。(3로설정하였으며, 측정 시간은 0, 6, 12, 24 및 48 h 후에 측정 하였다. 그 결과 실험기간 중의 생존율은 30°C 실험구를 제외한 모든 실험구에서 100%의 생존율을 나타내었으며, 30°C 실험 구에서는 12 h 이후 3마리가 폐사하여 90%의 생존율을 기록하였고, 24 h째에는 전량 폐사하여 0%의 생존율을 나타내었다.
제안 방법
- 20(대조구), 25 및 30。(2)에서 적응기간별(0, 6, 12, 24 및 48 h)생존율을 조사한 결과 30°C 실험구에서만 12 h 이후 3마리가 폐사하였고, 24 h째에 전량 폐사하였다. 이는 30°C 고수온에서는 20。(2에서 순치된 개체라도 12 h째부터 생리적인 한계점에도 달하고 있음을 보여주는 것으로 판단되며, 참전복에 비해 급격한 고수온 스트레스에 대한 순응능력이 떨어진다고 판단된다.
- 5 卩 1를 혼합하여 94»C에서 5분간 predenaturation 시켜준 후 94。(2에서 1분간 denaturation, 50°C에서 45초간 annealing, 72。(3에서 1분간 extension 조건으로 30회 증폭하고, 이 후 72。(3에서 5분간 더반 응시 켰다. HSP70 mRNA에 대한 oligonucleotide primer를 제작 합성하였고, 양성대조로 사용하기 위해 B-actin mRNA를 제작하였다(Table 1). PCR로 증폭된 산물은 1% agarose gel에서 100V로 전기 영동하여 분리하였으며 , lOObp DNA ladder를 size marker로 사용하여 UV transilluminator하에서 사진을 촬영하여 이미지 분석 프로그램 (Labworks 4.
- HSP70 mRNA에 대한 oligonucleotide primer를 제작 합성하였고, 양성대조로 사용하기 위해 B-actin mRNA를 제작하였다(Table 1). PCR로 증폭된 산물은 1% agarose gel에서 100V로 전기 영동하여 분리하였으며 , lOObp DNA ladder를 size marker로 사용하여 UV transilluminator하에서 사진을 촬영하여 이미지 분석 프로그램 (Labworks 4.5)을 이용하여 mRNA의 발현량을 정량하였다.
- 급격한 수온 스트레스에 따른 HSP70의 변화를 관찰하기 위하여 수온과 시 간대 별로 아가미 조직 에서 샘플을 적출하여 RT- PCR을 실시하였다. 그 결과 RT-PCR를 통한 HSP70 mRNA의발현은 2VC(대조구)와 25°C 48 h 시간째를 제외한 모든 실험 구에서 HSP70 mRNA가 발현되는 것이 확인되었다.
- 동결된 아가미 조직에서 total RNA를 (주)Bioneer tissue RNA prep mate kit를 사용하여 추출하였다. 추출된 total RNA는 -7(TC에서 보관하여 실험에 사용하였으며, PROMEGA사의 cDNA합성 kit인 ImProm-II™ reverse transcriptase kit A3800 을 이용하여 cDNA를 합성하였다.
- 또한 본 실험에서는 스트레스와 대사의 지표로 많이 사용되는 혈액 샘플 (Cho et al., 2002; Vijay an and Moon, 1994)을 전복의 심장 옆 혈관에서 주사기를 이용하여 채취한 뒤, '혈림프 (Hemolymph)를 계수하여 급격한 수온 스트레스에 따른 혈 림프 수의 변화를 조사하였는데, 패류의 혈림프는 상처의 수복, 패각의 재생, 영양물질의 소화와 수송, 배설 및 생체방어에 관여한다고 알려져 있다. 그 결과 시볼트전복에서 급격한 수온 스트레스는 초기에 많은 스트레스 요인으로 작용하는 것으로 나타났으며, 저수온 스트레스인 경우 혈림프 생성을 저해하는 생리 활성이 나타나고, 고수온 스트레스일 경우 혈림프 생성을 많게 하는 생리 활성이 효과가 나타났다.
- 본 연구는 시볼트전복, Haliotis sieboldii 치패를 이용하여 급격한 수온변화 스트레스에 따른 혈림프수의 변화와 간부 위에서의 항산화효소 및 아가미 부위에서의 HSP70 mRNA의 변화를 조사하였다. 실험구는 10, 15, 2UC(대조구), 25°C 및 30。(3로설정하였으며, 측정 시간은 0, 6, 12, 24 및 48 h 후에 측정 하였다.
- 25 g인 개체를 사용하였다. 실험 전복은 미리 20P에서 2주 동안 사육하며 순치시킨 후 순환 여과가 가능한 30 L 규모의 수조로 옮겨 10, 15, 20(대조구), 25 및 3VC의 수온 스트레스를 각각 주었으며, 이 때 염분농도는 30.0±0.5%o 유지시켰고 PVC파이프(0 20 cm, L 20 cm)를 세로로 절단한 은신처 (shelter)를 넣어서 공기를 공급하였다. 예비사육 기간에 먹이는 다시마를 충분히 공급하였으며, 실험구당 30 마리의 전복을 실험에 사용하였고, 실험개시 후 각 수조에 넣어진 사육수의 수온이 목표치에 도달한 순간을 0 h로 정하여 0, 6, 12, 24 및 48 h째에 각각 5마리의 전복으로부터 혈구와 아가미 조직, 간부위의 조직 샘플을 채취하여 -7(rc로 보관하며 분석에 이용하였다.
- 실험개시 후, 0, 6, 12, 24 및 48 째에 폐사한 개체를 각각 조사하였다. 펴】사 개체의 계수는 은신처(shelter)와 수조 벽면에 부착능력이 없고, 유리봉으로 발과 촉수를 자극하여도 반응이 없는 개체를 선택하여 조사하였다.
- 5%o 유지시켰고 PVC파이프(0 20 cm, L 20 cm)를 세로로 절단한 은신처 (shelter)를 넣어서 공기를 공급하였다. 예비사육 기간에 먹이는 다시마를 충분히 공급하였으며, 실험구당 30 마리의 전복을 실험에 사용하였고, 실험개시 후 각 수조에 넣어진 사육수의 수온이 목표치에 도달한 순간을 0 h로 정하여 0, 6, 12, 24 및 48 h째에 각각 5마리의 전복으로부터 혈구와 아가미 조직, 간부위의 조직 샘플을 채취하여 -7(rc로 보관하며 분석에 이용하였다.
- mate kit를 사용하여 추출하였다. 추출된 total RNA는 -7(TC에서 보관하여 실험에 사용하였으며, PROMEGA사의 cDNA합성 kit인 ImProm-II™ reverse transcriptase kit A3800 을 이용하여 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA는 PROMEGA 사의 Taq DNA polymerase in storage buffer B kit을 사용하여 증폭하였다.
- 펴】사 개체의 계수는 은신처(shelter)와 수조 벽면에 부착능력이 없고, 유리봉으로 발과 촉수를 자극하여도 반응이 없는 개체를 선택하여 조사하였다.
- 추출된 total RNA는 -7(TC에서 보관하여 실험에 사용하였으며, PROMEGA사의 cDNA합성 kit인 ImProm-II™ reverse transcriptase kit A3800 을 이용하여 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA는 PROMEGA 사의 Taq DNA polymerase in storage buffer B kit을 사용하여 증폭하였다. cDNA를 증폭시키기 위하여 cDNA 2 卩1, lO^PCR buffer 5 p.
- 항산화효소는 간부위를 적출하여 SOD 및 CAT를 각각 분석하였다. 간부위를 적출 후 약 0.
- 혈림프 수 측정은 실험개시 毛 0, 6, 12, 24 및 48 h째에 전복의 심장 옆 혈관으로부터 바늘 규격 26 GX 1/2 인 1 ml 주사기를 이용하여 혈액을 채취한 후 0.9% 생리식염수로 10배 희석하여 혈구 계산판을 이용하여 살아있는 혈림프를 계수하였다 (Fig. 1).
대상 데이터
- '실험에 사용된 시볼트전복, Haliotis sieb이dii는 제주수산연구소 패류육종연구센터에서 분양받은 평균 각장 4.35±0.03 cm, 각폭 2.93±0.02 cm, 전중량 7.95士0.25 g인 개체를 사용하였다. 실험 전복은 미리 20P에서 2주 동안 사육하며 순치시킨 후 순환 여과가 가능한 30 L 규모의 수조로 옮겨 10, 15, 20(대조구), 25 및 3VC의 수온 스트레스를 각각 주었으며, 이 때 염분농도는 30.
데이터처리
- 각 실험에서 얻어진 자료에 대한 값의 유의차 유무는 SPSS- 통계 패키지에 의한 ANOVA로 분석하여 Duncan's multiple range test로 검정하였다.
이론/모형
- SOD는 pyrogallol의 자동 산화율이 억제되는 양을 측정하는 Marklund and Marklund (1974)의 방법으로 측정하였으며, 50 mM phosphate buffer (pH 8.24) 1.3 ml에 간장 균질액 25 卩1을 넣은 후 45 卩1의 3 mM pyrogallol 용액을 첨가하여 spectrophotometer를 이용하여 325 nm의 파장에서 측정하였고, 효소활성의 1단위는 반응액 중의 pyrogallol의 산화를 50% 억제하는 효소의 양으로 정하였다. CAT활성도 측정은 压。2를 기질로 사용하여 spectrophotometer에 의해 240 nm 파장에서 压。2가 환원되어 감소하는 흡광도로서 효소 활성도를 측정하는 Nelson and Kiesow (1972)의 방법에 의하여 측정하였으며, 효소 활성도의 단위는 1분간에 1 mg의 단백질이 반응하여 환원시킨 玦。2를 nm이로 나타내었다.
- CAT활성도 측정은 压。2를 기질로 사용하여 spectrophotometer에 의해 240 nm 파장에서 压。2가 환원되어 감소하는 흡광도로서 효소 활성도를 측정하는 Nelson and Kiesow (1972)의 방법에 의하여 측정하였으며, 효소 활성도의 단위는 1분간에 1 mg의 단백질이 반응하여 환원시킨 玦。2를 nm이로 나타내었다. 단백질 함량은 Lowry et al. (1951)의 방법에 따라 표준 단백질로서 BSA (bovine serum albumin)를 사용하여 spectrophotometers- 이용 540 nm에서 측정하였다.
성능/효과
- 20。(2에서 순치된 개체라도 12 h째부터 생리적인 한계점에도 달하고 있음을 보여주는 것으로 판단되며, 참전복에 비해 급격한 고수온 스트레스에 대한 순응능력이 떨어진다고 판단된다.
- 그러나 저수온 스트레스의 경우에서는 고수온 스트레스가 미치는 생체 방어 기작에 대한 영향보다 적은 영향을 줄 것이라고생각되며, 251 이상의 고수온 스트레스에 노출되었을때 나타나는 생리학적 방어기작과 비교하여 보다 빠르게 작용하여 순응하는 것으로 생각되어진다. 또한, 25。(2의 수온 스트레스의 경우에도 실험 종료시인 48 h째에 혈림프 수, SOD 및 CAT 등이 급격히 변화하는 것으로 보아 25P의 수온 스트레스 또한 장기간에 노출되었을 경우 심한 스트레스 요인으로 작용할 수 있을 것이라 여겨진다. 그러나 이러한 변화에 대한 종합적인 검토를 위해서는 좀 더 장기간에 걸친 연구와 각 장기간의 발현 양상에 대한 세부적인 연구가 추가되어야 할 것으로 판단되며, 더 많은 전복 종들을 대상으로 하여 실험을 진행함으로써 각 전복종들간의 수온 스트레스에 대한 생리학적 차의점을 알아봐야 할 것이라 여겨진다.
- CAT 효소 활성의 경우는 0 h째에서는 10 및 25°C 실험구에서 대조 구보다 낮은 활성을 나타내었고, 시간이 경과함에 따라 1(TC 실험구는 증가하는 경향을 나타내다가 24 h 이후에는 다시 감소하는 경향을 나타내었다. 또한, 15°C 실험구에서는 6 h과 24 h 째에서 가장 높은 활성을 나타내었으며, 25°C 실험구의 경우 실험 개시 시인 0 h과 6 h째에는 대조구(20。(3)보다 낮은 활성을 나타내었으나, 점차 회복하는 경향을 나타내다가 48 h째에다시 감소흐)는 경향을 나타내었다. 그리고, 30°C 실험구의 경우 6 h째부터 유의적으로 감소하는 경향을 나타내다가 12 h 이후 전량 폐사하였다(Fig.
- HSP70 mRNA의 발현은 대조구(20。(3)와 25<>C 실험구 48 h째를 제외한 모든 실험구에서 발현되었다. 특히 30°C 실험 구에서는 0 h째와 6 h째에 강하게 발현하여 12 h째에 이르러서는 발현이 점차 약해지다가 전량 폐사하였으며, 251 실험구의 경우에는 24 h째까지 발현을 나타내다가 48 h짜]에 이르러서는 발현이 나타나지 않았다.
- 하지만, 본 실험에서 시볼트전복의 SOD의 양은 실험 개시후 0 h째에는 모든 실험구가 대조구(2(TC)보다 감소하는 경향을 나타내었으며, 10 및 15°C 실험구의 경우 24 1째에 가장 높은 활성을 나타내었고, 25°C 실험구의 경우에는 대조구보다 낮은 활성을 나타내었다. CAT 활성 또한, 15°C 실험구를 제외한 전 실험구가 대조구 보다 낮은 활성을 나타내었고, 15°C 실험구 역시 24 h짜) 이후로는 회복되는 경향을 나타내었다. 이상의 결과를 보면 201 에서 순치된 전복에서 항산화효소의 변화는 전복 종에 따라 다르게 나타나는 것으로 나타났으며, 시볼트전복의 경우 급격한 수온 스트레스가 참전복에 비해 많은 스트레스 요인으로 작용한다고 여겨진다.
- 또한, 151 실험구의 경우에는 6 b째에 가장 높은 CAT 활성을 나타내었으며, 이 후 차츰 회복하는 경향을 나타내었고, 30°C 실험구의 경우에는 시간의 지남에 따라 유의적으로 활성이 낮아지는 경향을 나타내었다. HSP70 mRNA의 발현은 대조군(2(TC)과 비교하여 25°C 48 h째 실험구를 제외한 모든 실험구에서 유의적으로 높게 발현되었다. 이상의 결과로, 2(TC에서 순치된 시볼트전복은 급격한 수온 스트레스에 대해 많은 스트레스 요인으로 작용하는 것으로 나타났으며, 수온 스트레스에 대한 생리학적 방어 기작이 분자 레벨인 HSP70 mRNA 에서는 신속히 발현되어 스트레스에 대처하지만, SOD나 CAT 와 같은 항산화 효소의 발현은 다소 늦게 작용하는 것으로 나타났다.
- 혈림프 수의 변화는 15°C 및 2SC 실험구의 경우 증가하는 경향을 나타내었고, 30°C 실험구의 경우 감소하는 경향을 나타내었다. SOD의 경우 급격한 수온 스트레스 직후 모든 실험 구에서 감소하는 경향을 나타내었으나, 30°C 실험구에서는 계속 증가하는 경향을 나타내었고, 12 h 이후에는 모든 개체가 폐사하여 더 이상의 관찰은 할 수 없었다. 또한 10 및 15°C 실험 구의 경우 24 h째에 모두 최고의 활성 상태를 나타내었으나, 48 h째에는 감소하는 경향을 나타내었고 25P 실험구의 경우 대조군과 비교하여 감소하는 경향을 나타내었다.
- 실시하였다. 그 결과 RT-PCR를 통한 HSP70 mRNA의발현은 2VC(대조구)와 25°C 48 h 시간째를 제외한 모든 실험 구에서 HSP70 mRNA가 발현되는 것이 확인되었다. 특히, 30°C 에서는 가장 뚜렷한 HSP70 mRNA의 발현이 나타났으며, 6 h 째까지 발현이 높게 나타나다가 12 h째 발현이 감소하였고, 이후 모두 폐사하였다.
- , 2002; Vijay an and Moon, 1994)을 전복의 심장 옆 혈관에서 주사기를 이용하여 채취한 뒤, '혈림프 (Hemolymph)를 계수하여 급격한 수온 스트레스에 따른 혈 림프 수의 변화를 조사하였는데, 패류의 혈림프는 상처의 수복, 패각의 재생, 영양물질의 소화와 수송, 배설 및 생체방어에 관여한다고 알려져 있다. 그 결과 시볼트전복에서 급격한 수온 스트레스는 초기에 많은 스트레스 요인으로 작용하는 것으로 나타났으며, 저수온 스트레스인 경우 혈림프 생성을 저해하는 생리 활성이 나타나고, 고수온 스트레스일 경우 혈림프 생성을 많게 하는 생리 활성이 효과가 나타났다. 흐卜지만, 고수온 스트레스의 경우 일정 시간이 지남에 따라 혈림프 생성이 억제 되어 대 조구 실험구인 2UC 실험구의 수준으로 회복하는 경향을 나타내었으나, 251 실험구의 경우 24 h 이후에 혈림프 생성이 급격히 증가하는 것으로 나타났고, 저수온 스트레스인 15°C 실험 구의 경우 초기 저해 되었던 혈림프 생성이 시간이 지남에 따라 증가되는 경향을 나타내었다.
- 실험구는 10, 15, 2UC(대조구), 25°C 및 30。(3로설정하였으며, 측정 시간은 0, 6, 12, 24 및 48 h 후에 측정 하였다. 그 결과 실험기간 중의 생존율은 30°C 실험구를 제외한 모든 실험구에서 100%의 생존율을 나타내었으며, 30°C 실험 구에서는 12 h 이후 3마리가 폐사하여 90%의 생존율을 기록하였고, 24 h째에는 전량 폐사하여 0%의 생존율을 나타내었다. 혈림프 수의 변화는 15°C 및 2SC 실험구의 경우 증가하는 경향을 나타내었고, 30°C 실험구의 경우 감소하는 경향을 나타내었다.
- 이상의 결과로, 2(TC에서 순치된 시볼트전복은 급격한 수온 스트레스에 대해 많은 스트레스 요인으로 작용하는 것으로 나타났으며, 수온 스트레스에 대한 생리학적 방어 기작이 분자 레벨인 HSP70 mRNA 에서는 신속히 발현되어 스트레스에 대처하지만, SOD나 CAT 와 같은 항산화 효소의 발현은 다소 늦게 작용하는 것으로 나타났다. 그러나, 시간의 지남에 따라 5°C 내외의 스트레스와 저수온 스트레스의 경우에는 비교적 안정화되는 것으로 보여지며, 10°C 이상의 고수온에 노출되었을 경우에는 생리학적 방어기작이 한계점에 이르러 더 이상 방어 기작이 작동하지 않아 폐사에 이르게 되는 것으로 나타났다.
- SOD의 경우 급격한 수온 스트레스 직후 모든 실험 구에서 감소하는 경향을 나타내었으나, 30°C 실험구에서는 계속 증가하는 경향을 나타내었고, 12 h 이후에는 모든 개체가 폐사하여 더 이상의 관찰은 할 수 없었다. 또한 10 및 15°C 실험 구의 경우 24 h째에 모두 최고의 활성 상태를 나타내었으나, 48 h째에는 감소하는 경향을 나타내었고 25P 실험구의 경우 대조군과 비교하여 감소하는 경향을 나타내었다. CAT에서는 수온 스트레스 직후 10 및 25°C 실험구에서는 대조군과 비교하여 낮은 활성을 나타내었으며, 시간의 지남에 따라 회복하는 경향을 나타내었다.
- CAT에서는 수온 스트레스 직후 10 및 25°C 실험구에서는 대조군과 비교하여 낮은 활성을 나타내었으며, 시간의 지남에 따라 회복하는 경향을 나타내었다. 또한, 151 실험구의 경우에는 6 b째에 가장 높은 CAT 활성을 나타내었으며, 이 후 차츰 회복하는 경향을 나타내었고, 30°C 실험구의 경우에는 시간의 지남에 따라 유의적으로 활성이 낮아지는 경향을 나타내었다. HSP70 mRNA의 발현은 대조군(2(TC)과 비교하여 25°C 48 h째 실험구를 제외한 모든 실험구에서 유의적으로 높게 발현되었다.
- 또한, 25°C 실험구에서는 전 실험 기간동안 대조구 (2ITC)보다 낮은 활성을 나타내는 경향을 나타내었으며, 30°C 실험구의 경우에는 실험 개시 후부터 실험 개체가 전량 폐사한 12 h째까지 증가하는 경향을 나타내었다(Fig. 3, M0.05). CAT 효소 활성의 경우는 0 h째에서는 10 및 25°C 실험구에서 대조 구보다 낮은 활성을 나타내었고, 시간이 경과함에 따라 1(TC 실험구는 증가하는 경향을 나타내다가 24 h 이후에는 다시 감소하는 경향을 나타내었다.
- 또한, 25°C 실험구의 경우 6 h째에 유의적인 증가를 나타내었으나 이후 감소하는 경향을 나타내었으며 실험 종료시인 48 h째에는급격히 증가하는 경향을 나타내었고, 30°C 실험구의 경우에는 0 h째에는 급격히 증가하였다가 6 h째부터 감소하는 경향을 나타내어 12 h 이 후 전량 폐사하여 더 이상의 측정은 이루어지지 않았다(Table 2).
- HSP70 mRNA의 발현은 대조군(2(TC)과 비교하여 25°C 48 h째 실험구를 제외한 모든 실험구에서 유의적으로 높게 발현되었다. 이상의 결과로, 2(TC에서 순치된 시볼트전복은 급격한 수온 스트레스에 대해 많은 스트레스 요인으로 작용하는 것으로 나타났으며, 수온 스트레스에 대한 생리학적 방어 기작이 분자 레벨인 HSP70 mRNA 에서는 신속히 발현되어 스트레스에 대처하지만, SOD나 CAT 와 같은 항산화 효소의 발현은 다소 늦게 작용하는 것으로 나타났다. 그러나, 시간의 지남에 따라 5°C 내외의 스트레스와 저수온 스트레스의 경우에는 비교적 안정화되는 것으로 보여지며, 10°C 이상의 고수온에 노출되었을 경우에는 생리학적 방어기작이 한계점에 이르러 더 이상 방어 기작이 작동하지 않아 폐사에 이르게 되는 것으로 나타났다.
- 이상의 결과로, 2CFC에서 순치된 시볼트전복은 참전복보다 급격한 수온 스트레스 반응에 민감하게 반응하는 것으로 보여지며 (Kim et al., 2005), 저수온이나 고수온 스트레스 모두 생체의 활성을 저해하는 효과를 가져올 수 있을 것이라 여겨진다. 그러나 저수온 스트레스의 경우에서는 고수온 스트레스가 미치는 생체 방어 기작에 대한 영향보다 적은 영향을 줄 것이라고생각되며, 251 이상의 고수온 스트레스에 노출되었을때 나타나는 생리학적 방어기작과 비교하여 보다 빠르게 작용하여 순응하는 것으로 생각되어진다.
- CAT 활성 또한, 15°C 실험구를 제외한 전 실험구가 대조구 보다 낮은 활성을 나타내었고, 15°C 실험구 역시 24 h짜) 이후로는 회복되는 경향을 나타내었다. 이상의 결과를 보면 201 에서 순치된 전복에서 항산화효소의 변화는 전복 종에 따라 다르게 나타나는 것으로 나타났으며, 시볼트전복의 경우 급격한 수온 스트레스가 참전복에 비해 많은 스트레스 요인으로 작용한다고 여겨진다. 이러한 이유는 시볼트전복의 서식환경이 참전복에 비해 비교적 수심이 깊고, 수온의 변화가 적은 난류성 환경에서 서식하는데 기인하는 것으로 여겨진다.
- , 2005). 하지만, 본 실험에서 시볼트전복의 SOD의 양은 실험 개시후 0 h째에는 모든 실험구가 대조구(2(TC)보다 감소하는 경향을 나타내었으며, 10 및 15°C 실험구의 경우 24 1째에 가장 높은 활성을 나타내었고, 25°C 실험구의 경우에는 대조구보다 낮은 활성을 나타내었다. CAT 활성 또한, 15°C 실험구를 제외한 전 실험구가 대조구 보다 낮은 활성을 나타내었고, 15°C 실험구 역시 24 h짜) 이후로는 회복되는 경향을 나타내었다.
- 그 결과 실험기간 중의 생존율은 30°C 실험구를 제외한 모든 실험구에서 100%의 생존율을 나타내었으며, 30°C 실험 구에서는 12 h 이후 3마리가 폐사하여 90%의 생존율을 기록하였고, 24 h째에는 전량 폐사하여 0%의 생존율을 나타내었다. 혈림프 수의 변화는 15°C 및 2SC 실험구의 경우 증가하는 경향을 나타내었고, 30°C 실험구의 경우 감소하는 경향을 나타내었다. SOD의 경우 급격한 수온 스트레스 직후 모든 실험 구에서 감소하는 경향을 나타내었으나, 30°C 실험구에서는 계속 증가하는 경향을 나타내었고, 12 h 이후에는 모든 개체가 폐사하여 더 이상의 관찰은 할 수 없었다.
- 그 결과 시볼트전복에서 급격한 수온 스트레스는 초기에 많은 스트레스 요인으로 작용하는 것으로 나타났으며, 저수온 스트레스인 경우 혈림프 생성을 저해하는 생리 활성이 나타나고, 고수온 스트레스일 경우 혈림프 생성을 많게 하는 생리 활성이 효과가 나타났다. 흐卜지만, 고수온 스트레스의 경우 일정 시간이 지남에 따라 혈림프 생성이 억제 되어 대 조구 실험구인 2UC 실험구의 수준으로 회복하는 경향을 나타내었으나, 251 실험구의 경우 24 h 이후에 혈림프 생성이 급격히 증가하는 것으로 나타났고, 저수온 스트레스인 15°C 실험 구의 경우 초기 저해 되었던 혈림프 생성이 시간이 지남에 따라 증가되는 경향을 나타내었다. 이러한 결과는 시볼트 전복이 초기 급격한 수온 스트레스에 대한 생리 반응이 시간의 지남에 따라 회복 반응으로 나타나는 것으로 보여 지며, 30。(2와 같은 고수온 스트레스를 단시간에 급격하게 받게 될 경우 생리적 방어 한계점에 도달해 유의적인 혈림프 수의 증감 없이 폐사되는 것으로 보여진다.
후속연구
- 또한, 25。(2의 수온 스트레스의 경우에도 실험 종료시인 48 h째에 혈림프 수, SOD 및 CAT 등이 급격히 변화하는 것으로 보아 25P의 수온 스트레스 또한 장기간에 노출되었을 경우 심한 스트레스 요인으로 작용할 수 있을 것이라 여겨진다. 그러나 이러한 변화에 대한 종합적인 검토를 위해서는 좀 더 장기간에 걸친 연구와 각 장기간의 발현 양상에 대한 세부적인 연구가 추가되어야 할 것으로 판단되며, 더 많은 전복 종들을 대상으로 하여 실험을 진행함으로써 각 전복종들간의 수온 스트레스에 대한 생리학적 차의점을 알아봐야 할 것이라 여겨진다.
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