This work described 3 infection cases caused by Rhodococcus equi in foals between 3 and 5 months of age. The disease histories were not fully taken from local veterinarians. At least 1 sick foal has been treated with cephalothins followed by penicillins during approximately 1 week, but died without ...
This work described 3 infection cases caused by Rhodococcus equi in foals between 3 and 5 months of age. The disease histories were not fully taken from local veterinarians. At least 1 sick foal has been treated with cephalothins followed by penicillins during approximately 1 week, but died without effectiveness and other foals rearing with the animal have been suffering from severe pneumonia which show high fever, laboring respiration, cough and/or nasal discharge. There were many abscessations into lungs of 2 foals in postmortem examination and another 1 sample was pus collected from abscess around the shoulder, indicating the osteomyelitis. Those bacteria were grampositive coryneform and were identified as a R. equi by a polymerase chain reaction (PCR) using primers for R. equi-specific vapA gene. The pathogens were usually resistant to penicillin, ampicillin, amoxycillin/clavulanic acid, cefazolin, clindamycin, sulfamethoxazol/trimethoprim, kanamycin, and tetracycline, while were sensitive to ciprofloxacin, norfloxacin, orfloxacin, gentamicin, erythromycin, neomycin, and vancomycin. Some more foals with respiratory symptoms in 1 horse farm were treated by orally administration with erythromycin during 2 weeks. Because the combination of erythromycin and rifampin has recommended as the treatment for R. equi infections in foals, the local equine veterinarian can choose those antibiotics for the treatment of this disease in future. However, another antimicrobial agent may be necessary if R. equi resistant to both agents is isolated.
This work described 3 infection cases caused by Rhodococcus equi in foals between 3 and 5 months of age. The disease histories were not fully taken from local veterinarians. At least 1 sick foal has been treated with cephalothins followed by penicillins during approximately 1 week, but died without effectiveness and other foals rearing with the animal have been suffering from severe pneumonia which show high fever, laboring respiration, cough and/or nasal discharge. There were many abscessations into lungs of 2 foals in postmortem examination and another 1 sample was pus collected from abscess around the shoulder, indicating the osteomyelitis. Those bacteria were grampositive coryneform and were identified as a R. equi by a polymerase chain reaction (PCR) using primers for R. equi-specific vapA gene. The pathogens were usually resistant to penicillin, ampicillin, amoxycillin/clavulanic acid, cefazolin, clindamycin, sulfamethoxazol/trimethoprim, kanamycin, and tetracycline, while were sensitive to ciprofloxacin, norfloxacin, orfloxacin, gentamicin, erythromycin, neomycin, and vancomycin. Some more foals with respiratory symptoms in 1 horse farm were treated by orally administration with erythromycin during 2 weeks. Because the combination of erythromycin and rifampin has recommended as the treatment for R. equi infections in foals, the local equine veterinarian can choose those antibiotics for the treatment of this disease in future. However, another antimicrobial agent may be necessary if R. equi resistant to both agents is isolated.
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문제 정의
본 연구는 2004년부터 2005년 사이에 제주대학 교 수의학과 수의 진단학교실에 의뢰된 3에서 5개월 된 망아지에서 발생한 Rhodococcus 에 의한 감염증에 관한 보고이다. 총 3두 중2두는 호흡기 질환으로 폐사한 후 부검 시 폐에 심한 화농성 육아종 병변이 있었으며, 1두는 견갑부위에 형성된 화농을 채취하여 의뢰하였다.
본 연구는 더 러브렛 망아지 3두로부터 R. eq*i를 분리하고, 순수 분리한 원인균의 항생제 감수성 검사를 통하여 동일 농장의 다른 망아지들을 치유할 수 있었음을 보고 한다.
치료를 필요로 하는 농가의 경우 경구용 erythromycin을 2주간 투여한 후 치유되거나 더 이상의 감염을 막을 수 있었다. 본보고가 말 전문 수의사의 망아지 폐렴 치료에 응용되어 농가의 피해를 최소화하는 데 기여하기를 희망한다.
제안 방법
PCRe 첫 denaturation을 95℃로 10분 실시 후, denaturation 95℃ 1분, annealing 58℃ 1분, extension 72℃ 1분으로 30회 반복했으며, 최종 extension 72℃에서 5분 동안 수행하였다. PCR 산물은 1.5%(w/v) agarose gel에서 30분 동안 100 V에서 전기영동하였고 ethidium bromide (Sigma)로 15분간 염색한 후 30분간 증류수에 탈색시켜 관찰하였다.
R. equi로 추정된 균주는 -80℃에 보교하였고, 중합효소연쇄 반응법 (PCR)으로 확증하였다. PCRe Takai 등(28)의 방법에 따라 15에서 17kDa 크기의 항원을 암호화하는 vqpA 유전자를 증폭할 수 있는 vapA-F (5'-GACTCTTCACAA GACGGT-3')와 vapA-R (5'-TAGGCGTTGTGCCAGCTA-3')를 이용하여 수행하였다.
5% 면양 혈액이 첨가된 Trypticase blood agar base(Difco)에 접종하여 37℃에서 하룻밤 동안 배양하여 관찰하였으며, 마지막 1두는 처음 Rhodococcosis로 의심되지 않았기 때문에 혈액배지와 MacConkey agar (Difco)에만 접종하여 동일한 조건으로 배양하였다. 각 배지에서 증식한 동일한 집락 3개를 선발하여 혈액배지로 계대 배양한 후 전형적인 R. equi의 집락 모양인 연어 살색의 점액성 집락과, Gram 염색을 통하여 확인하였다(24).
5x lOlFU/ml)의 혼탁도로 조정하였다. 균부 유액 0.1 ml을 Muller Hinton agar (Difco)-rl 에 도 말한 후 제조회사의 표준적인 방법에 따라 ampicillin (AM), amoxycillin/clavulanic acid (AMC), cefazolin (CZ), chloramphenicol (C), ciprofloxacin (CIP), clindamycin (CC), erythromycin (E), gentamicin (GM), kanamycin (K), neomycin (N), norfloxacin (NOR), ofloxacin (OFX), penicillin (P), streptomycin (S), sulfamethoxazol/trimethoprim (SXT), tetracycline (T), vancomycin (VA)을 포함하고 있는 disk (BBL)에 의한 세균 발육 억제환을 해석하여 감수성 여부를 평 가하였다.
agai에 시료들을 접종하였다. 처음 2두의 망아지는 Rhodococcosis로 의심되어 선택배지인 nalidixic acid-novoviocin-actidione-potassium tellurite (NANAT) 배 지 와 0.5% 면양 혈액이 첨가된 Trypticase blood agar base(Difco)에 접종하여 37℃에서 하룻밤 동안 배양하여 관찰하였으며, 마지막 1두는 처음 Rhodococcosis로 의심되지 않았기 때문에 혈액배지와 MacConkey agar (Difco)에만 접종하여 동일한 조건으로 배양하였다. 각 배지에서 증식한 동일한 집락 3개를 선발하여 혈액배지로 계대 배양한 후 전형적인 R.
총 3두 중2두는 호흡기 질환으로 폐사한 후 부검 시 폐에 심한 화농성 육아종 병변이 있었으며, 1두는 견갑부위에 형성된 화농을 채취하여 의뢰하였다. 혈액배지와 R.
분리균주를 대상으로 디스크 확산법에 의하여 항생제 감수성 검사를 실시하였다. 혈액배지에 접종하여 371에서 하룻밤 배양한 분리균주를 멸균된 생리식염수에 부유시켜 MacFalend No. 0.5 (약 1.5x lOlFU/ml)의 혼탁도로 조정하였다. 균부 유액 0.
호흡기 증상으로 폐사한 2두의 망아지 폐 병변 (Fig 1)과 견갑부 화농염으로부터 채취하여 의뢰된 1두의 망아지로부터 원인균을 분리하기 위하여 선택 배지, 혈액배지, MacConkey agai에 시료들을 접종하였다. 처음 2두의 망아지는 Rhodococcosis로 의심되어 선택배지인 nalidixic acid-novoviocin-actidione-potassium tellurite (NANAT) 배 지 와 0.
이론/모형
equi로 추정된 균주는 -80℃에 보교하였고, 중합효소연쇄 반응법 (PCR)으로 확증하였다. PCRe Takai 등(28)의 방법에 따라 15에서 17kDa 크기의 항원을 암호화하는 vqpA 유전자를 증폭할 수 있는 vapA-F (5'-GACTCTTCACAA GACGGT-3')와 vapA-R (5'-TAGGCGTTGTGCCAGCTA-3')를 이용하여 수행하였다. PCRe 첫 denaturation을 95℃로 10분 실시 후, denaturation 95℃ 1분, annealing 58℃ 1분, extension 72℃ 1분으로 30회 반복했으며, 최종 extension 72℃에서 5분 동안 수행하였다.
분리균주를 대상으로 디스크 확산법에 의하여 항생제 감수성 검사를 실시하였다. 혈액배지에 접종하여 371에서 하룻밤 배양한 분리균주를 멸균된 생리식염수에 부유시켜 MacFalend No.
총 3두 중2두는 호흡기 질환으로 폐사한 후 부검 시 폐에 심한 화농성 육아종 병변이 있었으며, 1두는 견갑부위에 형성된 화농을 채취하여 의뢰하였다. 혈액배지와 R. equi 선택배지, MacConkey agar에 시료를 접종하여 원인균을 분리하였으며 vapA 유전자를 증폭할 수 있는 중합효소 연쇄반응기법에 의해 동정하였다. 원인균들은 penicillin, ampicillin, amoxycillin/clavulanic acid, cefazolin, clindamycin, sulfamethoxazol/trimethoprim, kanamycin, tetracycline에 내성을 가지고 있었으며, ciprofloxacin, norfloxacin, orfloxacin, gentamicin, erythromycin, neomycin, vancomycin에는 대부분 감수성을 나타내었다.
성능/효과
둘째, 수의사가 병력을 물을 경우 주인이 아닌 관리인일 경우에는 질병의 발생 시기 등의 병력을 숨길 수 있다. 셋째, 수의사가 직접 진료하는 경우에도 경험이 많은 수의사일수록 미리 질병명을 예측함으로써 정확한 기록의 필요성을 느끼지 못하고 있으며, 다음으로 무엇보다 "병을 치료하기만 하면 되지 정확한 질병명은 알아서 무엇 하나 하는 잘못된 생각이 여전히 편재해 있기 때문이다. 본 증례들에서 증례1은 비교적 정확한 병력을 가질 수 있었으나 증례2의 경우에는 검사 결과와 R.
본 연구에서 분리된 R. equi들은 penicillin제제와 cefazolin, sulfa 제제, kanamycin, tetracycline 등에 내성을 가지고 있었으나, gentamicin, erythromycin, ciprofloxacin 등에는 감수성을 나타내었다. Rhodococcosis의 치료제로는 두 개의 정균제인 erythromycin과 rifampin이 추천되며(17), 이 둘의 병용이 실험실 내 및 생체 내에서도 상승 효과를 나타낸다(16, 17, 23).
따라서 aminoglycoside계 항생제와 erythromycin 이나 rifampin과 같이 투여하지 말아야 할 것이다.본 질병은 임상 증상과 혈장 fibrinogen 정상치, 폐병변의 방사선 촬영소견으로 치유 효과를 평가한 결 과를 보면 4에서 9주간의 치유 시간이 요구된다.대부분의 망아지가 erythromycin에 안전할 지라도 분변이 묽어진다.
본보고에서 조사된 3두 중 2두는 전형적인 Rhodococcosis에 의한 폐렴으로 폐사한 망아지였으며, 호스타 실린 등으로 치료를 하였으나 효과를 볼 수 없었고, 감수 성 검사 결과와 앞에서 언급한 여러 연구자들의 추천에 따라 erythromycin과 rifampin 투여를 권유하였으나 rifampin 경구 투여용 항생제를 구입하지 못하여 erythromycin 만을 경구적으로 투여하여 증례 1이 발생한 농장의 경우 유사한 증상을 보이는 망아지를 치료할 수 있었다. 그러나 현재 제주도 내 말 사육농가의 병력이나 이번 보고에서 볼 수 있듯이 R.
equi의 특성을 가지고 있었다. 분리된 균주들을 대상으로 병원성 R. equi가 가지고 있는 vapA 유전자를 중합 효소 연쇄 반응(PCR)기법으로 확인한 결과 모두 R. eqid인 것으로 판정되었다 (Fig 2).
equi 선택배지, MacConkey agar에 시료를 접종하여 원인균을 분리하였으며 vapA 유전자를 증폭할 수 있는 중합효소 연쇄반응기법에 의해 동정하였다. 원인균들은 penicillin, ampicillin, amoxycillin/clavulanic acid, cefazolin, clindamycin, sulfamethoxazol/trimethoprim, kanamycin, tetracycline에 내성을 가지고 있었으며, ciprofloxacin, norfloxacin, orfloxacin, gentamicin, erythromycin, neomycin, vancomycin에는 대부분 감수성을 나타내었다. 치료를 필요로 하는 농가의 경우 경구용 erythromycin을 2주간 투여한 후 치유되거나 더 이상의 감염을 막을 수 있었다.
호흡기 감염으로 폐사한 2두의 폐병변에서는 물론 견갑부 화농 시료에서도 점액성이 강하고 연어 살색을 나타내는 전형적인 R. equi 양집락만이 혈액배지에 증식하였고, NANAT 배지 상에서도 점액성이면서 집락의 중앙부는 검고, 가장자리 쪽으로 회색조가 옅어지는 전형적인 R. equi의 특성을 가지고 있었다. 분리된 균주들을 대상으로 병원성 R.
환축 1에서 분리된 균주인 R. equi Re-19는 E, GM, VA에만 감수성을 나타내었으며, AM, CZ, C, K, P, S, T에 저항성을 나타내었다. 환축 2로부터 분리된 균주인 R- equi B4D3는 C, CIP, E, GM, N, NOR, OFX, VA에 감수성을 AM, AMC, CC, CZ, K, P, S, SXT, T에 저항성을 나타내었다.
equi Re-19는 E, GM, VA에만 감수성을 나타내었으며, AM, CZ, C, K, P, S, T에 저항성을 나타내었다. 환축 2로부터 분리된 균주인 R- equi B4D3는 C, CIP, E, GM, N, NOR, OFX, VA에 감수성을 AM, AMC, CC, CZ, K, P, S, SXT, T에 저항성을 나타내었다. 환축 3에서 분리한 R.
후속연구
수 있었다. 그러나 현재 제주도 내 말 사육농가의 병력이나 이번 보고에서 볼 수 있듯이 R. equi에 의한 망아지의 폐사 사례들이 끊임없이 발생하고 있기 때문에 유사시를 대비하여 치료제를 미리 준비해 두는 것이 바람직할 것으로 보여 지며 향후 망아지에서 호흡기 질환이 발생한 경우 원인균 분리와 PCR을 통하여 R. equi에 의한 감염일 경우 본 연구에서 얻은 항생제 감수성 검사의 결과를 활용한다면 농가의 피해를 줄일 수 있을 것으로 생각한다.
특히 말의 경우 국내에서 사육 호}는 규모가 다른 가축에 비하여 작으나, 두 당 가격은 다른 가축과 비교할 수 없을 정도로 비싼 것도 있어 특히 치료에 주의를 기우려야 할 것이다. 따라서 향후 말 전문 수의사들의 경우 항상 목장별, 가축별 병력을 기록 유지하는데 소홀함이 없었으면 한다.
셋째, 수의사가 직접 진료하는 경우에도 경험이 많은 수의사일수록 미리 질병명을 예측함으로써 정확한 기록의 필요성을 느끼지 못하고 있으며, 다음으로 무엇보다 "병을 치료하기만 하면 되지 정확한 질병명은 알아서 무엇 하나 하는 잘못된 생각이 여전히 편재해 있기 때문이다. 본 증례들에서 증례1은 비교적 정확한 병력을 가질 수 있었으나 증례2의 경우에는 검사 결과와 R. equi가 골수염을 일으킬 수도 있다는 보고를 볼 때 R equi에 의한 골수염으로 의심되지만 수의사의 조급한 처리로 인하여 더 이상의 관찰을 수행할 수 없었던 점은 아쉬움으로 남는다. 증례 3의 경우에도 관리인의 경우 갑자기 폐사하였다고 하였으나 부검시의 사진들을 보면 이미 수일 동안 앓아 왔음을 짐작할 수 있었다.
equi를 가지고 있었고, 전체 분리균주 중 2% 정도가 병원성 플라즈미드를 가지고 있는 것으로 보고되었다 (26). 본 증례로부터 분리된 균주들의 경우 vapA 유전자에 특이적인 중합효소연쇄 반응기법에 의해 병원성 플라즈미드가 있는 것으로 확인되었으며 정확한 플라즈미드의 typee 향후 분석할 예정이다.
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