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문제 정의
- 본 연구에서는 2004년-2006년의 인천지역 해양환경에서 분리한 V. vulnificus 310주를 대상으로 V. vulnificus의 분포를살펴보고, 대상균주의 항생제 감수성 시험을 통하여 내성정도를 파악하고자 하였다.
제안 방법
- 1에 나타내었다. E vulnificus 확인동정을 위한 실험 방법으로 선택배지는 Thiosulfate Citrate Bile-salt Sucrose(TCBS, Difco, USA) 한천배지를 사용하여 녹색의 집락(sucrose 비분해)을 확인한 후, V. vulnificus 가 의심되는 군주에 대해서 1% NaCl이 첨가된 Nutrient 한천배지(NA, Difco, USA)에 계대하였다.
- vulnificus가 검출되었으며 , 이들 분리균에 대한 시료별, 채취시기별분포를 조사하였다. 또한 airpicillin, ticarcillin, arrjicillin/sulbactairi, amoxicillin/clavulanic add, ceptalothin, cefazolin, cefoxitin, cefotetan, ceftriaxone등 총 21 종류의 항생제 감수성 검사를실시하였다
- 5가 되도록 현탁하였다. 면봉으로 균 액을 묻혀 MHACMuller Hinton Agar, Difco, USA) 배지 표면에 골고루 바른 다음 실온에 10분간 방치한 후 항생제 disc(BBL, Becton Dickinson)를 올려놓았다. Plate를 37℃에서 24시간 배양한 후 억제환의 크기를 mm 단위로 측정하여 CLSI 기준에 따라 판정하였다.
대상 데이터
- 2004년 3월부터 2006년 11월까지 인천 연안 지역을 3개 지역으로 구분하고, 이를 다시 16개소 지점으로 나누어 어류, 조개류, 해수 및 갯벌에서 총 4, 302건의 가검물을 채취하였다. 각각의 채취지점은 Fig.
이론/모형
- Ewing16)의 방법과 Bergey's manual of systematic bacteriology17)에 따라 각종 생화학 시험을 실시하였고 추가로 시판용인 API 20E kit(bioMeriux, France)를 사용하여 V. vulnificu료 최종확인, 동정을 하였다. 또한 확인 동정된 균주를 대상으로 cytolysinhemolysin 유전재:whA)와 siderophore receptor 생성에 관여하는 viuB 유전자 부위에 대한 polymerase chain reaction(PCR) 을 실시하였다(Table 1).
- 면봉으로 균 액을 묻혀 MHACMuller Hinton Agar, Difco, USA) 배지 표면에 골고루 바른 다음 실온에 10분간 방치한 후 항생제 disc(BBL, Becton Dickinson)를 올려놓았다. Plate를 37℃에서 24시간 배양한 후 억제환의 크기를 mm 단위로 측정하여 CLSI 기준에 따라 판정하였다.20)본 실험에 사용한 항생제 디스크는 Table 4와 같이 총 21종을 사용하였다
- 항생제에 대한 감수성은 Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)의 방법에 따라 디스크 확산법으로 실시하였다.19) Nutrient Agar에 순수배양돤 V.
성능/효과
- 1. 시료별로 V. vulnificus 분포를 보면, 분리된 31균주 가운데 갯벌에서 59주 (23.2%)로 가장 많이 분리되었으며, 해수 98주(12.4%), 생선류 5주(6.7%), 조개류 148주(4.7%)가 분리되었다.
- 대장균의 경우 임상분리균주보다 환경분리 균주에서 내성을 나타내는 항생제의 종류가 현저히 적었으며23) K parahaemolyticus 큰 차이가 없었다.13) 반면, V. vulnificuse: ampicillin, ticarcillin, cephalothin에 대해 각각 환경 분리 균주가 12%, 10%, 2%인 반면 임상분리균주는 3종의 항생제 모두 내성이 없는 것으로 나타났다. 24)본 연구결과 환경분리균주에서의 내성은 ampicillin 3.
- 최근에서야 환경으로 유입된 의약물질이 생태계와 인체에 영향을미칠 수 있다는 우려가 제기되고 있으며,12) 다제 내성균의 증가와 신종 내성균의 출현등 내성 확산 방지를 위해서 체계적이고지속적인 감시와 내성관련연구가 활성화되어야 한다.13) 비브리오 패혈증은 병의 진행속도가 매우 빠르고 감수성 있는 항균제로 치료함에도 불구하고 전신증상이 나타난 후 평균 4.2일이면 사망률이 62-79%에이르는 치명적 질환이므로 병의 초기에 진단하여 신속하게 치료해야 한다.14)
- 2. 시기별 E vulnificus의 분포와 해수 온도의 관계를 살펴보면 해수온도가 6.6P 이상인 3월부터 검출되기 시작하여 해수 온도가 올라갈수록 검출률이 증가하다가 평균온도가 22.9℃ 인 9월이 검출률이 가장 높았으며, 평균수온이 10.2P인 11월 하순까지 분리되었다.
- 2003년 3월부터 2006년 11월까지 인천지역 자연환경 가검물 4, 302건 중에서분리된 V. vulnificus 균주는 310주로 7.2%의 분리률을 보였다(Table 3). 이를가검물 종류별로 구분하여 살펴보면, 갯벌에서 59주(23.
- 2004년 3월부터 2006년 11월까지 인천연안지역 해수, 갯벌, 생선류, 조개류 총 4, 302건의 시료를 채취하여 검사한 결과 310주의 시료에서 V. vulnificus가 검출되었으며 , 이들 분리균에 대한 시료별, 채취시기별분포를 조사하였다. 또한 airpicillin, ticarcillin, arrjicillin/sulbactairi, amoxicillin/clavulanic add, ceptalothin, cefazolin, cefoxitin, cefotetan, ceftriaxone등 총 21 종류의 항생제 감수성 검사를실시하였다
- vulnificuse: ampicillin, ticarcillin, cephalothin에 대해 각각 환경 분리 균주가 12%, 10%, 2%인 반면 임상분리균주는 3종의 항생제 모두 내성이 없는 것으로 나타났다. 24)본 연구결과 환경분리균주에서의 내성은 ampicillin 3.3%, ticarcillin 5.0%, cephalothin 8.3%와는 차이가 있었다. 항생제 사용의 증가로 수생환경중에 있는 세균 내성에 상당한 영향을 주고 있으며, 이로 인해 인체에 영향을 미칠 수 있다는 우려가 제기되고 있다.
- vulnificuse 의한 인체감염은 주로 2가지 임상형태로 발생하는데, 오염된 어패류를 생식하였을 때 발생하는 원발성 패혈증과 해수 또는 갯벌에 상처가 노출되었을때 발생하는 창상감염이 있다.3)국내에서의감염은 주로 원발성 패혈증의 형태로서 1979년 전남지방에서 처음 보고 되었으며, 4)균 동정에 의한 확진 예는 1982년에보고되었다.5) 이후 계속적으로 국내 해안에서 V.
- 3. 항생제 감수성 실험을 한 결과 가장 높은 감수성을 보인 항생제는 Ampicillin/sulbactam Inipenern Tetracydine, SulfanEthaxazde /trimethoprim로 이들 항생제는 모두 98.3% 의 감수성을 보였다. Ciprofloxacin, (95.
- vulnificus가 분리되고 있으며 현재까지 매년 사망자가 나타나고 있어 하절기의중요한 보건 및 사회문제로 대두되고 있다.6) 원발성 패혈증은 궤저성 궤양, 쇼크, 장기기능부전을 유발하며 치명률은 62-72%이다. 그리고 상처를 통한 창상 감염은 상처 부위에 수포 및 괴사를 발생시키며 치명율이 25-50%로 알려져 있다.
- 또한, arginine dehydrolase, citrate, urease, Inositol, sorbitol, rhamnose, saccahrose에는 모든 균이 음성반응 보였다 (Table 3). API 20E에서 V.vulnificus 양성으로 나타난 모든 균주에 대해서 vvhA와 viuB 유전자 부위에 대한 multiplex PCR 실험 결과 205bp(vvhA)에서 밴드를 보였고, 50, 0%는 505bp(viuB)에서 밴드를 나타내었다(Fig. 2).
- Ortho-nitro-phenyl-galacto side (ONPG), gelatinase, amygdaline, oxidase 에 모든 균이 양성 반응을 보였으며, lysine decarboxylase 76.7%, ornithin decarboxylase 45.5%, Indole 98.3%, glucose 98.3%, mannitol 9L7%가 양성을 보였다. 또한, arginine dehydrolase, citrate, urease, Inositol, sorbitol, rhamnose, saccahrose에는 모든 균이 음성반응 보였다 (Table 3).
- 6%)에 비교적 낮은 감수성을 보였다. V.vulnificus 감염 치료제로 권장되는 tetracycline(98.3%), chloramphenicol(95.0%), ciprofloxacin(95.3%) 등의 경우 높은 감수성을 보여 치료제로 사용가능함을 확인하였다. 대장균의 경우 임상분리균주보다 환경분리 균주에서 내성을 나타내는 항생제의 종류가 현저히 적었으며23) K parahaemolyticus 큰 차이가 없었다.
- vulnificus의 생존에 중요한 영향을 미치는 환경인자는 온도가 염도로 알려져 있다. 그러나, 본 연구결과 평균온도가 6.60인 3월부터, 평균 온도 가 10.2℃인 11월에도 E vulnificus가분리되어 저온에서도 V. vulnificus가 생존하고 있는 것으로 나타났다. 이는 해수온도가 17P 이하인 3월과 4월에는 K vulnificus가 분리되지 않았다는 연구21)와 20P가 넘어서는 7월초에 균이 검출되기시작하여 10℃ 이하가 되는 10월 중순 이후에는 균이 검출되지 않았다고 한 결과22) 와는 다른 결과를 나타내었다.
- 7%)가 분리되었다. 다른 지역의 V. vulnificus 분리율과비교해보면, 인천지역은 7.2%로 전남해안지역 26.2%21), 부산과 경남일대의 해안지역 10.0%5)보다는 분리율리 낮았으며, 경북동해안 지역의 분리율 3.4% 보다는 높은것으로 나타났다.
- 3%, mannitol 9L7%가 양성을 보였다. 또한, arginine dehydrolase, citrate, urease, Inositol, sorbitol, rhamnose, saccahrose에는 모든 균이 음성반응 보였다 (Table 3). API 20E에서 V.
- 1%였다. 비브리오패혈증 치료에는 tetrncychine계 항생제의 투여가 권장되고 있으며 Sanfcrd등은 tetracycline과 cephalosporin의 복합사용을 권장하였고 Chuang등은 V. vulnificus 감염치료에 cefota0m과 minocline의 복합사용이 특히 중증환자에 상승효과가 있다고 하였다⑸ 본 연구에서는 분리된 균주 대부분이 사용 항생제에 감수성이 높은 것으로 나타났으며, 1세대와 2세대 aphalospain계인 Cefazolin(42.3%) 및 Cefoxitin(36.6%)과 Aminoglycosides계 인 Streptomycin(40.6%)에 비교적 낮은 감수성을 보였다. V.
- 2%의 분리률을 보였다(Table 3). 이를가검물 종류별로 구분하여 살펴보면, 갯벌에서 59주(23.2%)로 가장 많이 분리되었으며, 해수 98주(12.4%), 생선류 5주 (6.7%), 조개류 148주(4.7%)가 분리되었다. 다른 지역의 V.
- 9%)순으로 나타났다. 중등도 내성은 Cefazolin(46.3%) 이 가장 높았으며 Streptomycin(40.6%), Cefoxitin (36.6%), lenanvcin (30.0%), Ce)alothine(16.790 순이었다 가장 높은 내성을 보인 항생제는 Aminoglycosides 계인 Streptomycin(15.3%) 이었고 1세대 Cephalosporin계인 Cefazolin(8.5%), Cephalothin(8.3%), 2세대 Cephalosporin 계인 Cefoxitin(6.7%)> 1세대 Quinolones 계인 Nalidixic acid(6.7%)순으로 내성을 보였다 (Table 3). 항생제 두개 또는 그 이상의 약제에 대해 내성을 나타낸 것은 17.
- 항생제 감수성 실험을 한 결과 가장 높은 감수성을 보인 항생제는 Ampicillin/sulbactam, Imipenem, Tetracycline, Sulfamethoxazole /trimethoprim로 이들 항생제는 모두 98.3% 의 감수성을 보였다. Ciprofloxacin, (95.
- 해수의 3년간 월평균온도와 관련하여 V. vulnificus의 분포를 살펴보면 해수온도가 평균 6.6P인 3월부터 분리되기 시작하여 해수온도가 올라갈수록 분리률이 증가하다가 평균온도가 22.9℃ 인 9월의 분리율이 14.6%로 가장 높았으며, 해수온도가평균 10.2℃ 인 11월 하순에도 V. vulnificus의 분리율이 5.1% 되었다 (Fig.3). 일반적으로 V.
후속연구
- vulnificus의밀도가 높은 것으로 보고되고 있다. 그러므로, 갯벌 퇴적물에 대한 V. vulnificus의신속한 검출과 상시 모니터링 체계 확립이요구될 것으로 보인다.
- 항생제 사용의 증가로 수생환경중에 있는 세균 내성에 상당한 영향을 주고 있으며, 이로 인해 인체에 영향을 미칠 수 있다는 우려가 제기되고 있다. 그러므로, 내성확산방지를 위해서는 내성세균이 분리된 환자들의 임상역학적 자료 조사는 물론 항생제 내성 획득에 기여하는 위험요인에 대한 규명이 함께 이루어져야 할 것이다.
- 본 연구결과, 갯벌에서 분리된 V. vulnificus 310주 중 갯벌에서 59주로 가장 많이 분리되었는데 갯벌환경이 V. vulnificus에 의한 인체 감염을 유발할 수있다는 점에서 이들 균에 대한 적절한 대책이 필요하다. 실제, 서해안은 갯벌이 잘 발달되어 있고 해산물 채취와 같은 갯벌에서의 활동으로 인한 H vulnificus에 노출될기회가 다른지역 보다 많다.
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