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문제 정의
- 본 연구는 최근 기능성 건강식품으로서 각광을 받고 있는 목초액의 생화학적 약리효과를 평가하기 위하여 산화적 스트레스의 원인성분인 혈청 중의 지질대사에 미치는 목초액의 영향을 분석하여 평가하고자 한다. 따라서 참나무 원목을 숯가마에 넣고 350~435℃에서 증류방법에 따라 추출 .
- 0%가 되도록 조제 (Control, PL-1, PL-25, PL-50, PL-75 groups) 한 다음, SPF/VAF Cri/Bgi CD계 rats (male, 150 ±10 g) 에 8주 동안 조제사료와 함께 자유 음용케 한 다음, 혈액 중의 지질대사에 미치는 목초액 투여의 영향을 분석 . 평가하여 유의적인 결과를 얻었기에 보고한다.
제안 방법
- 0 ml씩을 첨가하고 잘 혼합한 다음, 37℃ 수조상에서 5분간 반응시킨다. Blank 를 대조로 하여 분광광도계를 사용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하여 TG의 함량 (mg/dl serum) 을 정량하였다.
- 0 ml씩을 첨가하고 잘 섞은 후 37℃ 수조상에서 5분간 가온시킨다. Blank를 대조로 하여 555 nm에서 흡광도를 측정하여 HDL-콜레스테롤의 함량 (mg/dl serum) 을 정량하였다.
- 동물실험용 사료조성은 탄수화물 58.3% (a-com starch 45.0% + sucrose 13.3%)을 기준으로 하여 단백질 18.0% (sodium-free casein), 지질 15.0% (lard/corn oil: 2/1, w/w)를 영양원으로 하였다 비타민과 무기질 (AIN-76 mixture) 각각 1.0%, 3.5%, 그리고 섬유질 3.0%, DL-meth-ionine 0.3%, choline chloride 0.2%를 첨가하였고, 여기에 cholesterol 0.5% 및 sodium chloride 0.2%를 첨가하여 고콜레스테롤혈증을 유도하도록 동물실험 용 사료를 조제하여 사용하였다 尸>
- 1 ml, 표준혈청 0.1 ml를 시험관에 넣고 여기에 BLF킷트시약 I 및 !!를 각각 4.0 ml씩 넣은 후 5초간 잘 혼합한 다음, 실온 (25 ± 3 ℃) 에서 25분간 방치 후 10분 이내에 증류수를 대조로 하여 분광광도계 (Spectrophotometer) # 사용하여 650 nm에서 흡광도를 측정하여 LDL-콜레스테롤의 함량 (mg/dl serum) 을 정량하였다.
- 목초액 투여가 생체 지질대사에 미치는 영향을 평가하기 위하여 조아제약에서 개발하여 특허출원한 목초액에서 조 제한시판 목초액 (원액 35% 상당)을 사용하여 0%, 1.0%, 25.0%, 50.0%, 75.0%가 되도록 조제 (control, PL-1, PL-25, PL-50, PL-75 groups) 하여 실험용 조제사료로써 8주 동안 자유 음용시킨 다음, 목초액의 지질대사에 미치는 영향을 평가하였다.
- 바이오제노믹스 (BioGenomics Inc., Seoul)에서 구입한 SPF/VAF Cri/Bgi CD계 흰쥐 (male, 150 ± 10 g)를 구입하여 본 대학 동물사육실에서 2주동안 실험용 조제 사료로써 예비 사육 및 예비 실험을 통해 투여량을 결정하였으며, 투여범위를 정한 다음, 7마리씩 5그룹으로 나누어 특허출원한 조아목초액을 희석하여 제조한 목초액 35%, 여기에 D-솔비톨, 메실엑기스, 베타인 등을 첨가하여 생산한 시판 조아목초액 A를 음용수를 사용하여 다시 0% (control), 1.0%, 25.0%, 50.0%, 75.0%가 되도록 조제 (Control, PL-1, PL-25, PL-50, PL-75 groups) 한 다음 조제사료와 함께 자유 음용시켰다. 이때 음용량의 설정은 하루 실험동물 (200 g 기준)의 사료 섭취는 20 g, 음용수로서 목초액은 20 ml을 섭취하는 것으로 계산하여 8주 동안 투여한 다음 12시간 절식 후 혈청 중의 목초액의 지질대사 실험에 사용하였다 (Table 1).
- 05 ml로 처리한 complete blood cell count병 (CBC, 녹십자사)에 넣어 저온 (-70℃) 에 동결 . 보존하면서 분석하였다.
- 실험동물의 처리는 실험사육 최종일 12시간 동안 절식시킨 후 단두하여 채혈하였고, 채취한 각 혈액은 실온에 30분간 방치한 후 700 X g에서 10분간 저온 원심분리하여 분 취한 상층액의 혈청을 항응고제인 sodium heparine (Sigma Co., 100,000 units)을 혈액 1 ml당 0.05 ml로 처리한 complete blood cell count병 (CBC, 녹십자사)에 넣어 저온 (-70℃) 에 동결 . 보존하면서 분석하였다.
- 따라서 참나무 원목을 숯가마에 넣고 350~435℃에서 증류방법에 따라 추출 . 정제하여 한국보건산업진흥원 (2003)의 검사를 거친 다음, 특허 출원한 조아목초액을 사용하여 목초액 35%, D-솔비톨, 매실엑기스, 베타인 등을 첨가하여 생산한 시판 목초액 A를 음용수에 각각 0%, 1.0%, 25.0%, 50.0%, 75.0%가 되도록 조제 (Control, PL-1, PL-25, PL-50, PL-75 groups) 한 다음, SPF/VAF Cri/Bgi CD계 rats (male, 150 ±10 g) 에 8주 동안 조제사료와 함께 자유 음용케 한 다음, 혈액 중의 지질대사에 미치는 목초액 투여의 영향을 분석 . 평가하여 유의적인 결과를 얻었기에 보고한다.
- 혈청 중의 HDL- 및 LDL-콜레스테롤 함량의 측정은 HDL-콜레스테롤 (HDL-C 555, Eiken Co., Japan), LDL-콜레스테롤 (BLF, Eiken Co., Japan) 킷트시약을 사용하였다.
- 혈청 중의 중성지질로서 트리글리세리드 (triglyceride: TG) 의 함량은 TG킷트시약 (Sigma Co., USA) 을 사용하여 분석하였다. 혈청 10 “L 표준용액 (300 mg/dl) 10 间와 Blank로 탈이온수 10 “1에 TG킷트시약 1.
- 황산첨가 후 10~90분 내에 분광광도계 (Spectrophotometer) 를 사용하여 550 nm에서 흡광도를 측정하고 표준검량선에 따라 총콜레스테롤의 함량 (mg/dl serum) 을 정량하였다.
대상 데이터
- 또한 모든 분석시약은 모두 시그마제 (Sigma Co., USA) 의 특급시약 및 1급 시약을 구입하여 사용하였다.
데이터처리
- 본 연구의 모든 실험결과는 통계 처리하여 평균치와 표준편차를 계산하였으며, 각 실험군간의 유의성 검정은 Student, s t-test对로 실시하였다.
이론/모형
- Applegate 등의 방법对에 따라 매일 체중을 측정하고 동시에 전날 공급한 사료의 잔량을 측정하여 체중변화 및 사료 효율을 평가하였다.
- 동맥경화지표 (atherogenic index: AI) 는 Haglund 등의 방법”에 따라 총콜레스테롤에 HDL-콜레스테롤의 함량을 뺀 다음, 이것을 다시 HDL-콜레스테롤로 나누어 계산하였다. AI value = (Total cholesterol-HDL cholesterol)/HDL cholesterol
- 헐청 중의 총콜레스테롤 함량은 Rudel 등의 방법的에 따라 o-phthaldehyde법으로 측정하였다. 시료를 0.
- 혈청 중의 단백질의 함량은 Lowry 등의 방법囲인 BSA법 (표준혈청 알부민)으로 측정하였다 혈청획분 20 同를 취하고 혈청은 1.0% SDS 용액 16 “1를 혼합하고, 증류수를 124 “1를 넣어 8배 희석하였다. 희석된 혈청 15 및 20 “1를 취해 증류수로써 80 및 85 “1를 넣고 희석시킨다.
성능/효과
- 영향을 주지 못했다. 그렇지만 혈청 중의 중성지질의 영향은 목초액 PL-25 및 PL-50 투여군은 대조군 대비 20.5% 및 19.5%의 매우 유의적인 억제효과가 인정되었고, 목초액 PL-75 투여군도 대조군 대비 12%의 유의적인 감소 효과가 인정되었다. 목초액 PL-25 및 PL-50 투여군의 총콜레스테롤은 대조군 대비 79.
- 그렇지만, 목초액 PL-1% 및 PL-75% 투여군의 LDL-콜레스테롤의 함량은 각각 51.10 ±3.20 및 50.52 ± 1.58 mg/dl serum으로서 대조군의 LDL-콜레스테롤의 함량 (55.13 ± 4.37 mg/dl serum: 100.0%) 대비 각각 92.6 및 91.6%로서 LDL-콜레스테롤의 함량 억제효과가 7-8% 정도로 상대적으로 감소효과가 떨어지고 있었다. 이러한 사실도 중성지질 (TG)이나 총콜레스테롤에 미치는 목초액의 영향과 거의 일치하는 경향으로 나타났다.
- 그렇지만, 목초액 PL-1% 및 PL-75% 투여군의 총콜레스테롤 함량은 각각 123.66 ± 6.19 및 124.64 ± 8.84 mg/ dl serum으로서 대조군의 총콜레스테롤의 함량 (134.61 ± 5.12 mg/dl serum: 100.0%) 대비 각각 91.9% 및 92.6% 로서 총콜레스테롤의 함량의 억제효과가 7-8% 정도로 상대적으로 감소효과가 떨어지는 것은 앞에서 중성지질 (TG) 에 미치는 목초액의 영향과 거의 일치하는 경향으로 나타났다.
- 001). 또한 PL-75 투여군도 혈청 중의 중성지질 함량이 108.11 + 9.23 mg/dl serum으로서 대조군의 중성지 질의함량 (122.26 ± 5.03 mg/dl serum: 100.0%) 대비 88.4% 로서 12%나 중성지질의 억제효과가 나타났지만 (p < 0.01), PL-25 및 PL-50 투여군보다는 중성지질의 억제효과가 떨어진다는 사실을 알 수 있었다. 이러한 사실은 과량투여에 의한 부작용으로밖에 평가할 수 없다.
- 3%의 매우 유의적인 총콜레스테롤 억제효과가 인정되었다. 또한 목초액 PL-25 및 PL-50 투여군은 20.3% 및 16.9%의 유의적 LDL-콜레스테롤의 억제효과가 인정되었을 뿐만 아니라 36.4% 및 25.5%의 HDL-콜레스테롤의 증가 효과가 인정되었다. 목초액 PL-25 및 PL-50 투여군은 대조군 대비 각각 37.
- 5%의 HDL-콜레스테롤의 증가 효과가 인정되었다. 목초액 PL-25 및 PL-50 투여군은 대조군 대비 각각 37.0% 및 50.0%로 매우 유의적인 동맥경화지수 (AI)의 억제효과가 나타났다.
- 목초액 PL-25 및 PL-50 투여군은 혈청 중의 중성지 질의함량이 각각 97.23 ± 2.24 및 98.40 ± 8.17 mg/dl serum 로서 대조군의 중성지질의 함량 (122.26 ± 5.03 mg/dl serum: 100.0%) 대비 79.5% 및 80.5%로서 각각 21% 및 20%의 매우 유의적인 TG의 억제효과가 나타났다 (p < 0.001). 또한 PL-75 투여군도 혈청 중의 중성지질 함량이 108.
- 5%의 매우 유의적인 억제효과가 인정되었고, 목초액 PL-75 투여군도 대조군 대비 12%의 유의적인 감소 효과가 인정되었다. 목초액 PL-25 및 PL-50 투여군의 총콜레스테롤은 대조군 대비 79.3% 및 83.7%로서 20.7% 및 16.3%의 매우 유의적인 총콜레스테롤 억제효과가 인정되었다. 또한 목초액 PL-25 및 PL-50 투여군은 20.
- 목초액 PL-25 및 PL-50- 투여군의 HDL-콜레스테롤의 함량은 61.22 ± 1.95 및 56.34 ± 4.32 mg/dl serum으로서 대조군의 HDL—콜레스테롤 함량 (44.88 ±1.51 mg/dl serum: 100.0%) 대비 136.4% 및 125.5%로서 각각 36% 및 26% 의 현저한 HDL-콜레스테롤 증가효과가 인정되었다 (p < 0.001).
- 목초액 PL-25 투여군의 총콜레스테롤 함량은 106.80 ± 7.20 mg/dl serum으로서 대조군의 총콜레스테롤 함량 (134.61 ± 5.12 mg/dl serum: 100.0%) 대비 79.3%로서 21%의 매우 유의적으로 콜레스테롤의 억제효과가 나타났고 (p < 0.001), 목초액 PL-50 투여군의 총콜레스테롤함량은 112.70 ± 6.20 mg/dl serum으로 대조군의 총콜레스테롤 함량 (134.61 ± 5.12 mg/dl serum: 100.0%) 대비 83.7%로서 17%의 효과적인 억제효과가 나타났다 (p < 0.01).
- Table 6에서 보는 바와 같이 목초액의 투여 용량에 따라 차이는 있지만, 거의 모든 목초액투여 군에서 동맥경화 지수가 상대적으로 감소하고 있었다. 목초액 투여군 중에서 AI가 가장 낮은 투여군은 PL-25 투여군으로서 AI가 0.74 ± 0.15로서 대조군의 AI (2.00 ± 0.28: 100.0%) 대비 37.0%로서 60% 이상의 매우 유의적인 AI의 감소효과로 나타났다 (p < 0.001). 그 다음으로서는 PL-50 투여군으로서 AI가 1.
- 비교하여 보면 Table 3과 같다. 목초액 투여에 따른 혈청 중의 총콜레스테롤의 함량에 대한 현저한 억제 효과가 인정되었다.
- 성인병의 발병인자로 알려진 LDL-콜레스테롤의 함량은 PL-25 및 PL-50 투여군에서 44.55 ± 4.51 및 45.80 ± 3.19 mg/dl serum으로서 대조군의 LDL-콜레스테롤 함량 (55.13 ± 4.37 mg/dl serum: 100%) 대비 각각 80.7% 및 83.7%로서 19% 및 16%의 유의적 LDL-콜레스테롤의 억제 효과가 나타났다.
- 6%로서 LDL-콜레스테롤의 함량 억제효과가 7-8% 정도로 상대적으로 감소효과가 떨어지고 있었다. 이러한 사실도 중성지질 (TG)이나 총콜레스테롤에 미치는 목초액의 영향과 거의 일치하는 경향으로 나타났다.
- 이상이 결과에서 볼 때 목초액의 장기투여는 체내의 지질대사를 효과적으로 촉진하여 혈중 중성지질 및 LDL-콜레스테롤의 함량을 효과적으로 억제할 수 있을 뿐만 아니라 콜레스테롤 억제인자인 HDL-콜레스테롤의 함량을 증가하여 동맥경화지수 (AI)를 효과적으로 감소한다는 사실이 입증되었다고 평가할 수 있겠다.
후속연구
- 그렇지만, 목초액의 유효성분 중에서 어떤 성분인지는 계속적인 연구가 필요하겠지만, 이들 성분 중에서 함량^ 가장 많은 초산의 영향으로 추정할 수 있을 것으로 기대된다. 2.
- 따라서 목초액의 장기간 투여는 중선지질, 총콜레스테롤 및 LDL-콜레스테롤을 효과적으로 억제할 뿐만 HDL-콜레스테롤을 효과적으로 증가시켜 동맥경화지수(AI)도 효과적으로 억제할 수 있기 때문에 목초액의 장기투여는 성인병의 예방에 효과적일 것으로 기대된다.
- 따라서 목초액의 장기투여는 동맥경화, 고혈압, 뇌졸중 (中 風), 협심증, 심장병 등의 중성지질 및 콜레스테롤 관련 성인병을 효과적으로 예방하고 치료할 수 있을 것으로 기대된다.
- 이처럼 목초액의 투여는 중성지질의 억제효과를 비롯하여 성인병의 발병 원인물질인 LDL-콜레스테롤의 함량을 효과적 2로 억제할 수 있을 뿐만 아니라 콜레스테롤억제인자 (anticholesterol factor) 로 밝혀진 HDL-콜레스테롤의 함량을 매우 효과적으로 증가시켜서 동맥경화지수 (AI)를 효과적으로 감소하기 때문에 목초액의 장기투여는 성인병을 매우 효과적으로 예방하고 억제할 수 있을 것으로 기대된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.