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Lentivirus System을 이용한 Glucocorticoid 유도 Reporter 유전자 발현의 분석
In vitro Analysis of Glucocorticoid-induced Reporter Gene Expression Using Lentivirus System 원문보기

한국해양바이오학회지 = Journal of marine bioscience and biotechnology, v.2 no.2, 2007년, pp.81 - 85  

이미숙 (한국기초과학지원연구원 춘천센터) ,  김지연 (한국기초과학지원연구원 춘천센터) ,  허송욱 (한국기초과학지원연구원 춘천센터)

초록
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글루코코르티코이드의 다양한 생리학적 과정은 이 호르몬에 의해 활성화된 수용체가 표적 유전자의 전사를 촉진 혹은 억제시킴으로써 일어나게 된다. 본 논문은 렌티바이러스 리포터 시스템을 이용하여 글루코코르티코이드 호르몬에 의한 GR 활성을 핵내에서 GRE에 의해 유도된 리포터 단백질인 mRFP 또는 루시퍼라아제의 발현을 통해 정성, 정량화 하였다. 그 결과 GR이 endogenous 하게 발현되는 HeLa 세포에서 코티졸을 처리하였을 때 활성화된 GR에 의해 GRE-inducible한 RFP와 루시퍼라아제의 발현이 각각 공초점 형광 현미경과 IVIS-200을 이용하여 형광 또는 BLI을 통해 증가함을 확인하였다. 이러한 결과를 통해 렌티바이러스 리포터 시스템을 이용한 연구는 세포 내에서 뿐 만 아니라 향후 생체내에서의 GR signaling을 모니터링하는데 유용하게 사용되어질 수 있을 것이다.

Abstract ▼ AI-Helper 아이콘AI-Helper

Glucocorticoid hormone regulates numerous physiological processes, such as regulation of metabolism, and anti-inflammatory and immunosuppressive actions via the activation and repression of gene expression. Here we described a lentivirus-based reporter vector system expressing red fluorescent protei...

주제어

#Glucocorticoid-responsive element (GRE)   #lentivirus   #glucocorticoid receptor   #insulator  

AI 본문요약
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문제 정의

  • 하였다. 그러나 단일 벡터에서 transgene 의 발현은 프로모터간의 간섭에 의해 유전자간의 발현에 영향을 받을 수 있다고 알려져 왔다 [3, 5, 10], 본 연구에서는 인접한 유전자간의 간섭에 의해 프로모터 활성이 저해 받는 것을 최소화하기 위해 insulator 를 삽입한 렌티바이러스 벡터를 제작하여 GRE 프로모터 전사 효율을 높여 리포터 유전자 발현을 향상시켰다.
  • [14], 그러나 이러한 방법은 다양한 조직에서 장기간 유전자 발현을 안정적으로 유도하기 어 렵다는 단점을 갖고 있다. 따라서 생체내에서도 유전자의 효율적이고 안정적인 발현을 유도할 수 있는 유전자 전달 방법으로써 렌티바이러스 시스템을 도입하여 위에서 언급한 단점을 보완하고자 하였다.
  • 렌티바이러스 벡터는 대개 단일 open reading frame (ORF)에서 발현되도록 제작되어져 왔으나, 많은 유전자 전달을 위해 다양한 transgene의 발현이 효과적이며 높은 수준으로 발현되도록 하는 방법을 개발하고자 하였다. 그러나 단일 벡터에서 transgene 의 발현은 프로모터간의 간섭에 의해 유전자간의 발현에 영향을 받을 수 있다고 알려져 왔다 [3, 5, 10], 본 연구에서는 인접한 유전자간의 간섭에 의해 프로모터 활성이 저해 받는 것을 최소화하기 위해 insulator 를 삽입한 렌티바이러스 벡터를 제작하여 GRE 프로모터 전사 효율을 높여 리포터 유전자 발현을 향상시켰다.

가설 설정

  • The transfer plasmids with the firefly luciferase cDNA or the mRFP cDNAunder control of the 5XGRE promoter followed by the polypurine tract (cPPT) preceded by the woodchuck hepatitis posttranscriptional regulatory element (WPRE), and these elements are flanked by the 5' LTR and self-inactivating long terminal repeat (3' SIN LTR). B. Transmission electron microscopy picture of purified lentivirus. The TEM images illustrate that the average size of the nano- particles is 20-30nm.
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