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문제 정의
- 본 연구에서의 목적은 경북북부지역 산란계에서 APV 의 감염 동향을 알아보고자 ELISA법으로 혈중 항체가를 알아봄과 동시에 분변시료에서 바이러스의 분리가 이루어지는지 RT-PCR법으로 확인하였다.
제안 방법
- RT-PCR 은 VeTeK™ TRT Detection Kit (iNtRON biotechnologyick, Korea)을 사용하였으며 그 실험방법에 따라 준비된 premix tube 에 RNase free water 18/z£ 그리고 template 2㎕를 넣어 Pre-PCR(45°C/ 30 min, 94°C/5 min), PCR (denaturation 9 4 °C/30s, annealing 52 °C/30s, extension 7 2°C/40s, 40 cycles) 그리고 post-PCR (72°C /5 min, 4°C/8)의 조건에서 핵산 증폭기 (Biometra, Germany)를 사용하여 유전자 증폭을 실시하였다.
- 군 (안동, 영주, 봉화, 의성, 영양, 청송에서 사육중인 산란계 93개 농가 465수의 혈청에 대하여 ELISA법을 이용하여 APV 항체가를 측정하였으며, 3개 시 . 군 (영주, 의성, 봉화) 54농가의 분변시료를 농가 당 5개의 분변을 가지고 RT-PCR을 수행하여 바이러스의 유무를 확인하였다.
- 군 (안동, 영주, 봉화, 의성, 영양, 청송에서 사육중인 산란계 93개 농가 465수의 혈청에 대하여 ELISA법을 이용하여 APV 항체가를 측정하였으며, 3개 시 . 군 (영주, 의성, 봉화) 54농가의 분변시료를 농가 당 5개의 분변을 가지고 RT-PCR을 수행하여 바이러스의 유무를 확인하였다.
- 혈청을 1:500으로 희석하여 항원이 코팅된 plate 각 well에 양성대조군, 음성대조군, 가검혈청을 각 100㎕씩 분주하고 30분간 실온에서 반응시 킨 후 세척액 350㎕씩 4회 세척 한 다음 HRPO-conjugate를 각 well에 100㎕씩분주하여 30분간 실온에서 반응시킨 후 세척 액 350㎕씩 4회 세 척 하였다. 그 후 TMB- substrate를 각 well에 100㎕씩 분주하여 15 분 실온에서 반응 후 stop 용액을 넣어 반응을 정지시킨 후 흡광도 650nm에서 측정하였다.
대상 데이터
- 경북북부지역의 본 지소 관내 6개시 . 군 (안동, 영주, 봉화, 의성, 영양, 청송에서 사육중인 산란계 93개 농가 465수의 혈청에 대하여 ELISA법을 이용하여 APV 항체가를 측정하였으며, 3개 시 .
이론/모형
- 바이러스의 RNA는 Viral Gene-Spin™ Viral DNA/RNA Extraction Kit (iNtRON biotechnology, Korea)의 사용방법에 따라 추출하였다. 분변 상층액을 300㎕에 lysis buffer 500㎕를 넣고 혼합한 뒤 상온에서 10min 반응시켰다.
- 준비 된 가검 혈청을 ELISA Kit (IDEXX, USA)의 실험방법에 따라 수행하였다. 혈청을 1:500으로 희석하여 항원이 코팅된 plate 각 well에 양성대조군, 음성대조군, 가검혈청을 각 100㎕씩 분주하고 30분간 실온에서 반응시 킨 후 세척액 350㎕씩 4회 세척 한 다음 HRPO-conjugate를 각 well에 100㎕씩분주하여 30분간 실온에서 반응시킨 후 세척 액 350㎕씩 4회 세 척 하였다.
성능/효과
- 2. 지역별 농가에서는 의성, 청송, 봉화에서 100% 항체 양성으로 나타났으며, 영주가 93.3%, 안동이 85.7% 그리고 영양이 50% 항체 양성을 보였다.
- 3% 그리고 영양 50%로 나타났다. 계군 당 5수씩 개체별로 검사한 결과 465수중 433수가 양성(93.1%) 으로 나타났으며 안동 82.9%, 영주 91.4%, 의성 99.3%, 청송 95%, 영양 20% 그리고봉화 75%로 나타났다(Table 1, Fig 1).
- 6개시 . 군 93농가의 465수에서 이루어진 APV에 대한 항체 양성 농가는 93농가 중 90농가에서 항체 양성으로 나타나 평균 96.7%로 나타났다. 의성, 청송, 봉화는 농가별 검사에서100% 항체 양성으로 나타났으며 안동 85.
- 본 조사에서는 경 북지역 산란계 를 대상으로 혈청검사를 실시한 결과 93계군에서 중 90계 군(96.7%)이 양성 항체 양성계 군으로 판정되었고, 개체별로는 평균 465수 중 433수 (93.1%)가 양성으로 나타났으나, 54계군의 분변시료에 대한 RT-PCR 결과에서는 바이러스를 확인할 수 없었다.
- 7%로 나타났다. 의성, 청송, 봉화는 농가별 검사에서100% 항체 양성으로 나타났으며 안동 85.7%, 영주 97.3% 그리고 영양 50%로 나타났다. 계군 당 5수씩 개체별로 검사한 결과 465수중 433수가 양성(93.
- 이상의 실험결과로 보아 경북북부지역 대부분의 산란계 농장에서 APV의 감염을 의심 할 수 있으며, 정확한 APV의 진단을 위해서는 역학조사 및 임상증상이 있는 계군에서 기관시료에서 바이러스를 확인 해 볼 필요가 있다고 사료되었다.
후속연구
- 다음 조사에 있어서는 경북 전 지역을 대상으로 항체가 조사 및 기관조직에 대한 시료를 채취하여 RT-PCR을 수행하여 바이러스의 존재 유무의 조사가 이루어져야 하며, 농장별 역학 조사를 실시하여 실제 농가의 경제적 피해를 조사하여 APV에 대한 예방대책이 수립되어져야 할 것으로 사료되며, 농장에서는 질병 예방 및 차단을 위한 노력이 필요하다고 판단된다.
- 가능성을 원인으로 본다. 또한 APV는호흡기 질병이므로 바이러스 확인을 위한시료에 있어서 우선적으로 비강에서 획득한시 료로 RT-PCR을 수행 했어 야 흐]-나 시 료채취의 어려움 등으로 분변에서 RT-PCR을실시함으로 바이러스의 확인이 되지 않았을 원인이 될 수도 있을 것으로 생각한다. 김0 은 국내 APV를 RT-PCR을 이용한 항원검출에서 152건 중 80건(52.
- 6%)양성으로 보고하고, 시료는 기관 swab 시료와 전혈이 유용하다고 밝혔다. 분변으로 바이러스의 배출이 이루어지기는 하나 그 양이 너무 작아서 RT-PCR에 의해서는 바이러스의 진단이 정확하지 않을 수도 있으므로 앞으로 조사에서는 혈청검사 결과 양성농가 계군의 기관 swab 시료와 전혈에서 바이러스 확인을 해볼 필요가 있을 것으로 사료된다.
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