난자의 회수시기, BSA, Cysteine 및 Myoinositol이 개 난자의 체외성숙에 미치는 영향 Effects of Ovarian Estrus Stage of Oocytes and Supplementation of Medium with BSA, Cysteine and Myoinositol on in vitro Maturation of Canine Oocytes원문보기
본 연구는 난자의 채취시기, 배양액에 BSA, cysteine, myoinositol 첨가가 난자의의 체외성숙에 미치는 영향을 조사하였다. 1. 휴지기, 난포기, 황체기로 구분한 난소로부터 채취한 난포란을 배양하였을 때 체외성숙율은 각각 $0.0{\pm}0.0%$, $10.0{\pm}4.1%$와 $5.7{\pm}1.6%$로서 난포기에 채취한 난자가 휴지기와 황체기의 난자에 비해 체외성숙율이 높게 나타났다. 2. 휴지기, 난포기, 황체기 난포로부터 회수한 난자를 5% BSA와 0.1 mM cysteine를 첨가한 TCM-199 배양액에서 배양했을 때 체외성숙율은 각각 $0.0{\pm}0.0%$, $15.8{\pm}4.7%$와 $5.6{\pm}1.5%$로서 난포기의 난자가 가장 높은 체외성숙율을 나타냈다. 3. 휴지기, 난포기, 황체기 난포로부터 회수한 난자를 5% BSA와 10mM myoinositol를 첨가한 TCM-199 배양액에서 배양했을 때 체외성숙율은 각각 $0.0{\pm}0.0%$, $18.4{\pm}4.6%$와 $5.7{\pm}1.9%$로서 난포기 난자의 체외성숙율이 가장 높게 나타냈다.
본 연구는 난자의 채취시기, 배양액에 BSA, cysteine, myoinositol 첨가가 난자의의 체외성숙에 미치는 영향을 조사하였다. 1. 휴지기, 난포기, 황체기로 구분한 난소로부터 채취한 난포란을 배양하였을 때 체외성숙율은 각각 $0.0{\pm}0.0%$, $10.0{\pm}4.1%$와 $5.7{\pm}1.6%$로서 난포기에 채취한 난자가 휴지기와 황체기의 난자에 비해 체외성숙율이 높게 나타났다. 2. 휴지기, 난포기, 황체기 난포로부터 회수한 난자를 5% BSA와 0.1 mM cysteine를 첨가한 TCM-199 배양액에서 배양했을 때 체외성숙율은 각각 $0.0{\pm}0.0%$, $15.8{\pm}4.7%$와 $5.6{\pm}1.5%$로서 난포기의 난자가 가장 높은 체외성숙율을 나타냈다. 3. 휴지기, 난포기, 황체기 난포로부터 회수한 난자를 5% BSA와 10mM myoinositol를 첨가한 TCM-199 배양액에서 배양했을 때 체외성숙율은 각각 $0.0{\pm}0.0%$, $18.4{\pm}4.6%$와 $5.7{\pm}1.9%$로서 난포기 난자의 체외성숙율이 가장 높게 나타냈다.
This study was carried out to investigate the effects of ovarian estrus stage of oocytes and supplementation of medium with BSA, cysteine and myoinositol on in vitro maturation of canine oocytes. The in vitro maturation(IVM) rate to metaphase II (M II) stage of oocytes recovered from different stage...
This study was carried out to investigate the effects of ovarian estrus stage of oocytes and supplementation of medium with BSA, cysteine and myoinositol on in vitro maturation of canine oocytes. The in vitro maturation(IVM) rate to metaphase II (M II) stage of oocytes recovered from different stage of the reproductive cycle (inactive, follicular and luteal stage) cultured in TCM-199 media were $0.0{\pm}0.0%$, $10.0{\pm}4.1%$ and $5.7{\pm}1.6%$, respectively. The IVM rate of oocytes collected from follicular stage was significantly higher in inactive or luteal stage of oocytes. The IVM rates of oocytes recovered from different stage of the reproductive cycle cultured in TCM-199 media with 5% BSA and 0.1 mM cysteine were$0.0{\pm}0.0%$, $15.8{\pm}4.7%$, $5.6{\pm}1.5%$, respectively. The IVM rates of oocytes recovered from different stage of the reproductive cycle cultured in TCM-199 media with 5% BSA and 10 mM myoinositol were $0.0{\pm}0.0%$, $18.4{\pm}4.6%$ and $5.7{\pm}1.9%$, respectively. The IVM rate of follicular stage oocytes was significantly higher in oocytes collected from follicular stage and with cultured 5% BSA and 0.1 mM cysteine or 5% BSA and 10 mM myoinositol compared to other experimental group.
This study was carried out to investigate the effects of ovarian estrus stage of oocytes and supplementation of medium with BSA, cysteine and myoinositol on in vitro maturation of canine oocytes. The in vitro maturation(IVM) rate to metaphase II (M II) stage of oocytes recovered from different stage of the reproductive cycle (inactive, follicular and luteal stage) cultured in TCM-199 media were $0.0{\pm}0.0%$, $10.0{\pm}4.1%$ and $5.7{\pm}1.6%$, respectively. The IVM rate of oocytes collected from follicular stage was significantly higher in inactive or luteal stage of oocytes. The IVM rates of oocytes recovered from different stage of the reproductive cycle cultured in TCM-199 media with 5% BSA and 0.1 mM cysteine were$0.0{\pm}0.0%$, $15.8{\pm}4.7%$, $5.6{\pm}1.5%$, respectively. The IVM rates of oocytes recovered from different stage of the reproductive cycle cultured in TCM-199 media with 5% BSA and 10 mM myoinositol were $0.0{\pm}0.0%$, $18.4{\pm}4.6%$ and $5.7{\pm}1.9%$, respectively. The IVM rate of follicular stage oocytes was significantly higher in oocytes collected from follicular stage and with cultured 5% BSA and 0.1 mM cysteine or 5% BSA and 10 mM myoinositol compared to other experimental group.
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문제 정의
본 연구는 난자의 채취시기, 배양액에 BSA, cysteine, myoinositol 첨가가 난자의의 체외성숙에 미치는 영향을 조사하였다.
이에, 본 연구는 번식주기 별 난자의 채취시기, 배양액에 BSA, cysteine, myoinositol 첨가가 개난자의 체외성숙에 미치는 영향을 조사하였다.
제안 방법
개 난소를 적출하여 30～35℃의 생리식염수에 침지한 후 1시간 이내에 실험실로 옮겨 난소주위의 조직을 정리하고 배양액으로 2～3회 세척하였다. 난소를 외과용 blade로 얇게 자른 후 m-PBS 에 부유시켜 난자를 회수하였다. 번식주기 별(휴 지기, 발정기, 황체기)로 구분하여 채취한 난소로부터 난자를 회수하였다.
난소를 외과용 blade로 얇게 자른 후 m-PBS 에 부유시켜 난자를 회수하였다. 번식주기 별(휴 지기, 발정기, 황체기)로 구분하여 채취한 난소로부터 난자를 회수하였다.
성숙 배양한 난자는 0.2%(w/v) hyaluronidase (Sigma, U.S.A.)를 1～2분간 처리에 의해 난구세포를 제거하고, 나화된 난자는 3.7% formaldehyde triton X-100(Sigma, U.S.A.)에 10분간 고정하고 m-PBS로 세척 후 slideglass에 올린 다음 1.0 uM Hoechst 33342(Sigma, U.S.A.)로 염색 후세포 및 핵 분열상을 관찰하여 난자의 체외성숙을 판정하였다.
회수한 난자는 5% BSA(bovine serum albumin, Sigma, U.S.A.), 0.1 mM cysteine(Sigma, U.S.A.) 10 mM of myoinositol(Sigma, U.S.A.)이 첨가된 TCM-199(Whittaker, U.S.A.) 배양액 소적 내에 10개의 난자를 주입하고 mineral oil(Squibb, U.S.A.)로 피복한 다음 CO2 배양기내(5% CO2 , 95% air, 37.0℃)에서 48～72시간 성숙배양을 실시하였다.
데이터처리
반복실험을 통하여 얻어진 결과는 SAS 8.12 program에 의해 분산분석과 평균치를 구하였으며, 처리간의 차이를 평가하기 위하여 Duncan의 다중검증을 실시하였다.
성능/효과
1. 휴지기, 난포기, 황체기로 구분한 난소로부터 채취한 난포란을 배양하였을 때 체외성숙율은 각각 0.0±0.0%, 10.0±4.1%와 5.7±1.6%로서 난포기에 채취한 난자가 휴지기와 황체기의 난자에 비해 체외성숙율이 높게 나타났다.
2. 휴지기, 난포기, 황체기 난포로부터 회수한 난자를 5% BSA와 0.1 mM cysteine를 첨가한 TCM-199 배양액에서 배양했을 때 체외성숙율은 각각 0.0±0.0%, 15.8±4.7%와 5.6±1.5%로서 난포기의 난자가 가장 높은 체외성숙율을 나타냈다.
3. 휴지기, 난포기, 황체기 난포로부터 회수한 난자를 5% BSA와 10 mM myoinositol를 첨가한 TCM-199 배양액에서 배양했을 때 체외성숙율은 각각 0.0±0.0%, 18.4±4.6%와 5.7±1.9% 로서 난포기 난자의 체외성숙율이 가장 높게 나타냈다.
휴지기, 난포기, 황체기 난포로부터 회수한 난자를 5% BSA와 0.1 mM cysteine을 첨가한 TCM-199 배양액에서 배양했을 때 체외성숙율은 각각 0.0±0.0%, 15.8±4.7%, 5.6±1.5%로서 난포기에 채취한 난자가 가장 높은 체외성숙율을 나타 냈다. 이러한 결과는 개 난자의 배양 시 cysteine 의 첨가영향에 대한 보문은 찾을 수 없지만, 이 개 난자를 0, 10.
번식주기별로 채취한 난소로부터 회수한 난자를 5% BSA와 10 mM myoinositol을 첨가한 TCM-199 배양액에서 배양하였을 때 체외성숙율은 Table 3과 같다. 휴지기, 난포기, 황체기 난포로부터 회수한 난자를 5% BSA와 10 mM myoinositol을 첨가한 TCM-199 배양액에서 배양했을 때 체외성숙율은 각각 0.0±0.0%, 18.4±4.6%와 5.7±1.9%로서 난포 기에 회수한 난자의 체외성숙율이 가장 높게 나타났다. 이러한 결과는 myoinositol 첨가영향에 대한 보문은 찾을 수 없지만, 이 개 난자를 0, 25.
휴지기, 난포기, 황체기로 구분한 난소로부터 채취한 난포란을 TCM-199 배양액에서 배양했을때 체외성숙율은 각각 0.0±0.0%, 10.0±4.1%와 5.7±1.6%로서 난포기에 채취한 난자가 휴지기와 황체기에 비해 높은 체외성숙율을 나타냈다. 이러한 결과는 개 난자를 이용하여 48시간 SOF+ 3% BSA와 SOF+4% BSA액에서 배양했을 때 GVBD 및 MII기의 체외성숙율은 각각 45.
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