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문제 정의
- 및 잎의 성분 함량을 조사하고자 하였다. 또한 복분자 이외에도 산딸기, 붉은가시딸기, 줄딸기 등에 대한 성분 함량도 비교하여 복분자를 대신할 수 있는 기능성식품을 개발하고자 실험에 착수하였다.
- 일반적으로 복분자는 미숙과를 약용하므로 실험 중 미숙과에 triterpenoid가 많이 함유될 것으로 예측되어 숙과, 미숙과 및 잎의 성분 함량을 조사하고자 하였다. 또한 복분자 이외에도 산딸기, 붉은가시딸기, 줄딸기 등에 대한 성분 함량도 비교하여 복분자를 대신할 수 있는 기능성식품을 개발하고자 실험에 착수하였다.
제안 방법
- TLC Documentation Systeme UVI tel Limited 제품을 사용하였으며 소포트웨어는 동일회사의 UVI band program으로 그 colony수를 측정하여 19a-HUT 화합물의 함량을 측정하였다. TLC plate는 silica gel aluminium sheets(Si-gel 60F254, Merck 1.
- 300 ml 씩 정확히 채취하여 spotting하였다. 이를 CHCl3-MeOHH2O(75:25:10, 하층)으로 10 cm 전개한 다음 말리고 50%- H2SO4S 분무하고 120℃의 오븐에서 30초 발색시킨 다음 이를 TLC-DM(UVI tel Limited)로 colony 수를 카운트 (software :UVI tel Limited UVI band program)하였다. 표준액 대비한 검액의 6종 HUT 성분의 함량을 산출하여 식물 재료 중량당 19a-HUT 화합물 중량(mg/g) 값을 계산하여 Table Ⅱ에 나타내었다.
- 001의 메탄올로 5시간씩 3회 끓여서 추출한 다음 여과하였다. 이를 진공농축기를 이용하여 감압하에 농축하고 동결건조한 다음 정확히 메탄올 추출 물을 평량하였다. 이 메탄올 추출물을 500 ml의 증류수에 현 탁시키고 분획깔때기에서 hexane 800ml로 2회 분배추출한 다음 남은 수층에 에테르 800 ml로 2회 분배추출하였다.
- 표준액을 제조하기 위해 전보의 방법에 따라 분리된 euscaphic acid(EA), tormentic acid(TA), 23-hydroxytormentic acid(23-HTA), kajiichigoside F/Kaji FJ, rosamultin(Rosa), niga-ichigoside F\(Niga Fl의 6종을 각각 메탄올에 녹이고 희석하여 5.00mg/ml의 용액을 제조하였다. 따로 검액을 제조하기 위해 산딸기 및 복분자 19a-HUT mixture 20 mg씩 취 하고 1000 μ1에 녹였다.
- 한국산 4종의 Rubus속 식물의 19a-HUT 혼합물을 이용하기 위하여 그 추출률 및 개별 함량을 6종 표품 19a-HUT 화합물을 이용하여 비교하였다. 그 결과 복분자딸기 잎을 이용하여 높은 수율의 19a-HUT 혼합물 제조가 가능하였으며 산딸기는 숙과에서 가장 높은 19a-HUT 혼합물 제조가 가능하였다.
대상 데이터
- 산딸기 미숙과는 6월 중순 채집하였으며 산딸기 숙과는 붉게 익게 되었을 때인 7월말경 채집하였다. 복분자 미숙과는 8월 초순경 회백색인 상태의 미숙과를 채집하였으며 숙과는 검게 익게 되었을 때인 8월 중순경 채집하였다.
- 식물을 이용하여 실험에 사용하였다. 산딸기 잎과 복분자의 잎은 6월 중 채집한 후 사용하였다. 산딸기 미숙과는 6월 중순 채집하였으며 산딸기 숙과는 붉게 익게 되었을 때인 7월말경 채집하였다.
- 산딸기와 복분자나무는 원주시 근교에 자생하는 식물을 이용하여 실험에 사용하였다. 산딸기 잎과 복분자의 잎은 6월 중 채집한 후 사용하였다.
성능/효과
- 메탄올 추출물의 수율은 미숙과와 숙과를 비교하였을 때 숙과가 현저히 높았으며, 잎은 식물종에 따른 편차가 크지만 일반적으로 그 수율이 높았다(Table I). 가장 높은 수율을 보였던 것은 줄딸기 잎 으로서 67.5%에 달하였고 다음으로 산딸기 숙과(60.0%), 복 분자 잎(43.9%) 순이었다. HUT 수율은 복분자 잎이 가장 높았으며(5.
- 이용하여 비교하였다. 그 결과 복분자딸기 잎을 이용하여 높은 수율의 19a-HUT 혼합물 제조가 가능하였으며 산딸기는 숙과에서 가장 높은 19a-HUT 혼합물 제조가 가능하였다. 그리고 단일 성분으로는 Niga 이 가장 높은 평균함량을 보였다.
- 14 mg/g이었던 바 EA 함량이 더 높게 관찰되었다. 그리고 23-HTA가 비당체 중 가장 높은 함량을 보였으므로 TA가 23-HTA의 전구물질로 사용됨에 따른 양적 변화인 것으로 예상되었다. 이러한 현상은 배당체에서도 유사하게 관찰되었는데 TA의 배당체인 Rosa는 평균함량(0.
- 13 mg/g). 그리고, 복분자 잎에서 숙과보다 더 많은 19a-HUT가 존재함이 나타났다(3.57 mg/g). 이와 반대로, 열매가 붉게 익는 산딸기와 붉은가시딸기 및 줄딸기에서는 숙과에서 훨씬 높은 함량을 보였다.
- 메탄올 추출물의 수율은 미숙과와 숙과를 비교하였을 때 숙과가 현저히 높았으며, 잎은 식물종에 따른 편차가 크지만 일반적으로 그 수율이 높았다(Table I). 가장 높은 수율을 보였던 것은 줄딸기 잎 으로서 67.
- 54mg/g을 보여 triterpenoid는 배당체로서 더 많이 존재함이 나타났다. 비당체 함량은 23-HTA> euscaphic acid> tormentic acid 순으로 관찰되 었으며, 배당체 함량은 Niga Fj> Kaji F\> Rosa으로 관찰되었다. Niga 의 함량은 산딸기 숙과에서 가장 높았다.
- 즉 복분자딸기의 경우 미숙과에는 triterpenoid 함량이 높으나 숙과에서는 그 함량이 낮아 다른 식물재료와는 다른 양상을 나타내었다. 비당체(genin) 의 평 균함량은 0.94 mg/g이 었으며 배 당체(glycoside)는 1.54mg/g을 보여 triterpenoid는 배당체로서 더 많이 존재함이 나타났다. 비당체 함량은 23-HTA> euscaphic acid> tormentic acid 순으로 관찰되 었으며, 배당체 함량은 Niga Fj> Kaji F\> Rosa으로 관찰되었다.
- 실험에 사용된 4종의 Rubus 속 식물재료는 모두 EA, TA, 23-HTA, Kaji F1； Niga 0을 모두 함유하고 있었다. Niga-ichigoside F?의 존재가 확인된 식물 재료는 복분자 미숙과, 줄딸기 미숙과 산딸기 숙과 및 잎이었다.
- 그리고 23-HTA가 비당체 중 가장 높은 함량을 보였으므로 TA가 23-HTA의 전구물질로 사용됨에 따른 양적 변화인 것으로 예상되었다. 이러한 현상은 배당체에서도 유사하게 관찰되었는데 TA의 배당체인 Rosa는 평균함량(0.13 mg/g)이 Kaji 보다 낮은 함량(0.17 mg/g)을 보였고, 23-HTA 및 Rosa에서 생합성될 수 있는 Niga 은 가장 높은 함량을 보였다(0.29 mg/g). 이상의 19a-HUT들은 Niga F을 생합성하기 위한 중간체 (intermediate)이거나 부산물(byproduct)일 것으로 생각된다.
- 57 mg/g). 이와 반대로, 열매가 붉게 익는 산딸기와 붉은가시딸기 및 줄딸기에서는 숙과에서 훨씬 높은 함량을 보였다. 그리고, 장미과 식물인 해당화 뿌리에서 얻어진 EA 및 TA의 항염효과 및 항비만효과, TA의 TPA 유도 흰쥐 귀 부종에 대한 억제효과'2)및 anti-tumor promoting effect13' 등이 보고되었다.
- 한약 복분자는 복분자 딸기의 미숙과를 지칭한다고 하였으며, 본 연구결과에서도 복분자는 미숙과에 I9a-HUT가 더 많은 것으로 나타나고 있었던 반면(0.41 mg/g), 열매가 검게 익는 숙과에서는 극소량간이 관찰되었다(0.13 mg/g). 그리고, 복분자 잎에서 숙과보다 더 많은 19a-HUT가 존재함이 나타났다(3.
후속연구
- 그리고 단일 성분으로는 Niga 이 가장 높은 평균함량을 보였다. 그러므로, 이러한 사실을 이용하여 19a- HUT 혼합물이 강화된 건강식품의 개발이 기대된다.
- 그러므로 탄닌 성분 대신에 19a-HUT 가 강화된 산딸기 음료 등 기능성식품의 개발이 가능하다고 생각된다. 그리고, 복분자나무 열매의 경우는 열매 추출물에 복분자의 잎 추출물로 19a-HUT를 강화하는 방법의 제품개발이 기대되며, 산딸기의 경우는 숙과를 그대로 이용하는 것이 기능성을 위해 매우 바람직하다고 제시되었다.
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