B cell과 T cell을 이용한 면역세포의 생육 촉진 실험에서, B${\cdot}$T cell은 배양 6일째 수피 추출물이 각각 $4.2{\times}10^4$cells/ml, $5.0{\times}10^4$cells/ml로 가장 높은 세포농도를 나타냈다. 면역세포를 이용한 cytokine의 분비량 측정실험에서는 수피추출물이 배양 시간에 따른 cytokine의 분비가 가장 높게 나타나는 것을 확인할 수 있었다. 각 세포의 TNF-${\alpha}$의 분비량은 6일째 최고의 분비량을 나타내었고, 수피 추출물의 경우 대조군에 비해 7-8배 가량 더 높은 분비량을 나타낸 것을 확인하였다. IL-6의 경우 6일째 최고의 분비량을 나타내었고, 수피 추출물에서 가장 높은 분비량을 나타내었다. 또한 때죽나무 추출물을 첨가한 배지에 의한 NK cell의 면역활성을 측정하였으며, 모든 추출물에서 배양시간에 따라 유의적으로 증가하는 것을 확인하였다. 그 중 때죽나무 수피 추출물에서 B cell의 경우 $14.1{\times}10^4$cells/ml, T cell의 경우 $15.3{\times}10^4$cells/ml 으로 가장 높은 생육 활성을 나타내었다. 인간 정상 신장세포인 HEK293을 이용한 세포 독성을 살펴본 결과, 각 추출물은 1.0mg/ml의 농도에서 최고 27.4%의 세포독성을 나타내었다. 또한 항암활성 효과를 살펴보기 위하여 2가지의 암세포를 이용하였는데, AGS와 MCF-7에서 뿌리추출물의 경우 1.0mg/ml의 농도에서 65정도의 높은 억제활성을 나타내었고, 또한 암세포의 생육활성에 대한 정상 세포의 세포독성의 비로 나타낸 선택적 사멸도는 고농도에서는 모두 1.5이상으로 나타나 모두 암세포에 대한 선택성이 있는 것으로 나타났다. Bcl-2 단백질 정량을 통한 항암활성 실험에서는, IOD 값이 수피, 목부, 잎 순으로 각각 72, 186, 200의 결과를 나타내었다. 본 실험 결과를 통하여 때죽나무의 기능성 소재로서의 가능성을 엿볼 수 있었고, 유용성분 분리와 생리활성에 대한 연구가 보다 다각적으로 이루어져야 할 것으로 생각된다.
B cell과 T cell을 이용한 면역세포의 생육 촉진 실험에서, B${\cdot}$T cell은 배양 6일째 수피 추출물이 각각 $4.2{\times}10^4$cells/ml, $5.0{\times}10^4$cells/ml로 가장 높은 세포농도를 나타냈다. 면역세포를 이용한 cytokine의 분비량 측정실험에서는 수피추출물이 배양 시간에 따른 cytokine의 분비가 가장 높게 나타나는 것을 확인할 수 있었다. 각 세포의 TNF-${\alpha}$의 분비량은 6일째 최고의 분비량을 나타내었고, 수피 추출물의 경우 대조군에 비해 7-8배 가량 더 높은 분비량을 나타낸 것을 확인하였다. IL-6의 경우 6일째 최고의 분비량을 나타내었고, 수피 추출물에서 가장 높은 분비량을 나타내었다. 또한 때죽나무 추출물을 첨가한 배지에 의한 NK cell의 면역활성을 측정하였으며, 모든 추출물에서 배양시간에 따라 유의적으로 증가하는 것을 확인하였다. 그 중 때죽나무 수피 추출물에서 B cell의 경우 $14.1{\times}10^4$cells/ml, T cell의 경우 $15.3{\times}10^4$cells/ml 으로 가장 높은 생육 활성을 나타내었다. 인간 정상 신장세포인 HEK293을 이용한 세포 독성을 살펴본 결과, 각 추출물은 1.0mg/ml의 농도에서 최고 27.4%의 세포독성을 나타내었다. 또한 항암활성 효과를 살펴보기 위하여 2가지의 암세포를 이용하였는데, AGS와 MCF-7에서 뿌리추출물의 경우 1.0mg/ml의 농도에서 65정도의 높은 억제활성을 나타내었고, 또한 암세포의 생육활성에 대한 정상 세포의 세포독성의 비로 나타낸 선택적 사멸도는 고농도에서는 모두 1.5이상으로 나타나 모두 암세포에 대한 선택성이 있는 것으로 나타났다. Bcl-2 단백질 정량을 통한 항암활성 실험에서는, IOD 값이 수피, 목부, 잎 순으로 각각 72, 186, 200의 결과를 나타내었다. 본 실험 결과를 통하여 때죽나무의 기능성 소재로서의 가능성을 엿볼 수 있었고, 유용성분 분리와 생리활성에 대한 연구가 보다 다각적으로 이루어져야 할 것으로 생각된다.
This study was performed to anticancer activities and immune modulatary activities according to the parts of the S. japonica Sieb. et Zucc. The cytotoxicity on human kidney cell (HEK 293) was showed below 27.4% in adding the methanol extracts. The anticancer activity were increased in over 60% by ba...
This study was performed to anticancer activities and immune modulatary activities according to the parts of the S. japonica Sieb. et Zucc. The cytotoxicity on human kidney cell (HEK 293) was showed below 27.4% in adding the methanol extracts. The anticancer activity were increased in over 60% by barks extracts in AGS and MCF-7 cells. The immune cell growth using human immune B and T cells was improved by the barks extracts of S. japonica Sieb. et Zucc. in adding 1.0mg/ml concentration. The secretion of the IL-6 and TNF-${\alpha}$ from human immune B and T cells was showed secretion for the amount of cytokines by bark extracts of S. japonica Sieb. et Zucc. NK cell growth was increased against control all of the extracts of S. japonica Sieb. et Zucc. Densitometric analysis of Bcl-2 revealed that possible to decrease potentialities of taking cancer in adding of extracts from S. japonica Sieb. et Zucc. From the results, the roots and barks extracts of S. japonica Sieb. et Zucc. were showed useful biological activities.
This study was performed to anticancer activities and immune modulatary activities according to the parts of the S. japonica Sieb. et Zucc. The cytotoxicity on human kidney cell (HEK 293) was showed below 27.4% in adding the methanol extracts. The anticancer activity were increased in over 60% by barks extracts in AGS and MCF-7 cells. The immune cell growth using human immune B and T cells was improved by the barks extracts of S. japonica Sieb. et Zucc. in adding 1.0mg/ml concentration. The secretion of the IL-6 and TNF-${\alpha}$ from human immune B and T cells was showed secretion for the amount of cytokines by bark extracts of S. japonica Sieb. et Zucc. NK cell growth was increased against control all of the extracts of S. japonica Sieb. et Zucc. Densitometric analysis of Bcl-2 revealed that possible to decrease potentialities of taking cancer in adding of extracts from S. japonica Sieb. et Zucc. From the results, the roots and barks extracts of S. japonica Sieb. et Zucc. were showed useful biological activities.
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문제 정의
따라서 본 연구에서는 종양발생과 관련된 bcl-2 단백질 정량 및 면역세포의 생육도 측정, cytokine, NK cell 등의 면역활성 측정을 통하여 때죽나무가 가지는 기능성 식품소재로 서의 가능성을 평가하기 위해, 때죽나무 부위별로 항암 및 면역 활성 탐색을 실시하였다.
제안 방법
1×106cells/ml 정도의 세포를 사용하여 cytochrome c의 western blotting을 위한 세포질성 단백질을 분리하였다. 일단 플라스크에 있는 배지를 제거하고 cold PBS를 첨가한 후 scraper로 세포를 수집하였다.
Cytokinee IL-6와 TNF-α의 정량을 Chemicon (USA)사의 IL-6와 TNF-α 정량 kit를 사용하여 측정하였다. 세포의 농도를 1~2×104cells/㎖의 농도로 조절한 후 24 well plate에 900μℓ씩 첨가하여 24시간 동안 배양 (37℃, 5% CO2)시킨 후 시료의 최종농도를 0.
전기영동이 끝난 gel을 분리하여 western blotting 장치에 설치한 후 여기에 transter buffer!- 채우고, 50 V로 2시간 전이 하고 membrane을 분리하여 30분간 blocking solution으로 blocking한 후 BclXL 혹은 Mcl-1에 대한 1차 항체를 첨가하여 1시간 동안 반응시켰다. Membrane을 blocking solution으 로 잘 soaking 한 후 여기에 horseradish peroxidase 또는 alkaline phosphataserk 중합되어 있는 anti-mouse immunoglobulin G 항체 또는 anti-rabbit immunogolbulin G 항체를 첨가하여 30분간 반응시켰다. 위에서와 같이 PBS, PBST를 바꾸어 가면서 membrano을 세척한 다음 membrane에 ECL 발색 시약을 첨가하여 반응시킨 후 X서 필름에 적정 시간 동안 노출 시켰다.
NK cell의 활성 측정은 B cell과 T cell 추출물을 첨가한 후 그의 배양액을 NK cell에 첨가함에 따른 생육도의 변화를 첨가하지 않은 control과 비교하여 활성을 측정하였다. Fig.
인간 T세포와 B세포를 T-25 flask에 배양하면서 sample을 투여한 후 증식정도를 관찰하면서 3~4번의 계대 배양 후 세포를 원심분리하여 상층액을 취하였다. NK-92MI cell을 24 well plate에 4~5xl04 celL/mC 로 900μℓ씩 분주하고 24시간 후 T세포와 B세포의 상층액을 각 plate에 100μℓ 씩 투여하여 배양 48시간 후 6일 동안 NK-92MI cell의 활성도를 cell counter를 이용하여 생세포수를 측정하여 NK-92MI cell의 활성도를 측정한다(Ylieran et al., 2003; Limdbolum, 2002).
Selectivity 측정은 SRB assay를 이용하여 정상세포(HEK293)에 대한 각 sample 농도에서 세포독성을 측정하고, SRB assay를 이용하여 각 암세포주의 생육 억제 활성을 측정한 후각 농도에서의 세포 독성에 대한 암세포 생육 억제 활성의 비로 selectivity를 계산한다.
, 2005)를 통해 면역활성의 증진은 항암활성점 증가에 영향을 미칠 것으로 보인다. 따라서 SRB assay와 Bcl-2 단백질 발현량 실험을 통하여 항암 활성 측정하였다.
면역 기능 증강 효과는 면역 세포인 T cell (Jurkat)과 B cell (Ragi)을 이용하여 검증하였다. 세포의 생육은 10% FBS를 함유하는 RPMI 1640 배지에서 5% CO2, 37℃에서 배양 하였으며, 면역 기능 증강 효과는 24 well plate에 세포를 l.
5mg/㎖로 100μℓ씩 첨가하여 다시 배양 (37℃, 5% CO2) 하였다. 배양배지를 원심분리기를 이용하여 상층액을 취한 다음 450nm에서 microplate reader를 이용하여 흡광도를 측정을 통해 얻어진 O.D값을 표준물질을 이용해 작성한 표준곡선과 비교하여 cytokine의 양을 측정하였 다 (오, 1991; Han et al., 1998).
Omg/mC로 100μℓ씩 첨가하여 48시간 배양하였다. 배양이 완료된 후에 상등액을 제거하고 차가운 10% (w/v) TCA (trichloroacetic acid) 100μℓ를 가하여 4℃에서 1시간 동안 방치한 후 증류수로 5회 세척하여 TCA를 제거하고 실온에서 plate를 건조한 뒤 각 well에 1% (v/v) acetic acid에 녹인 0.4% (w/v) SRB용액을 100μℓ씩 첨가하고 상온에서 30분 동안 염색시켰다. 결합되지 않은 SRB 염색액은 1% acetic acid로 4-5회 정도 세척, 건조 시킨 후에 10mM Tris buffer 100μℓ를 첨가하여 염색액을 녹여낸 후 540nm에서 microplate reader (Molecular Devices, THERMO max, USA)를 이용하여 흡광도를 측정하였다.
SRB (sulforhodamine B) assay (Doll & Peto, 1981)는 세포 단백질을 염색하여 세포의 증식이나 독성을 측정하는 방법으로 실험에 사용된 세포주로는 인간 정상 신장 세포인 HEK293을 이용하여 세포독성을 측정하였고, 인간 폐암 세포인 A549와 인간 유방암 세포인 MCF-7을 이용하여 항암활성을 측정하였다. 실험 대상 세포의 농도를 4~5×104cells/㎖으로 96 well plate의 각 well에 100μℓ씩 첨가하여 24시간 동안 배양(37℃ 5% CO, 한 후, 각각의 시료를 최종농도 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 그리고 l.Omg/mC로 100μℓ씩 첨가하여 48시간 배양하였다.
실험에 사용된 sample 농도는 각각 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 그리고 LOmg/mC 로 조절하여 정상세포에 대한 세포독성과 각 암세포에 대한 성장 효과를 검토하였다. Fig.
면역세포 생육 증진 효과에 이용된 면역세포로는 T cell (Jurkat, ATTC, USA)와 B cell (Raji, ATTC, USA)을 실험에 사용하였고, NK cell 활성 측정에 이용된 세포는 NK-cell (NK-92MI cell, ATTC, USA)을 사용하였다. 실험에 사용된 암세포와 정싱세포, 면역세포는 RPMI 1640 배지에 10% heating-inactivated FBS를 첨가시켜 배양하였고, NKycIIe a-MEM배지에 2mM L-glutamine, 02 mM myoinositol, 20 mM folic acid, 2-mercaptoethanol, 12.5% fetal bovine serum (FBS)와 12.5% horse serum (Myelocult)을 첨가시켜 배양하였다.
인간 T세포와 B세포를 T-25 flask에 배양하면서 sample을 투여한 후 증식정도를 관찰하면서 3~4번의 계대 배양 후 세포를 원심분리하여 상층액을 취하였다. NK-92MI cell을 24 well plate에 4~5xl04 celL/mC 로 900μℓ씩 분주하고 24시간 후 T세포와 B세포의 상층액을 각 plate에 100μℓ 씩 투여하여 배양 48시간 후 6일 동안 NK-92MI cell의 활성도를 cell counter를 이용하여 생세포수를 측정하여 NK-92MI cell의 활성도를 측정한다(Ylieran et al.
인간의 면역체계에서 중요한 역할을 하는 면역세포인 B세포와 T세포에 대하여 면역증진 효과를 확인하기 위하여 면역 세포의 생육 촉진 효과를 생육도를 통하여 측정하였다. B-cell 생육도의 경우 시료 투여 후 전체적으로 6일까지 최고로 증가하였다.
cells/ml 정도의 세포를 사용하여 cytochrome c의 western blotting을 위한 세포질성 단백질을 분리하였다. 일단 플라스크에 있는 배지를 제거하고 cold PBS를 첨가한 후 scraper로 세포를 수집하였다. 10초간 원침하여 상등액을 버린 후 400μℓ의 cold bufier A (10 mM Hepes-KOH[pH7.
NK-92MI cell을 a-MEM배지에 2mM L.잉Uamine, 0.2 mM myoinositol, 20 mM folic acid, 1 OeW-mercaptomethanol, 12.5% fetal bovine serum (FBS)와 12.5% horse serum (Myelocult)에 2×107cells/㎖의 농도로 희석시켜 이용하였다.
대상 데이터
때죽나무 수피, 목부, 잎을 2006년 5월에 채취하였으며, 이것을 이용하여 MeOH (methanol)로 사용하였다. 재료를 실온에서 음건 시킨 후 분쇄기로 분말화하여 MeOH를 이용하여 실온에서 72시간 동안 침적시켜 추출하였으며, 이 조작을 3회 반복하여 얻어진 추출물을 실험에 이용하였다.
실험에 이용된 세포주는 암세포로 인간 폐암세포인 AGS (stomach adenocarcinoma, human, ATTC, USA), 인간 유방 암세포인 MCF-7 (breast adenocarcinoma, human, ATTC, USA)를 사용하였고, 시료 자체의 세포 독성과 bcl-2의 단백질 발현량을 알아보기 위한 정상세포로는 인간 정상 신장세포인 HEK 293 (Human Embryonic Kidney, ATTC, USA)를 사용하였다. 면역세포 생육 증진 효과에 이용된 면역세포로는 T cell (Jurkat, ATTC, USA)와 B cell (Raji, ATTC, USA)을 실험에 사용하였고, NK cell 활성 측정에 이용된 세포는 NK-cell (NK-92MI cell, ATTC, USA)을 사용하였다. 실험에 사용된 암세포와 정싱세포, 면역세포는 RPMI 1640 배지에 10% heating-inactivated FBS를 첨가시켜 배양하였고, NKycIIe a-MEM배지에 2mM L-glutamine, 02 mM myoinositol, 20 mM folic acid, 2-mercaptoethanol, 12.
세포배양에 필요한 배지로 RPMI 1640과 Alpha minimum essential medium (a-MEM)은 Gibco (USA)로부터 구입하였고, Hepes buffer는 Sigma (USA)에서 구입하였다. 혈청은 Gibco (USA)사의 fetal bovine serum과 horse serum을 이용하였고 gentamycin sulfate, trysin-EDTA는 Sigma사의 것을 사용하였다.
실험에 이용된 세포주는 암세포로 인간 폐암세포인 AGS (stomach adenocarcinoma, human, ATTC, USA), 인간 유방 암세포인 MCF-7 (breast adenocarcinoma, human, ATTC, USA)를 사용하였고, 시료 자체의 세포 독성과 bcl-2의 단백질 발현량을 알아보기 위한 정상세포로는 인간 정상 신장세포인 HEK 293 (Human Embryonic Kidney, ATTC, USA)를 사용하였다. 면역세포 생육 증진 효과에 이용된 면역세포로는 T cell (Jurkat, ATTC, USA)와 B cell (Raji, ATTC, USA)을 실험에 사용하였고, NK cell 활성 측정에 이용된 세포는 NK-cell (NK-92MI cell, ATTC, USA)을 사용하였다.
세포배양에 필요한 배지로 RPMI 1640과 Alpha minimum essential medium (a-MEM)은 Gibco (USA)로부터 구입하였고, Hepes buffer는 Sigma (USA)에서 구입하였다. 혈청은 Gibco (USA)사의 fetal bovine serum과 horse serum을 이용하였고 gentamycin sulfate, trysin-EDTA는 Sigma사의 것을 사용하였다.
이론/모형
0xl04 cells/㎖ 의 농도로 조절한 후 시료를 투여하여 8일 동안 배양하면서 매일매일 각 well의 cell을 hemacytometers. 세포 수를 측정하여 생육 증강도를 측정하는 방법을 사용하였다 (Lee et al., 2002).
성능/효과
3은 B cell에 각 시료를 첨가하여 배양 후 그 배양액을 NK cell에 첨가하였을 때 NK cell의 활성도를 타나낸 그림이다. 6일 동안 생육도를 관찰하였는데 모든 시료에 대한 생육도가 증가하는 것을 확인하였고, 가장 좋은 활성을 나타낸 것은 수피로 5일째 14.1x104cells/㎖를 나타내어 9.5xl04cells/㎖를 나타낸 대조군에 비해 1.67배 정도의 활성을 나타낸 것을 확인하였다. 그 외에도 목부가13.
5는 인간 신장 세포 HEK293에 대한 세포 독성을 나타낸 것으로 sample과 표준물질 모두 최고 농도인 l.Omg/mC 에서 SL이 가장 높은 27.4%로 가장 높은 세포 독성을 나타내었고, SB가 가장 낮은 세포독성인 22.3%의 낮은 세포독성을 나타내었다.
면역세포를 이용한 cytokine의 분비량 측정실험에서는 수피 추출물이 배양 시간에 따른 cytokine의 분비가 가장 높게 나타나는 것을 확인할 수 있었다. 각 세포의 TNF-α의 분비량은 6일째 최고의 분비량을 나타내었고, 수피 추출물의 경우 대조군에 비해 7-8배 가량 더 높은 분비량을 나타낸 것을 확인하였다. IL-6의 경우 6일째 최고의 분비량을 나타내었고, 수피 추출물에서 가장 높은 분비량을 나타내었다.
각 시료에 대한 세포 당 IL-6와 TNF-α의 분비량을 살펴보면, 때죽나무의 수피에서 B cell이 각각 6일째 1.28x10^ pg/ cell, 1.38x10-4pg/cell로 가장 많은 분비량을 나타내었다.
각 시료에 대한 세포당 IL-6와 TNF-α의 분비량을 살펴보면, 때죽나무의 수피에서 B cell과 마찬가지로 가장 많은 분비량을 나타내었다. IL-6와 TNF-α의 분비량은 각각 6일째1.
B-cell 생육도의 경우 시료 투여 후 전체적으로 6일까지 최고로 증가하였다. 그 중 가장 높은 활성을 나타낸 조추출물인 SB의 경우 6일에 4.2xl04cells/M으로 시료를 첨가하지 않은 대조구의 3.1 X 104cells/me 보다 대략 25% 정도 B-cell의 생육을 더 증가시키는 것으로 나타났다(Fig. 1).
이것도 B cell과 같이 5일까지 모든 시료에 대하여 계속적으로 NK cell의 생육도가 증가하는 것은 확인할 수가 있었다. 그 중 가장 좋은 활성을 나타낸 것을 수피로서 15.3xl04cells/㎖를 나타내어 9.8xl04cells/㎖를 나타낸 대조군과 비교하여 1.67배 정도의 활성을 나타내었다. 이것은 앞에서 살펴본 면역세포의 증식에서와.
3 x l04cells/㎖보다 34% 정도 T-cell의 생육을 더 증가시키는 것으로 나타났다. 그리고 대부분의 다른 부위 추출물에서 대조구에 비해 생육도가 증가하는 것을 확인할 수 있었다 (Fig. 2).
따라서 결과를 통하여 각각의 IOD 값을 비교해보면, 수피, 목부, 잎 순으로 각각 72, 186, 200의 결과를 나타내었다. 이는 때죽나무의 수피 추출물에서 가장 낮은 bcl-2 발현은 인간 정상세포에서 암세포로의 변이의 확률은 낮추어 암 발생율을 억제할 것으로 추정할 수 있다.
때죽나무 추출물의 농도와 배양일에 따른 cell의 농도증가 와 cytokine 분비량의 증가를 통하여 때죽나무 주줄물이 면역 활성과 관련하여 활용 가능성이 있음을 확인할 수 있었다.
IL-6의 경우 6일째 최고의 분비량을 나타내었고, 수피 추출물에서 가장 높은 분비량을 나타내었다. 또한 때죽나무 추출물을 첨가한 배지에 의한 NK cell의 면역활성을 측정하였으며, 모든 추출물에서 배양 시간에 따라 유의적으로 증가하는 것을 확인하였다. 그 중 때죽나무 수피 추출물에서 B cell의 경우 14.
4%의 세포독성을 나타내었다. 또한 항암활성 효과를 살펴보기 위하여 2가지의 암세포를 이용하였는데, AGS와 MCF-7에서 뿌리 추출물의 경우 l.0mg/㎖의 농도에서 65%정도의 높은 억제활 성을 나타내었고, 또한 암세포의 생육활성에 대한 정상 세포의 세포독성의 비로 나타낸 선택적 사멸도는 고농도에서는 모두 1.5이상으로 나타나 모두 암세포에 대한 선택성이 있는 것으로 나타났다.
면역세포를 이용한 cytokine의 분비량 측정실험에서는 수피 추출물이 배양 시간에 따른 cytokine의 분비가 가장 높게 나타나는 것을 확인할 수 있었다. 각 세포의 TNF-α의 분비량은 6일째 최고의 분비량을 나타내었고, 수피 추출물의 경우 대조군에 비해 7-8배 가량 더 높은 분비량을 나타낸 것을 확인하였다.
억제활성의 경우 대부분의 시료에서 농도 의존적으로 증가하였고, 수피에서 가장 높은 항암 효과를 나타내었다. 선택적 사멸도는 모든 추출물에서 1~3사이로 나타났고, SB의 l.0mg/㎖에서 2.95로 암세포에 대한 가장 높은 선택적 사멸도를 나타내었다.
6는 인간간암세포인 AGS에 대한 생육억제 활성 및 선택적 사멸도를 나타낸 것이다. 억제활성의 경우 대부분의 시료에서 농도 의존적으로 증가하는 것으로 나타났으며, 수피가 가장 높은 항암 효과를 나타내었다. 선택적 사멸도는 모든 추출물에서 1~3사이로 나타났고, SB의 l.
7은 유방암 세포인 MCF-7에 대한 생육억제 활성 및 선택적 사멸도를 나타낸 것이다. 억제활성의 경우 대부분의 시료에서 농도 의존적으로 증가하였고, 수피에서 가장 높은 항암 효과를 나타내었다. 선택적 사멸도는 모든 추출물에서 1~3사이로 나타났고, SB의 l.
5는 T cell에 각 시료를 첨가하여 배양 후 그 배양액을 NK cell에 첨가하였을 때 NK cell의 활성도를 타나낸 그림이다. 이것도 B cell과 같이 5일까지 모든 시료에 대하여 계속적으로 NK cell의 생육도가 증가하는 것은 확인할 수가 있었다. 그 중 가장 좋은 활성을 나타낸 것을 수피로서 15.
인간 정상 신장세포인 HEK293을 이용한 세포 독성을 살펴 본 결과, 각 추출물은 l.0mg/㎖의 농도에서 최고 27.4%의 세포독성을 나타내었다. 또한 항암활성 효과를 살펴보기 위하여 2가지의 암세포를 이용하였는데, AGS와 MCF-7에서 뿌리 추출물의 경우 l.
T-cell 생육도의 경우 B-cell 생육도와 유사한 모습을 보여 주었다. 최대 생육도를 나타내는 6일째 수피의 생육도는 5.0xl04cells/㎖로 대조구의 3.3 x l04cells/㎖보다 34% 정도 T-cell의 생육을 더 증가시키는 것으로 나타났다. 그리고 대부분의 다른 부위 추출물에서 대조구에 비해 생육도가 증가하는 것을 확인할 수 있었다 (Fig.
후속연구
또한 실험을 통하여 얻어진 결과로 인하여 면역과 항암활 성의 향상을 가져오는 부위를 탐색하여 그 부위에서 단리된 유용 성분에 대한 연구가 이루어져야 할 것이고, 생리활성에 대한 연구가 보다 다각적으로 이루어져야 할 것으로 사료되는 바이다.
본 실험결과를 통하여 때죽나무의 기능성 소재로서의 가능성을 엿볼 수 있었고, 유용성분 분리와 생리활성에 대한 연구가 보다 다각적으로 이루어져야 할 것으로 생각된다.
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