연구배경: 급성호흡곤란증후군의 병인론에 관여하는 PAF의 역할이 다양하고 중요하므로 본 연구에서는 PAF의 또 다른 작용의 가능성, 즉 $cPLA_2$의 활성화(retrograde activation of $cPLA_2$ by PAF)의 가능성을 검사하고자 하였다. 즉, $cPLA_2$의 활성화에 따른 염증성 지질분자의 생성이 산소기의 생성과정을 증폭시키고 이 때 생성된 PAF가 역으로 $cPLA_2$를 활성화시키는지를 확인하기 위하여 본 연구는 고안되었다. 방 법: 흰쥐에서 급성폐손상을 유도하기 위하여 $5{\mu}g$의 PAF를 0.5 ml의 0.25% bovine serum albumin 용액과 혼합한 뒤 기도 내로 직접 분무하거나 0.5 ml의 4.5 mM의 과산화수소를 기도 내로 분무하였다. 대조군의 경우는 0.5 ml의 생리적 식염수를 기도 내로 분무하였다. 5 시간 후에 단백누출지수 측정, 폐장의 MPO 활성도 측정, 폐포 세척액 내의 호중구 산정, CINC 측정, NBT 및 cytochrome-c 환원검사를 시행하였다. 또한 폐장 및 호중구에 서의 $cPLA_2$ 활성도의 측정 및 광학현미경과 전자현미경을 이용하여 형태학적 관찰을 시행하였다. 결 과: PAF투여 후 단백누출지수, MPO, BAL내의 호중 구의 수 및 CINC의 농도가 대조군에 비하여 유의하게 증가하였다. NBT및 cytochrome-c환원검사의 결과 PAF는 호중구의 respiratory burst를 현저히 증가시키고, 분리된 사람의 호중구에서도 산소기의 생성을 현저히 증가시켰 다. 동시에 PAF는 분리된 호중구 및 폐장의 $cPLA_2$의 활성도도 증가 시켰다. 폐장 내로 투여한 과산화수소는 폐장의 $cPLA_2$활성도를 대조군에 비하여 현저히 증가시켰다. 결 론: $cPLA_2$의 활성화에 따라 생성된 PAF는 호중구의 산소기 생성을 증가시켜 폐장 내의 산화성스트레스를 유발하고 동시에 이때 생성된 산화기는 $cPLA_2$를 활성화시키며 PAF 또한 $cPLA_2$의 활성도를 증가시켜 PAF가 급성호흡 곤란증후군의 병인론에 관여하는 것으로 생각된다.
연구배경: 급성호흡곤란증후군의 병인론에 관여하는 PAF의 역할이 다양하고 중요하므로 본 연구에서는 PAF의 또 다른 작용의 가능성, 즉 $cPLA_2$의 활성화(retrograde activation of $cPLA_2$ by PAF)의 가능성을 검사하고자 하였다. 즉, $cPLA_2$의 활성화에 따른 염증성 지질분자의 생성이 산소기의 생성과정을 증폭시키고 이 때 생성된 PAF가 역으로 $cPLA_2$를 활성화시키는지를 확인하기 위하여 본 연구는 고안되었다. 방 법: 흰쥐에서 급성폐손상을 유도하기 위하여 $5{\mu}g$의 PAF를 0.5 ml의 0.25% bovine serum albumin 용액과 혼합한 뒤 기도 내로 직접 분무하거나 0.5 ml의 4.5 mM의 과산화수소를 기도 내로 분무하였다. 대조군의 경우는 0.5 ml의 생리적 식염수를 기도 내로 분무하였다. 5 시간 후에 단백누출지수 측정, 폐장의 MPO 활성도 측정, 폐포 세척액 내의 호중구 산정, CINC 측정, NBT 및 cytochrome-c 환원검사를 시행하였다. 또한 폐장 및 호중구에 서의 $cPLA_2$ 활성도의 측정 및 광학현미경과 전자현미경을 이용하여 형태학적 관찰을 시행하였다. 결 과: PAF투여 후 단백누출지수, MPO, BAL내의 호중 구의 수 및 CINC의 농도가 대조군에 비하여 유의하게 증가하였다. NBT및 cytochrome-c환원검사의 결과 PAF는 호중구의 respiratory burst를 현저히 증가시키고, 분리된 사람의 호중구에서도 산소기의 생성을 현저히 증가시켰 다. 동시에 PAF는 분리된 호중구 및 폐장의 $cPLA_2$의 활성도도 증가 시켰다. 폐장 내로 투여한 과산화수소는 폐장의 $cPLA_2$활성도를 대조군에 비하여 현저히 증가시켰다. 결 론: $cPLA_2$의 활성화에 따라 생성된 PAF는 호중구의 산소기 생성을 증가시켜 폐장 내의 산화성스트레스를 유발하고 동시에 이때 생성된 산화기는 $cPLA_2$를 활성화시키며 PAF 또한 $cPLA_2$의 활성도를 증가시켜 PAF가 급성호흡 곤란증후군의 병인론에 관여하는 것으로 생각된다.
Background: The present investigation was performed in rats and isolated human neutrophils in order to confirm the presumptive role of the positive feedback loop of cytosolic phospholipase $A_2$ ($cPLA_2$) activation by plateletactivating factor (PAF). Methods: The possible for...
Background: The present investigation was performed in rats and isolated human neutrophils in order to confirm the presumptive role of the positive feedback loop of cytosolic phospholipase $A_2$ ($cPLA_2$) activation by plateletactivating factor (PAF). Methods: The possible formation of the positive feedback loop of the $cPLA_2$ activation and neutrophilic respiratory burst was investigated in vivo and in vitro by measurement of the parameters denoting acute lung injury. In addition, morphological examinations and electron microscopic cytochemistry were performed for the detection of free radicals in the lung. Results: Five hours after intratracheal instillation of PAF ($5{\mu}g/rat$), the lung leak index, lung myeloperoxidase (MPO) activity, the number of neutrophils and the concentration of cytokine-induced neutrophil chemoattractant (CINC) in bronchoalveolar lavage fluid were increased by PAF as compared with those of control rats. The NBT assay and cytochrome-c reduction assay revealed an increased neutrophilic respiratory burst in isolated human neutrophils following exposure to PAF. Lung and neutrophilic $cPLA_2$ activity were increased following PAF exposure and exposure to hydrogen peroxide increased $cPLA_2$ activity in the lung. Histologically, inflammatory findings of the lung were observed after PAF treatment. Remarkably, as determined by $CeCl_3$ cytochemical electron microscopy, increased production of hydrogen peroxide was identified in the lung after PAF treatment. Conclusion: PAF mediates acute oxidative lung injury by the activation of $cPLA_2$, which may provoke the generation of free radicals in neutrophils.
Background: The present investigation was performed in rats and isolated human neutrophils in order to confirm the presumptive role of the positive feedback loop of cytosolic phospholipase $A_2$ ($cPLA_2$) activation by plateletactivating factor (PAF). Methods: The possible formation of the positive feedback loop of the $cPLA_2$ activation and neutrophilic respiratory burst was investigated in vivo and in vitro by measurement of the parameters denoting acute lung injury. In addition, morphological examinations and electron microscopic cytochemistry were performed for the detection of free radicals in the lung. Results: Five hours after intratracheal instillation of PAF ($5{\mu}g/rat$), the lung leak index, lung myeloperoxidase (MPO) activity, the number of neutrophils and the concentration of cytokine-induced neutrophil chemoattractant (CINC) in bronchoalveolar lavage fluid were increased by PAF as compared with those of control rats. The NBT assay and cytochrome-c reduction assay revealed an increased neutrophilic respiratory burst in isolated human neutrophils following exposure to PAF. Lung and neutrophilic $cPLA_2$ activity were increased following PAF exposure and exposure to hydrogen peroxide increased $cPLA_2$ activity in the lung. Histologically, inflammatory findings of the lung were observed after PAF treatment. Remarkably, as determined by $CeCl_3$ cytochemical electron microscopy, increased production of hydrogen peroxide was identified in the lung after PAF treatment. Conclusion: PAF mediates acute oxidative lung injury by the activation of $cPLA_2$, which may provoke the generation of free radicals in neutrophils.
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문제 정의
PAF는 염증성 사이토카인, 내장의 재관류 손상, 폐혈증에 의한 급성호흡곤란증후군 시에 합성이 증가되어 호중구의 기능에 영향을 미친다는 실험적 증거들이 보고되었다10,11. 이렇듯 급성호흡곤란증후군의 병인론에 관여하는 PAF의 역할이 다양하고 중요하므로 본 연구에서는 cPLA2의 활성화에 따른 염증성 지질분자의 생성이 산소기를 생성하고 이때 생성된 PAF가 역으로 cPLA2를 다시 활성화시켜 PAF 생성의 증폭에 따른 산소기 생성의 증가가 조직의 손상을 유발하는지를 규명하고자 하였다.
본 연구는 PAF가 cPLA2를 활성화함으로써 호중구에서의 산소기 생성이 증폭되는 과정을 밝혔다. 이러한 과정에 관여하는 cPLA2의 역할이 좀 더 명확히 밝혀지면 급성호흡곤란증후군의 병태생리학의 기전의 일부를 이해하는데 도움이 될 것으로 생각한다.
연구배경: 급성호흡곤란증후군의 병인론에 관여하는 PAF의 역할이 다양하고 중요하므로 본 연구에서는 PAF의 또 다른 작용의 가능성, 즉 cPLA2의 활성화(retrograde activation of cPLA2 by PAF)의 가능성을 검사하고자 하였다. 즉, cPLA2의 활성화에 따른 염증성 지질분자의 생성이 산소기의 생성과정을 증폭시키고 이 때 생성된 PAF가 역으로 cPLA2를 활성화시키는지를 확인하기 위하여 본 연구는 고안되었다.
by PAF)의 가능성을 검사하고자 하였다. 즉, cPLA2의 활성화에 따른 염증성 지질분자의 생성이 산소기의 생성과정을 증폭시키고 이 때 생성된 PAF가 역으로 cPLA2를 활성화시키는지를 확인하기 위하여 본 연구는 고안되었다.
제안 방법
흰쥐에 PAF로 급성 폐손상을 유도하기 위하여 흰쥐를 아리레인으로 마취시킨 후 5μg PAF를 0.5 ml의 0.25% bovine serum albumin12 용액과 혼합한 뒤 기도 내로 직접 분무하거나 0.5 ml의 4.5 mM의 과산화수소를 기도 내에 분무하였다.
또한 70∼100μl의 세포부유액을 세포침전기를 이용하여 슬라이드를 제작하여 Wright씨 염색을 하고 이 중 호중구의 백분율을 계산한 뒤 호중구의 수를 산출하였다.
PAF 주입 후 4시간 30분 후에 아리레인으로 동물을 마취시킨 후 경정맥을 통하여 1.0μCi의 125I-labelled bovine serum albumin을 주사하였다.
Louis, MO, USA)에서 구입하였다. 실험동물은 체중 300g 내외의 Sprague-Dawley종 수컷 흰쥐를 사용하였고 실험의 특성에 따라 실험동물의 수를 non-paired sampling으로 실험을 고안하였다.
0μCi의 125I-labelled bovine serum albumin을 주사하였다. 30분후 Harvard제 rodent ventilator (U.K)에 연결하여 인공호흡을 시행하는 상태에서 개흉술을 시행하고 우측심방에서 1.0 ml의 혈액을 뽑았다. 그 후 Masterflex perfusion pump (Cole Parmer, USA)를 이용, 생리적 식염수로 폐장을 관류하여 혈액을 제거한 뒤 우측폐장을 적출하였다.
0 ml의 혈액을 뽑았다. 그 후 Masterflex perfusion pump (Cole Parmer, USA)를 이용, 생리적 식염수로 폐장을 관류하여 혈액을 제거한 뒤 우측폐장을 적출하였다. 단백누출지수(lung leak index, LLI)는 폐장의 방사능 활성도/혈액 1.
PAF를 기도 내에 투여 5시간 후에 호중구의 폐포 내 이동을 확인하기 위하여 페포세척액 내의 호중구를 산정하였다. 즉 8.
0 ml의 생리적 식염수로 폐포세척(bronchoalveolar lavage, BAL)을 시행한 후 BAL액을 상온, 1,500 rpm에서 원심분리를 시행하였다. 그 후 상등액을 분리하고, 침전층에 0.1 ml의 생리적 식염수를 가해 재부유 시킨 후 혈구계수기를 이용하여 백혈구의 수를 세었다. 또한 70∼100μl의 세포부유액을 세포침전기를 이용하여 슬라이드를 제작하여 Wright씨 염색을 하고 이 중 호중구의 백분율을 계산한 뒤 호중구의 수를 산출하였다.
PAF는 5μg을, 과산화수소는 4.0 mM, 0.5 ml를 기도 내로 직접 분무하고 5시간 경과 후 실험동물을 아리레인으로 마취한 뒤 Masterflex perfusion pump (Cole Parmer, USA)를 이용하여 생리적 식염수로 폐장을 관류하여 혈액을 제거한 후 분석에 사용하였다.
포매된 조직을 37℃에서 12시간, 60℃에서 24시간 동안 열중합시키고 60∼70 nm로 아주 얇은 절편을 만든뒤 uranyl acetate 와 lead citrate로 염색한 뒤 투과전자현 미경(9H-600, Hitachi, Japan)으로 관찰하였다.
1) 광학현미경을 이용한 관찰: PAF가 폐장의 형태학적인 변화를 일으키는 것을 관찰하기 위하여 PAF 5μg을 기도 내로 투여 5시간 후 폐장을 절제한 뒤 10% 중성 포르말린 용액에 고정하였다.
분리된 유리지방산 용액은 1.0 ml 의 hexane 용액과 3.0 ml의 scintillation cocktail을 혼합 후 β-scintillation spectrophotometry를 시행하였다.
PAF가 호중구의 cPLA2의 활성도에 미치는 영향을 알아보기 위하여 Haslett 등16의 방법에 따라 사람의 혈액으로 부터 호중구를 분리하여 각 시험관 당 2×106개의 호중구를 나눠담고 10 nmol의 PAF를 가하였다.
폐장을 갈 때(homogenization)에는 Tris- base완충용액(0.1% Triton X-100, 0.15 mM KCl, 10 mM Tris base, 10 mM EDTA-pH7.4, 1 mM DTT, 50μg/ml PMSF, 3μg/ml leupeptin)을 사용하여 분비형 PLA2를 억제하였다.
그 후 1,500 rpm, 상온에서 8분간 원심분리 후 침전층을 세포침전기를 이용하여 슬라이드를 제작 후 Wright씨 방법으로 염색하였다. 그 후 광학현미경을 이용하여 검경하여 formazan 양성의 호중구의 백분율을 산정하였다.
개의 호중구를 나눠담고 10 nmol의 PAF를 가하였다. 그 후 15분간 37℃의 항온수조에서 반응시킨 후 40,000 g에서 3분간 원심분리하여 호중구를 분리하고 여기에 sPLA2를 억제하기 위하여 0.1 ml의 0.2 mM DTT가 함유된 0.25 M sucrose 용액에 재부유 시킨 후 4℃에서 10초간 초음파처리 하여 호중구의 lysate를 분리하였다.
2) 전자현미경을 이용한 관찰: 폐장의 미세구조적 변화를 관찰하기 위하여 폐장조직을 2.5% glutaraldehyde로 고정하고 밀폐된 용기에 공기를 주입하여 양압을 유도하여 조직 내 공기를 제거하였다. 전고정이 끝난 조직은 1.
방 법: 흰쥐에서 급성폐손상을 유도하기 위하여 5μg의 PAF를 0.5 ml의 0.25% bovine serum albumin 용액과 혼합한 뒤 기도 내로 직접 분무하거나 0.5 ml의 4.5 mM의 과산화수소를 기도 내로 분무하였다.
5 시간 후에 단백누출지수 측정, 폐장의 MPO 활성도 측정, 폐포 세척액 내의 호중구 산정, CINC 측정, NBT 및 cytochrome-c 환원검사를 시행하였다. 또한 폐장 및 호중구에서의 cPLA2 활성도의 측정 및 광학현미경과 전자현미경을 이용하여 형태학적 관찰을 시행하였다.
5 ml의 생리적 식염수를 기도 내로 분무하였다. 5 시간 후에 단백누출지수 측정, 폐장의 MPO 활성도 측정, 폐포 세척액 내의 호중구 산정, CINC 측정, NBT 및 cytochrome-c 환원검사를 시행하였다. 또한 폐장 및 호중구에서의 cPLA2 활성도의 측정 및 광학현미경과 전자현미경을 이용하여 형태학적 관찰을 시행하였다.
대상 데이터
아리레인Ⓡ (enflurane)은 일성신약주식회사, cPLA2의 활성도 검사를 위해 사용한 palmitoyl-2(9,10(N)-3H palmitoyl)-phosphatidylcholine (3H-DPPC)은 NEN life science products (Boston, MA, USA)에서 구입하였고, 125I-labelled bovine serum albumin은 ICN radiochemical (Irvine, CA, USA)에서 구입하였다. 그 외의 모든 시약은 Sigma chemical company (St.
I-labelled bovine serum albumin은 ICN radiochemical (Irvine, CA, USA)에서 구입하였다. 그 외의 모든 시약은 Sigma chemical company (St. Louis, MO, USA)에서 구입하였다. 실험동물은 체중 300g 내외의 Sprague-Dawley종 수컷 흰쥐를 사용하였고 실험의 특성에 따라 실험동물의 수를 non-paired sampling으로 실험을 고안하였다.
데이터처리
유의성의 검정은 non-paired, two-tailed Student's t-test를 이용하였고 p＜0.05를 유의하다고 인정하였다.
모든 성적은 평균±표준오차로 나타내었다.
이론/모형
PAF 투여 5시간 후 폐장 내 호중구의 침윤을 확인하기 위하여 Goldblum 등13의 방법에 따라 MPO의 활성도를 측정하였다.
폐포세척액 내의 CINC의 농도는 Wittwer 등14의 방법에 따라 Sandwitch ELISA를 이용하여 정량하였다.
PAF를 기도 내 투여 5시간 후 폐장 내 호중구의 respiratory burst를 확인하기 위하여 NBT 검사15를 시행하였다. 폐포세척을 통해 얻은 폐포세척액을 원심분리한 후 상등액을 제거하고 침전층에 NBT용액 및 세균추출물을 혼합한 뒤 37℃의 항온수조에서 15분간 반응시켰다.
폐포세척을 통해 얻은 폐포세척액을 원심분리한 후 상등액을 제거하고 침전층에 NBT용액 및 세균추출물을 혼합한 뒤 37℃의 항온수조에서 15분간 반응시켰다. 그 후 1,500 rpm, 상온에서 8분간 원심분리 후 침전층을 세포침전기를 이용하여 슬라이드를 제작 후 Wright씨 방법으로 염색하였다. 그 후 광학현미경을 이용하여 검경하여 formazan 양성의 호중구의 백분율을 산정하였다.
호중구에서의 산소기 생성에 미치는 PAF의 영향을 알아보기 위하여 Haslett 등16의 방법에 따라 사람의 혈액으로부터 호중구를 분리하고 Botha 등17의 방법에 따라 cytochrome-c 환원검사를 시행하였다.
PAF 및 과산화수소가 폐장의 cPLA2의 활성도에 미치는 영향을 알아보기 위하여 Katsumata 등18의 방법에 따라 cPLA2의 활성도를 측정하였다. PAF는 5μg을, 과산화수소는 4.
3) Cerium chloride를 이용한 세포화학적 전자현미경법을 이용한 폐장 내 산소기의 관찰: PAF 투여 후 폐장 내 과산화수소의 생성을 검사하기 위하여 Hobson 등19의 방법에 따라 CeCl3 cytochemical electron microscopy를 시행하였다.
성능/효과
폐장에 침윤한 호중구에서의 산소기 생성을 간접적으로 알아보기 위해 시행한 NBT검사의 결과 formazan이 호중구의 세포질 내에서 관찰되는 백분율(%)은 대조군의 경우 3.5±1.1이었으나 PAF를 투여한 군에서는 39.8±5.3으로 유의하게 증가하여(p＜0.001) PAF에 의해 폐장 내에 호중구의 침윤이 일어났을 뿐만 아니라 respiratory burst에 따른 산소기의 생성이 현저히 증가함을 알 수 있었다(Table 2).
PAF 투여 후 폐장 내의 PLA2의 활성도(U/g of wet lung)는 대조군의 6.58±0.24에 비해 10.95±0.82 현저히 증가하였다(p＜0.001)(Table 3).
폐장 내 산소기의 형성, 그 중에서도 과산화수소의 형성에 따른 PLA2의 활성도의 변화를 알아보기 위해 과산화수소를 기도 내로 투여한 실험의 결과는 대조군의 경우 7.88±0.70이었으나 과산화수소를 투여 후에는 20.93±1.20로 유의하게 증가하였다(p＜0.001)(Table 4).
본 연구에서는 PAF를 기도 내 주입 5시간 후에 폐장 내에 호중구가 현저히 침윤함과 동시에 혈관 내 단백질이 간질 및 폐포강 내로 유출이 증가하여 호중구에 의한 모세혈관의 내피세포가 손상을 입었음을 알 수 있었다. 호중구의 침윤은 조직의 손상을 항상 유발하지는 않으나23 호중구가 어떠한 원인에 의해 자극을 받아 산소기나 단백분해효소를 과량으로 단시간 내에 유리하면 조직의 손상이 유발된다.
본 연구에서는 PAF에 의해 급성 폐부종이 유발됨과 동시에 폐세척액 내의 CINC의 농도가 증가하였다. CINC는 호중구에 대한 강력한 화학주성을 나타내는 일종의 chemokine으로서 interleukin-8에 속하는 물질이다26.
Tamm 등28은 사람의 모세혈관내피세포에서 저산소증이 유발되면 PAF의 매개작용에 의해 CINC의 생성이 일어난다고 보고하고 있다. 이러한 보고들을 근거로 하면 본 연구에서 보이는 폐세척액 내의 CINC농도의 증가는 PAF에 의해 폐장 내 호중구의 침윤이 일어나고 이때 호중구에서, 또는 혈관내피세포에서 CINC의 생성이 증가한 것으로 추정된다. PAF는 호중구의 화학주성을 증가시킴과 동시에 혈관내피세포 및 호중구 자체의 유착분자(adhesion molecules)를 활성화시킴으로써 호중구의 간질조직 및 폐포강 내로 이동을 증가시키는데29 본 연구에서도 PAF의 작용 및 CINC의 작용에 의하여 폐포강 내의 호중구의 수가 증가하였다.
PAF나 CINC의 작용에 의해 간질조직 및 폐포강 내로 이동한 호중구는 respiratory burst를 일으켜 조직의 손상을 유발하였다. 즉 NBT 검사의 결과 PAF를 투여한 흰쥐의 폐장 내 호중구는 산소기를 다량 생성하여 NBT를 formazan으로 환원시켰다. 호중구에 의한 산소기형성으로 발생하는 폐장의 손상 중 제 1, 2형 폐포세포 및 혈관내피세포의 손상30,31은 급성호흡곤란증후군의 발병과 중요한 관련이 있으며 특히 Martensson 등32은 산화성스트레스에 의한 폐장의 손상은 특징적인 제 2형 폐포세포의 변형, 즉 세포질 내의 층상체의 팽대 및 공포화가 나타난다고 하였는데 본 실험에서도 이러한 변화가 관찰되었다.
특히 cerium chloride를 이용한 조직 내 산소기 생성검사를 통하여 PAF가 조직 내 과산화수소의 농도를 증가시켜 조직의 손상에 관여하였다는 사실도 확인하였다. PAF가 호중구에서의 산소기형성에 관여하는 것은 호중구막의 NADPH oxidase를 활성화시킴으로써 가능하다고 알려졌으나33 정확히는 어떤 기전에 의하여 NADPH oxidase가 활성화되는지는 알려져 있지 않다.
본 연구에서는 PAF 투여 후 폐장 조직의 cPLA2 활성도가 현저히 증가하고 동시에 혈액에서 분리된 사람의 호중구에서도 PAF에 의해 cPLA2의 활성도가 현저히 증가하였다. 이러한 결과는 Sun 등36의 연구결과와 일치하는 것으로서 그들은 PAF를 생쥐에게 주입하거나 TNF-α에 의해 PLA2의 활성도가 증가하여 생성된 내인성 PAF의 경우 모두에서 PLA2의 활성도가 증가한다고 하였다.
의 활성도가 증가한 원인 중 또 하나의 가능성은 호중구에서 생성된 과산화수소의 역할이다. 폐장 내 과산화수소를 직접 투여한 결과, 폐장의 cPLA2의 활성도가 현저히 증가하였다. 이러한 결과는 호중구에서 생성된 산소기가 역으로 호중구나 폐장조직의 cPLA2를 활성화시킬 수 있다는 것을 의미한다.
Boyer 등37, Chakraborti와 Michael38은 과산화수소가 폐장이나 혈관내피세포의 PLA2를 활성화시킨다고 보고하고 있다. 따라서 본 연구의 결과에서 볼 수 있는 PAF에 의한 cPLA2의 활성화는 과산화수소에 의한 것으로 추정된다.
결 과: PAF투여 후 단백누출지수, MPO, BAL내의 호중구의 수 및 CINC의 농도가 대조군에 비하여 유의하게 증가하였다. NBT및 cytochrome-c환원검사의 결과 PAF는 호중구의 respiratory burst를 현저히 증가시키고, 분리된 사람의 호중구에서도 산소기의 생성을 현저히 증가시켰다.
결 과: PAF투여 후 단백누출지수, MPO, BAL내의 호중구의 수 및 CINC의 농도가 대조군에 비하여 유의하게 증가하였다. NBT및 cytochrome-c환원검사의 결과 PAF는 호중구의 respiratory burst를 현저히 증가시키고, 분리된 사람의 호중구에서도 산소기의 생성을 현저히 증가시켰다. 동시에 PAF는 분리된 호중구 및 폐장의 cPLA2의 활성도도 증가 시켰다.
결 론: cPLA2의 활성화에 따라 생성된 PAF는 호중구의 산소기 생성을 증가시켜 폐장 내의 산화성스트레스를 유발하고 동시에 이때 생성된 산화기는 cPLA2를 활성화시키며 PAF 또한 cPLA2의 활성도를 증가시켜 PAF가 급성호흡곤란증후군의 병인론에 관여하는 것으로 생각된다.
폐장 내 모세혈관의 손상을 나타내는 지표인 단백누출지수는 PAF 투여 5시간 후에는 대조군의 0.080±0.004에 비해 0.177±0.018로 유의하게 증가하여(p＜0.001) PAF에 의한 모세혈관내피세포의 손상을 확인할 수 있었다(Table 1).
후속연구
를 활성화함으로써 호중구에서의 산소기 생성이 증폭되는 과정을 밝혔다. 이러한 과정에 관여하는 cPLA2의 역할이 좀 더 명확히 밝혀지면 급성호흡곤란증후군의 병태생리학의 기전의 일부를 이해하는데 도움이 될 것으로 생각한다.
참고문헌 (39)
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