[논문]난소절제 흰쥐에서 녹차가공품의 지질강하와 항산화 작용을 통한 항동맥경화 효과

조미경; 노경희; 김진주; 송영선

doi:10.3746/jkfn.2007.36.10.1263

난소절제 흰쥐에서 녹차가공품의 지질강하와 항산화 작용을 통한 항동맥경화 효과
Anti-atherogenic Effect of Green Tea Product through Hypolipidemic and Anti-oxidative Action in Ovariectomized Rats 원문보기

한국식품영양과학회지 = Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition, v.36 no.10, 2007년, pp.1263 - 1270

조미경 (인제대학교 의생명공학대학 식품생명과학부, 식품과학연구소 및 바이오헬스 소재 연구센터) , 노경희 (인제대학교 의생명공학대학 식품생명과학부, 식품과학연구소 및 바이오헬스 소재 연구센터) , 김진주 (인제대학교 의생명공학대학 식품생명과학부, 식품과학연구소 및 바이오헬스 소재 연구센터) , 송영선 (인제대학교 의생명공학대학 식품생명과학부, 식품과학연구소 및 바이오헬스 소재 연구센터)

초록
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난소절제 흰쥐에서 녹차가공품(GTP)의 항동맥경화 효과를 분석하여 폐경기 증후 개선을 위한 기능성식품으로의 활용 가능성을 확인하고자하였다. 본 연구에 사용된 GTP는 경남하동 소재 화개제다(花開製茶)로부터 제공받았다. 실험 동물은 10주령의 Sprague-Dewley 암컷 흰쥐로 평균 체중 $279{\pm}2g$인 실험 동물을 완전임의배치로 한 군당 10마리씩 4군으로 나누어 양쪽 난소를 절제한 후(OVX) 실험 식이를 제공하였다. Sham 대조군은 실험군과 동일한 스트레스를 주기 위해 난소를 절제하지 않고 개복수술만 실시한 후 실험하였다. 난소 절제 후 2주간 배합사료를 급여한 후 Sham-대조군(Sham-C)과 OVX-대조군(OVX-C)은 AIN' 76에 기초해서 제조한 콜레스테롤 첨가 식이를, OVX 실험군은 콜레스테롤 첨가 식이에 GTP 5%(OVX-G 5%)와 20%(OVX-G 20%)로 함유한 실험 식이를 조제하여 6주간 급여하였다. 식이 조제시 Ca함량은 총 식이의 0.4%수준으로 GTP첨가량 5%(Ca 함량 50%와 $CaCO_3$ 50%)와 GTP 첨가량을 20%(Ca함량 0.4%)로 조정하였으며 Sham-E와 OVX-C는 20% GTP 수준의 Ca 함량과 동일한 양으로 $CaCO_3$로 조정하여 첨가하였다. 혈청의 TG농도는 OVX-C군에 GTP 20%를 첨가한 식이를 섭취한 군에서 유의적으로(p<0.05) 낮은 수준을 보였다. 총 콜레스테롤 농도에 대한 HDL-C 농도비(%)는 GTP 20%를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 유의적으로(p<0.05) 높았으며 $TNF-{\alpha}$ 수준은 GTP 20%를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 유의적으로(p<0.05) 감소하였다 간의 TG와 TBARS 수준은 GTP 20%를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 감소하는 경향을 보였으며 GTP의 첨가가 간에서의 GSH함량 및 항산화 효소계의 활성을 증진시키는 것으로 나타났다. GTP를 첨가한 식이를 섭취한 실험군의 1일 변중의 총 지방 및 TG 배설량은 유의적인 차이는 보이지 않았으나 OVX-C군에 비해 다소 높은 경향을 보였으며 총 콜레스테롤 배설량은 OVX-C군에 비해 높은 수준이었다. 난소 절제 흰쥐에서 5% GTP를 제공받은 군에 비해 20% GTP를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 혈액과 간에서의 지질농도 감소와 항산화 효소의 활성이 높은 수준을 보여 GTP의 첨가량이 높을수록 더 효과적인 것으로 나타났다. 이상의 결과들로 미루어 볼 때 난소절제 흰쥐에서 GTP 첨가가 변의 총지질과 TG및 콜레스테롤 배설을 증가시켜 혈청과 간의 총 지질 농도와 TG및 총콜레스테롤 농도를 감소시키는 것과 관련이 있는 것으로 보이며 GTP의 섭취가 체내 총 지질 농도를 감소시켜 항 동맥경화 작용을 나타내는 것으로 사료된다. 따라서 녹차가공품의 폐경기 고지혈증 개선을 위한 기능성식품으로의 가능성을 보여 준다고 할 수 있다.

Abstract ▼ AI-Helper

This study was carried out to investigate the effect of green tea product (GTP) on the risk factors of atherosclerosis in ovariectomized (OVX) rats. Sprague-Dewley female rats (10 weeks) weighing approximately $279{\pm}2g$ were divided into 4 groups: sham operated control group treated with high cholesterol diet (Sham-C), OVX control group treated with high cholesterol diet (OVX-C), OVX-G 5% group treated with high cholesterol containing 5% GTP and OVX-G 20% group treated with high cholesterol diet containing 20% GTP. Serum TG concentrations was lower in OVX-G 20% group than in the OVX-C group, whereas ratio of HDL-cholesterol to total cholesterol (%) was significantly (p<0.05) increased in the 20% GTP supplementation group than in the Sham-C and OVX-C groups. Tumor necrosis $factor-{\alpha}$ levels were significantly (p<0.05) decreased in the OVX-G 20% group. Hepatic TG levels were significantly (p<0.05) lowered in OVX-G 20% group than in the other groups. Glutathione levels and antioxidant enzyme activities including glutathione-reductase and Mn-superoxide dismutase in liver were significantly (p<0.05) higher in the OVX-G 20% group in the OVX-C group. Fecal total cholesterol concentrations were increased in the GTP supplementation groups than in the OVX-C group. From the above results, it is concluded that GTP may reduce the risk of atherosclerosis via hypolipidemic action. Therefore, it may be used to possibly improve the hyperlipemia in menopausal women.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

사료된다. 그러므로 본 연구에서는 난소절제 흰 쥐에서 녹차 가공품의 지 질강하와 항산화작용을 통한 항동맥 경 화 효과를 분석하여 폐경기 증후 개선을 위한 기능성 식품으로의 가능성을 확인하기 위해 체내 지질 농도, 염증반응인자인 TNF-a 및 항산화효소의 활성 에 미치는 영향을 분석하였다.
난소절제 흰쥐에서 녹차가공품(GTP)의 항동맥경화 효과를 분석하여 폐경기 증후 개선을 위한 기능성식품으로의 활용 가능성을 확인하고자하였다. 본 연구에 사용된 GTP는 경남 하동 소재 화개제다(花開製茶)로부터 제공받았다.

제안 방법

05 μL을 사용하여 마취시킨 후 양쪽 난소를 절제한 후(ovariectomy: OVX) 2주간의 회복기를 거친 후 실험 식이를 급여하여 녹차가공품의 항동맥경화 및 항산화효과를 확인하였다. Sham 대조군은 실험군과 동일한 스트레스를 주기 위해 난소를 절제하지 않고 개복수술만 실시한 후 실험하였다. 사육실의 온도는 20~25℃, 상대습도 60~70%로 유지하였으며 명암은 12시간 간격으로 점등 및 소등하였다.
88% KC₁ 을 총 부피의 20%를 가하여 CHCh 층을 받은 후 CHCh : MeOH : H₂O(8:4:3 v/v) 용액 15~20 mL을 가하여 CHCh 층을 받아 30~ 35℃에서 evaporator# 사용하여 건고시 켜 CHCk을 사용하여 25 mL로 정용하여 분석 에 사용하였다. 간의 총 지질함량은 비중법으로 측정하였으며 Triton-X 100을 0.5% 첨가하여 탁도에 의한 오차를 최소화한 후 TG와 총 콜레스테롤농도를 효소법으로 kdt(영동제약)를 사용하여 분석하였다. 지질과산화 정도는 혈청 에서 분석한 방법과 동일한 방법으로 측정하였다.
사육실의 온도는 20~25℃, 상대습도 60~70%로 유지하였으며 명암은 12시간 간격으로 점등 및 소등하였다. 난소 절제 후 2주간 배합사료를 급여한 후 Sham-대조군(Sham-C)과 OVX-대조군(OVX-C)은 AIN' 76에 기초해서 제조한 콜레스테롤 첨가 식이(20)를, OVX 실험군은 콜레스테롤 첨가식이에 GTP 5%(OVX-G 5%)와 20%(OVX-G 20%)로 함유한 실험식이를 조제하여 6주간 급여하였다. 식이 조제시 Ca 함량은 총 식이의 0.
사육실의 온도는 20~25℃, 상대습도 60~70%로 유지하였으며 명암은 12시간 간격으로 점등 및 소등하였다. 난소 절제 후 2주간 배합사료를 급여한 후 Sham-대조군(Sham-C)과 OVX-대조군(OVX-C)은 AIN' 76에 기초해서 제조한 콜레스테롤 첨가 식이(20)를, OVX 실험군은 콜레스테롤 첨가식이에 GTP 5%(OVX-G 5%)와 20%(OVX-G 20%)로 함유한 실험식이를 조제하여 6주간 급여하였다. 식이 조제시 Ca 함량은 총 식이의 0.
사육하였다. 난소를 절제하기 위해 ketamin(유한)과 rumpun(바이엘코리아)을 체중 100 g당 0.11 uL과 0.05 μL을 사용하여 마취시킨 후 양쪽 난소를 절제한 후(ovariectomy: OVX) 2주간의 회복기를 거친 후 실험 식이를 급여하여 녹차가공품의 항동맥경화 및 항산화효과를 확인하였다. Sham 대조군은 실험군과 동일한 스트레스를 주기 위해 난소를 절제하지 않고 개복수술만 실시한 후 실험하였다.
난소 절제 후 2주간 배합사료를 급여한 후 Sham-대조군(Sham-C)과 OVX-대조군(OVX-C)은 AIN' 76에 기초해서 제조한 콜레스테롤 첨가 식이를, OVX 실험군은 콜레스테롤 첨가 식이에 GTP 5%(OVX-G 5%)와 20%(OVX-G 20%)로 함유한 실험 식이를 조제하여 6주간 급여하였다. 식이 조제시 Ca 함량은 총 식이의 0.4% 수준으로 GTP 첨가량 5%(Ca 함량 50%와 CaCO₃ 50%)와 GTP 첨 가량을 20%(Ca 함량 0.4%)로 조정하였으며 Sham-C와 OVX-C는 20% GTP 수준의 Ca 함량과 동일한 양으로 CaCCh로 조정하여 첨가하였다. 혈청의 TG 농도는 OVX-C군에 GTP 20%를 첨가한 식이를 섭취한 군에서 유의적으로(p<0.
난소 절제 후 2주간 배합사료를 급여한 후 Sham-대조군(Sham-C)과 OVX-대조군(OVX-C)은 AIN' 76에 기초해서 제조한 콜레스테롤 첨가 식이(20)를, OVX 실험군은 콜레스테롤 첨가식이에 GTP 5%(OVX-G 5%)와 20%(OVX-G 20%)로 함유한 실험식이를 조제하여 6주간 급여하였다. 식이 조제시 Ca 함량은 총 식이의 0.4% 수준으로 GTP 첨가량 5%(Ca 함량 50%와 CaCO₃ 50%)와 GTP 첨가량을 20%(Ca 함량 0.4%)로 조정하였으며 Sham-C와 OVX-C는 20% GTP 수준의 Ca 함량과 동일한 양으로 CaCO₃로 조정하여 첨가하였다. 식이 제조는 Table 2와 같은 조성으로 혼합한 후 분말의 형태로 급여하였으며 식이제조에 사용한 vitamin mixture(AIN-76A), mineral mixture(Ca free), a-cellulose, casein(vitamin free), DL-methionine, cholesterol, choline chloride 등은 ICN BiochemicalsdCN Aurora, ohio, USA) 제품을 사용하였다.
4% EDTA로 씻은 후 탈 이온수로 헹구어 사용하였다. 실험동물의 식이섭취량과 체중은 각각 1주일에 3회와 1회씩 정기적으로 측정하였다.
옥수수 전분(두산), 옥수수유(제일제당), 코코아 버터(선인) 제품을 사용하였다. 실험식이와 탈 이온수는 자유 섭취 방법으로 급여하였으며 사육에 필요한 모든 기구는 0.4% EDTA로 씻은 후 탈 이온수로 헹구어 사용하였다. 실험동물의 식이섭취량과 체중은 각각 1주일에 3회와 1회씩 정기적으로 측정하였다.
지질과산화 정도는 thiobarbituric acid reactive sub stances (TB ARS) 함량으로 확인하였으며 TEARS 함량은 Buege와 Aust에 의한 방법 (22)을 다소 수정하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 표준으로는 l, l, 3, 3-tetramethoxypropane(TMP)을 사용하였고 측정된 값을 표준곡선 에 대입 시켜 malondialdehyde(MDA)의 양으로 환산하였다. 혈청의 tumor necrosis factor-a(TNF-a) 수준은 Rat TNF-a kit(RTA00, R&D Systems, Inc.
간의 지질은 Folch 등의 방법(23)으로 추출하였다. 즉, 간 2 g을 CHCh : MeOH (2:1 v/v)을 60 mL 가하여 3분간 균질화시 킨 후 여과지 (Whatman #1)를 사용하여 여과시 킨 용액에 0.88% KC₁ 을 총 부피의 20%를 가하여 CHCh 층을 받은 후 CHCh : MeOH : H₂O(8:4:3 v/v) 용액 15~20 mL을 가하여 CHCh 층을 받아 30~ 35℃에서 evaporator# 사용하여 건고시 켜 CHCk을 사용하여 25 mL로 정용하여 분석 에 사용하였다. 간의 총 지질함량은 비중법으로 측정하였으며 Triton-X 100을 0.
계산하였다. 지질과산화 정도는 thiobarbituric acid reactive sub stances (TB ARS) 함량으로 확인하였으며 TEARS 함량은 Buege와 Aust에 의한 방법 (22)을 다소 수정하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 표준으로는 l, l, 3, 3-tetramethoxypropane(TMP)을 사용하였고 측정된 값을 표준곡선 에 대입 시켜 malondialdehyde(MDA)의 양으로 환산하였다.
5% 첨가하여 탁도에 의한 오차를 최소화한 후 TG와 총 콜레스테롤농도를 효소법으로 kdt(영동제약)를 사용하여 분석하였다. 지질과산화 정도는 혈청 에서 분석한 방법과 동일한 방법으로 측정하였다.
항산화 효소계 활성 측정을 위한 시료조제는 간 0.2 g을 얼음 위 에서 50 mM phosphate buffer(pH 7.4) 4 mL을 가해 균질화시킨 후 -4℃ 이하에서 3, 000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 취하여 10, 000 rpm에서 30분간 -4℃ 이하에서 원심분리하여 상등액으로는 catalase, GSH-reduc-tase(GSH-px), GSH peroxidase(GSH-px), Cu, Zn-super-oxide dismutase(Cu, Zn-SOD) 측정 에 사용하였으며 침전물로는 Mn-SOD 활성을 분석에 이용하였다. Catalase 활성은 Aebi 방법(25)으로 분석하였으며 시료 50 11L에 50 mM phosphate buffer(pH 7.
채취된 혈액은 3, 000 rpm에서 20분간 원심분리하여 분리된 혈청을 -70℃에서 냉동 보관하였다. 혈액 채취 후 즉시 간장을 적출하여 부착되어 있는 지방 등을 깨끗이 제거한 후 차가운 생리식염수로 세척하여 혈액을 제거한 다음 여과지로 물기를 제거하고 무게를 측정하여 -70℃에서 냉동 보관하면서 분석에 사용하였다. 변은 실험종료 전 대사장에서 적응시킨 후 24시간 동안 채취하여 80±5℃에서 3시간 건조시켜 분말로 만들었다.
혈청의 지질과산화 정도는 TBARS의 생성량으로 확인하였다. GTP를 첨가한 식이를 섭취한 실험군의 지질과산화수준은 대조군에 비해 유의적인 차이를 보이지 않았다(Fig.

대상 데이터

10주령의 Sprague-Dewley 암컷 흰쥐 에게 2주간의 적응기를 거친 후 평균 체중 279 ±2 g인 실험동물을 완전 임의배치로 한 군당 10마리씩 4군으로 나누어 stainless steel wire cage에서 사육하였다. 난소를 절제하기 위해 ketamin(유한)과 rumpun(바이엘코리아)을 체중 100 g당 0.
녹차가루(15%)와 녹차잎 추출물(35%), 두충추출물(15%), 감잎추출물(15%), 검정콩(18%) 및 찹쌀 풀과 꿀 2% 등을 배합하여 조제된 녹차가공품(GTP)은 경남하동 소재 화개제다(花開製茶)로부터 제공받아 분말화하여 식이조제에 첨가하였다. GTP의 일반성분은 Table 1에서 보는 바와 같이 100g 당 조단백질 30.
가능성을 확인하고자하였다. 본 연구에 사용된 GTP는 경남 하동 소재 화개제다(花開製茶)로부터 제공받았다. 실험동물은 10주령의 Sprague-Dewley 암컷 흰쥐로 평균 체중 279 ±2 g인 실험동물을 완전임의배치로 한 군당 10마리씩 4군으로 나누어 양쪽 난소를 절제한 후(OVX) 실험 식이를 제공하였다.
4%)로 조정하였으며 Sham-C와 OVX-C는 20% GTP 수준의 Ca 함량과 동일한 양으로 CaCO₃로 조정하여 첨가하였다. 식이 제조는 Table 2와 같은 조성으로 혼합한 후 분말의 형태로 급여하였으며 식이제조에 사용한 vitamin mixture(AIN-76A), mineral mixture(Ca free), a-cellulose, casein(vitamin free), DL-methionine, cholesterol, choline chloride 등은 ICN BiochemicalsdCN Aurora, ohio, USA) 제품을 사용하였다. 옥수수 전분(두산), 옥수수유(제일제당), 코코아 버터(선인) 제품을 사용하였다.
본 연구에 사용된 GTP는 경남 하동 소재 화개제다(花開製茶)로부터 제공받았다. 실험동물은 10주령의 Sprague-Dewley 암컷 흰쥐로 평균 체중 279 ±2 g인 실험동물을 완전임의배치로 한 군당 10마리씩 4군으로 나누어 양쪽 난소를 절제한 후(OVX) 실험 식이를 제공하였다. Sham 대조군은 실험군과 동일한 스트레스를 주기 위해 난소를 절제하지 않고 개복수술만 실시한 후 실험하였다.
식이 제조는 Table 2와 같은 조성으로 혼합한 후 분말의 형태로 급여하였으며 식이제조에 사용한 vitamin mixture(AIN-76A), mineral mixture(Ca free), a-cellulose, casein(vitamin free), DL-methionine, cholesterol, choline chloride 등은 ICN BiochemicalsdCN Aurora, ohio, USA) 제품을 사용하였다. 옥수수 전분(두산), 옥수수유(제일제당), 코코아 버터(선인) 제품을 사용하였다. 실험식이와 탈 이온수는 자유 섭취 방법으로 급여하였으며 사육에 필요한 모든 기구는 0.

데이터처리

²⁾Mean±SE. 3)Values within column with same superscript are not significantly different by Duncan's multiple range test at p<0.05. NS: not significant.
³⁾Mean±SE. ⁴⁾Values within column with same superscript are not significantly Afferent by Duncan's multiple range test at p<0.05.
mean of triplicate assays. Values sharing same superscript are not significantly different by one-way ANOVA followed Duncan's multiple range at p<0.05. NS: not significant.
실험 결과는 SPSS PC* package를 이용하여 각 실험군의 평균 土 표준오차로 표시하였고 one-way ANOVA 분석 후 Duncan's multiple range test에 의해 각 실험군 간의 유의성을 p<0.05 수준에서 검정하였다.

이론/모형

4) 4 mL을 가해 균질화시킨 후 -4℃ 이하에서 3, 000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 취하여 10, 000 rpm에서 30분간 -4℃ 이하에서 원심분리하여 상등액으로는 catalase, GSH-reduc-tase(GSH-px), GSH peroxidase(GSH-px), Cu, Zn-super-oxide dismutase(Cu, Zn-SOD) 측정 에 사용하였으며 침전물로는 Mn-SOD 활성을 분석에 이용하였다. Catalase 활성은 Aebi 방법(25)으로 분석하였으며 시료 50 11L에 50 mM phosphate buffer(pH 7.0) 600 pL을 첨가하여 30 mM H2O2 300 11L을 가하여 240 nm에서 120초간 10초 간격으로 scanning하여 측정하였으며 효소활성은 1분간 1 nmol의 H2O2를 분해시키는 효소의 양을 1 unit로 하였다. Cu, Zn-superoxide dismutase(Cu, Zn-SOD)와 Mn-SOD 활성은 Marklund와 Marklunds의 방법(26)으로 분석하였다.
0) 600 pL을 첨가하여 30 mM H2O2 300 11L을 가하여 240 nm에서 120초간 10초 간격으로 scanning하여 측정하였으며 효소활성은 1분간 1 nmol의 H2O2를 분해시키는 효소의 양을 1 unit로 하였다. Cu, Zn-superoxide dismutase(Cu, Zn-SOD)와 Mn-SOD 활성은 Marklund와 Marklunds의 방법(26)으로 분석하였다. 즉, Cu, Zn-SOD와 Mn-SOD 활성은 80배, 400배, 1200배로 조제한 시료를 각각 희석한 후 150 11L를 취하여 H₂O 60 11L를 첨가(단, Mn-SOD 측정시는 4 mM KCN 60 pL)하고 75 mM Na-xanthine 15 mL과 10 mM hydroxylamine hydrochloride 15 11L를 가하여 37℃에서 10분 간 방치한 후 37℃의 0.
02% N-(l-naphthyl) ethylenediamine dihydrochloride 300 11 L을 혼합하여 20분간 실온에 방치한 후 540 nm에서 흡광도를 측정하여 50%의 inhibition을 나타내는 농도 graph를 이용하여 50% inhibition에 해당하는 검체량(1风)을 구하여 1 Nitrate unit로 하였다. GSH-px 활성은 Lawrence과 Burk의 방법(27)으로 측정 하였으며 H₂O₂를 제거 하면서 소비 된 GSH를 환원형으로 전환시키는데 필요한 NADPH의 양으로 표시하였다. GSH-red 활성은 Inger와 Bengt의 방법 (28)으로 2 mM EDTA를 함유한 0.
GSH-px 활성은 Lawrence과 Burk의 방법(27)으로 측정 하였으며 H₂O₂를 제거 하면서 소비 된 GSH를 환원형으로 전환시키는데 필요한 NADPH의 양으로 표시하였다. GSH-red 활성은 Inger와 Bengt의 방법 (28)으로 2 mM EDTA를 함유한 0.2 M phosphate buffer(pH 7.0) 250 pL, NADPH 25 pL, GSSG 25 uL 및 탈이온수 200 liL를 혼합한 방응시약에 시료 조제액 500 11L를 넣은 즉시 340 nm에서 10초 간격으로 90초간 측정하였으며 GSH-red 활성 unit는 1분 당 1 nm이의 NADPH의 환원을 촉매하는 효소의 양으로 분석하였다. 단백질 농도는 Bradford 방법(29)으로 측정하였다.
간의 지질은 Folch 등의 방법(23)으로 추출하였다. 즉, 간 2 g을 CHCh : MeOH (2:1 v/v)을 60 mL 가하여 3분간 균질화시 킨 후 여과지 (Whatman #1)를 사용하여 여과시 킨 용액에 0.
0) 250 pL, NADPH 25 pL, GSSG 25 uL 및 탈이온수 200 liL를 혼합한 방응시약에 시료 조제액 500 11L를 넣은 즉시 340 nm에서 10초 간격으로 90초간 측정하였으며 GSH-red 활성 unit는 1분 당 1 nm이의 NADPH의 환원을 촉매하는 효소의 양으로 분석하였다. 단백질 농도는 Bradford 방법(29)으로 측정하였다.
변의 지질농도는 Soxhlet 방법 (30)으로 지방을 추출하여 총 지방함량은 비중법으로, TG와 총 콜레스테롤 함량은 간의 지질농도 측정과 같은 방법으로 영동제약 kit를 사용하여 분석하였다.
항산화 영양소인 glutathione(GSH)의 함량은 Tietze의 방법(24)으로 측정하였다. 즉, 간 1 g을 0.
혈액의 생화학적 분석: 혈청의 중성지방(TG) 및 총 콜레스테롤과 HDL-C 농도 변화는 효소법 에 의한 정량용 kit(영동제약)를 사용하여 분석하였으며 LDL-C 농도는 Friedwald 공식(21)으로 계산하였다. 지질과산화 정도는 thiobarbituric acid reactive sub stances (TB ARS) 함량으로 확인하였으며 TEARS 함량은 Buege와 Aust에 의한 방법 (22)을 다소 수정하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.
이때 표준으로는 l, l, 3, 3-tetramethoxypropane(TMP)을 사용하였고 측정된 값을 표준곡선 에 대입 시켜 malondialdehyde(MDA)의 양으로 환산하였다. 혈청의 tumor necrosis factor-a(TNF-a) 수준은 Rat TNF-a kit(RTA00, R&D Systems, Inc., USA)를 사용하여 immunoassay 방법으로 분석하였다n

성능/효과

TNF-a는 암뿐 아니라 류머 티 즘 등의 여러 다른 질환을 유발하는 주요한 cytokine이다(37, 38). Fig. 2에서 보는 바와 같이 TNF-a 농도는 GTP 20%를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 TNF-a의 농도가 유의적으로 감소하여 (p<0.05) Sham-C군과 유사한 수준이 었으며 GTP 5%를 첨가한 식 이에 비해 유의적으로 낮은 수준(p<0.05)을 보였다. 동맥경화의 초기반응에는 산화적 스트레스와 염증반응이 관련되어 있는데(9, 10) GTP 20% 첨가물을 급여한 본 실험에서는 TBARS에는 영향을 미치지 않았으나 TNF-a 농도는 현저한 감소효과를 보였는데 이것은 염증반응 지표가 TBARS보다 예민한 지표일 가능성 때문으로 사료된다(39, 40).
05) 높은 활성을 보였다. GSH-px 활성은 OVX군이 Sham-C군에 비해 현저하게 높은 수준으로 OVX-C군이 가장 높은 활성을 보였다. GSH-px는 셀레늄 의존성 항산화 효소로 지 질과산화와 과산화수소의 무독화과정을 촉매 하는 역할을 한다(46).
또한 대사과정 중 발생하는 활성 산소종의 유리기를 제거할 뿐 아니라 이들 활성 산소종에 의해 비가역적으로 불활성화 될 수도 있으며 지방산화에 의해 생성된 유리기도 제거하는 것으로 알려져 있다(44, 45). GSH-red 활성은 OVX-C군에 비해 GTP 20%를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 유의적으로(p<0.05) 높은 활성을 보였다. GSH-px 활성은 OVX군이 Sham-C군에 비해 현저하게 높은 수준으로 OVX-C군이 가장 높은 활성을 보였다.
간의 TG와 TEARS 수준은 GTP 20%를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 감소하는 경향을 보였으며 GTP의 첨가가 간에서의 GSH 함량 및 항산화 효소계의 활성을 증진시키는 것으로 나타났다. GTP를 첨가한 식이를 섭취한 실험군의 1일 변중의 총 지방 및 TG 배설량은 유의적인 차이는 보이지 않았으나 OVX-C군에 비해 다소 높은 경향을 보였으며 총 콜레스테롤 배설량은 OVX-C군에 비해 높은 수준이 었다. 난소절제 흰쥐 에서 5% GTP를 제공받은 군에 비해 20% GTP를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 혈액과 간에서의 지질농도감소와 항산화 효소의 활성이 높은 수준을 보여 GTP의 첨가량이 높을수록 더 효과적인 것으로 나타났다.
GTP를 첨가한 식이를 섭취한 실험군의 지질과산화수준은 대조군에 비해 유의적인 차이를 보이지 않았다(Fig. 1). 염증반응의 초기에는 혈액 속을 순환하던 단핵구, 백혈구가 내피 표면으로 부착하여 혈관 속으로 침투하게 되며 TNF-a와 같은 염증성 cytokine이 내피세포의 세포 부착 분자의 유전자 발현을 증가시켜 동맥경화를 유발하게 된다.
혈청의 총 콜레스테롤 농도는 Shan-C군에 비해 OVX군에서 증가하였으며 OVX군 간에는 유의적인 차이를 보이지 않았다. HDL-C 농도는 Sham-C군에 비해 GTP를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 유의적으로 증가하였으며 (p<0.05) GTP 20%를 첨가한 식 이를 섭취한 군에서 가장 높은 수준을 보였다. LDL-C 수준은 OVX군 간에 유의적인 차이는 보이지 않았으나 GTP 20% 첨가한 식이를 섭취한 군에서 가장 낮은 경향을 보였다.
05) GTP 20%를 첨가한 식 이를 섭취한 군에서 가장 높은 수준을 보였다. LDL-C 수준은 OVX군 간에 유의적인 차이는 보이지 않았으나 GTP 20% 첨가한 식이를 섭취한 군에서 가장 낮은 경향을 보였다. 실험군의 총 콜레스테롤에 대한 HDL C 농도비 (%)를 비교한 결과는 OVX-C군에 비해 GTP 20%를 첨가한 식이를 섭취한 군에서 유의적으로(p<0.
Cu, Zn-SOD 활성은 각 군 간에 유의적인 차이를 보이지 않았으나 GTP 첨가한 식이를 제공받은 군에서 다소 높은 경향을 나타냈다. Mn-SOD 활성은 OVX-C군에 비해 GTP 5%를 첨가한 식이를 제공받은 군에서는 유의적인 차이는 없었으나 다소 증가하는 경향이었으며 GTP를 20% 첨가한 식이를 제공받은 군에서 유의적으로(p<0.05) 높은 활성을 보였다. 산소를 이용하는 생물체에는 superoxide!- 제거하는 효소인 SOD를 가지고 있어 생체는 superoxide에 의한 손상으로부터 보호되고 있다.
간의 총 콜레스테롤 농도는 OVX-C군에 비해 GTP를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 다소 감소하는 경향을 보였으나 OVX군 간에 유의적인 차이는 나타나지 않았다. 간의 TBARS의 생성량은 GTP를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 OVX-C군에 비해 유의적으로(p<0.05) 감소하는 것으로 나타났다.
05) 감소하였다. 간의 TG와 TEARS 수준은 GTP 20%를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 감소하는 경향을 보였으며 GTP의 첨가가 간에서의 GSH 함량 및 항산화 효소계의 활성을 증진시키는 것으로 나타났다. GTP를 첨가한 식이를 섭취한 실험군의 1일 변중의 총 지방 및 TG 배설량은 유의적인 차이는 보이지 않았으나 OVX-C군에 비해 다소 높은 경향을 보였으며 총 콜레스테롤 배설량은 OVX-C군에 비해 높은 수준이 었다.
간의 TG 농도는 Sham-C군에 비해 OVX-C군에서 증가하였으며 OVX-C군에 비해 GTP를 첨가한 식이를 제공받은 군에서는 감소하는 경향으로 특히 GTP 20%를 첨가한 식이를 제공받은 군에서는 Sham-C군보다 낮은 수준을 보였다. 간의 총 콜레스테롤 농도는 OVX-C군에 비해 GTP를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 다소 감소하는 경향을 보였으나 OVX군 간에 유의적인 차이는 나타나지 않았다. 간의 TBARS의 생성량은 GTP를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 OVX-C군에 비해 유의적으로(p<0.
GTP를 첨가한 식이를 섭취한 실험군의 1일 변중의 총 지방 및 TG 배설량은 유의적인 차이는 보이지 않았으나 OVX-C군에 비해 다소 높은 경향을 보였으며 총 콜레스테롤 배설량은 OVX-C군에 비해 높은 수준이 었다. 난소절제 흰쥐 에서 5% GTP를 제공받은 군에 비해 20% GTP를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 혈액과 간에서의 지질농도감소와 항산화 효소의 활성이 높은 수준을 보여 GTP의 첨가량이 높을수록 더 효과적인 것으로 나타났다. 이상의 결과들로 미루어 볼 때 난소절제 흰쥐에서 GTP 첨가가 변의 총 지질과 TG 및 콜레스테롤 배설을 증가시켜 혈청과 간의 총지질 농도와 TG 및 총콜레스테롤 농도를 감소시 키는 것과 관련이 있는 것으로 보이며 GTP의 섭취가 체내 총 지질 농도를 감소시켜 항 동맥경화 작용을 나타내는 것으로 사료된다.
GTP의 섭취가 Mn-SOD 에는 영향을 미쳐 superoxide로부터 조직을 보호하는 것으로 보인다. 따라서 5% GTP를 제공받은 군에 비해 20% GTP를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 항산화 효소의 활성이 높은 수준을 보여 GTP의 첨가가 항산화 영양소 및 항산화 효소계에 영향을 미치는 것으로 보인다.
있는 것으로 보인다. 따라서 난소절제 흰쥐에서 GTP의 섭취가 체내 총 지질 농도를 감소시키고 간의 항산화 효소계를 활성화시켜 항산화 및 항동맥경화에 효과가 있는 것으로 사료된다.
05) 높은 수준이었다. 따라서 본 연구에서 난소를 절제한 흰쥐에게 GTP의 첨가가 혈 중의 지 질 수준을 개선하고 HDL-C 수준을 향상시 켜 항동맥경화효과를 나타내는 것으로 보인다.
동물조직 중 비단백성 티올의 대부분을 차지하는 GSH는 유리기 제거제 역할과 과산화수소 및 과산화지질을 대사시 키는 GSH-px의 기질로써 세포 내 항산화제 중 중요한 역할을 담당한다(42). 따라서 본 연구의 결과를 볼 때 난소 절제 흰쥐의 간에서 TBARS의 농도 감소와 간조직의 GSH 함량 증가는 GTP의 첨가가 항산화 기능을 향상시키는 작용을 보여주는 것으로 사료된다.
1일 변의 배설량은 각 군 간에 유의적인 차이를 보이지 않았으나 GTP를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 높은 배설량을 보였다. 변 중의 총 지질과 TG 농도는 군 간에 유의적인 차이를 보이지 않았으나 GTP 20%를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 가장 높은 수준으로 나타났다. 변 중의 총 콜레스테롤 농도는 Sham-C군에 비해 OVX-C군에서 다소 낮아지는 경향을 보였고 5% GTP를 첨가한 군이 OVX-C군에 비해 유의적인 차이는 없었으나 다소 높은 경향을 보였으며 20% GTP를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 유의적으로(p<0.
변 중의 총 지질과 TG 농도는 군 간에 유의적인 차이를 보이지 않았으나 GTP 20%를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 가장 높은 수준으로 나타났다. 변 중의 총 콜레스테롤 농도는 Sham-C군에 비해 OVX-C군에서 다소 낮아지는 경향을 보였고 5% GTP를 첨가한 군이 OVX-C군에 비해 유의적인 차이는 없었으나 다소 높은 경향을 보였으며 20% GTP를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 유의적으로(p<0.05) 증가하는 것으로 나타났으며 GTP의 첨가량이 높을수록 총 콜레스테롤 배설량이 높았다. GTP 함유 식이섬유 혹은 활성성분이 이러한 결과를 초래했을 가능성이 있는 것으로 사료된다.
본 연구의 결과들을 미루어 볼 때 난소절제 횐쥐에서 GTP가 항산화 영양소 및 항산화 효소계의 활성을 증진시키는 것으로 나타나 GTP의 섭취가 산화적 스트레스를 억제하여 항산화효과를 갖는 것으로 보이며 염증 생성 및 동맥경화를 예방하는 효과가 있는 것으로 사료된다.
실험군의 체중증가량과 식이섭취량은 난소절제군(OVX 군)이 Sham-C군에 비해 상대적으로 높은 수준을 보였다. 난소 절제로 유발된 체중 증가 현상은 여러 연구에서 보고(31-34)되었다.
LDL-C 수준은 OVX군 간에 유의적인 차이는 보이지 않았으나 GTP 20% 첨가한 식이를 섭취한 군에서 가장 낮은 경향을 보였다. 실험군의 총 콜레스테롤에 대한 HDL C 농도비 (%)를 비교한 결과는 OVX-C군에 비해 GTP 20%를 첨가한 식이를 섭취한 군에서 유의적으로(p<0.05) 높은 수준이었다. 따라서 본 연구에서 난소를 절제한 흰쥐에게 GTP의 첨가가 혈 중의 지 질 수준을 개선하고 HDL-C 수준을 향상시 켜 항동맥경화효과를 나타내는 것으로 보인다.
이러한 결과들은 GTP의 첨가가 난소절제 흰쥐에서 간의 TG 및 총 콜레스테롤 농도와 지질과산화를 감소시키는 것으로 사료된다.
이상의 결과들로 미루어 볼 때 GTP 첨가가 변의 총 지질과 TG 및 콜레스테롤 배설을 증가시켜 혈청과 간의 총 지질농도와 TG 및 총콜레스테롤 농도를 감소시 키는 것과 관련이 있는 것으로 보인다. 따라서 난소절제 흰쥐에서 GTP의 섭취가 체내 총 지질 농도를 감소시키고 간의 항산화 효소계를 활성화시켜 항산화 및 항동맥경화에 효과가 있는 것으로 사료된다.
난소절제 흰쥐 에서 5% GTP를 제공받은 군에 비해 20% GTP를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 혈액과 간에서의 지질농도감소와 항산화 효소의 활성이 높은 수준을 보여 GTP의 첨가량이 높을수록 더 효과적인 것으로 나타났다. 이상의 결과들로 미루어 볼 때 난소절제 흰쥐에서 GTP 첨가가 변의 총 지질과 TG 및 콜레스테롤 배설을 증가시켜 혈청과 간의 총지질 농도와 TG 및 총콜레스테롤 농도를 감소시 키는 것과 관련이 있는 것으로 보이며 GTP의 섭취가 체내 총 지질 농도를 감소시켜 항 동맥경화 작용을 나타내는 것으로 사료된다. 따라서 녹차가공품의 폐경기 고지혈증 개선을 위한 기능성 식품으로의 가능성을 보여 준다고 할 수 있다.
바와 같다. 체중 100g 당 간의 무게는 각 군 간에 유의적인 차이를(p<0.05) 보였으며 GTP를 첨가한 식이를 섭취한 군에서 OVX-C군에 비해 감소하였다. GTP의 첨가가 체내지방 축적을 감소시켜 간의 무게를 감소시키는 것으로 보인다.
05) 낮은 수준을 보였다. 총 콜레스테롤 농도에 대한 HDL-C 농도비(%) 는 GTP 20%를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 유의적으로(p<0.05) 높았으며 TNF-a 수준은 GTP 20%를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 유의적으로(p<0.05) 감소하였다. 간의 TG와 TEARS 수준은 GTP 20%를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 감소하는 경향을 보였으며 GTP의 첨가가 간에서의 GSH 함량 및 항산화 효소계의 활성을 증진시키는 것으로 나타났다.
혈청의 TG농도는 0VX군에서 GTP를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 OVX-C군에 비해 TG의 농도가 감소하는 것으로 나타났으며 GTP 20%를 첨가한 식이를 제공받은 군에서는 Sham-C군과 비슷한 수준을 보여, 이러한 결과는 GTP의 섭취가 난소를 절제한 흰쥐에서 혈액 속의 TG의 농도를 감소시키는 것으로 사료된다. 혈청의 총 콜레스테롤 농도는 Shan-C군에 비해 OVX군에서 증가하였으며 OVX군 간에는 유의적인 차이를 보이지 않았다.
혈청의 TG농도는 0VX군에서 GTP를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 OVX-C군에 비해 TG의 농도가 감소하는 것으로 나타났으며 GTP 20%를 첨가한 식이를 제공받은 군에서는 Sham-C군과 비슷한 수준을 보여, 이러한 결과는 GTP의 섭취가 난소를 절제한 흰쥐에서 혈액 속의 TG의 농도를 감소시키는 것으로 사료된다. 혈청의 총 콜레스테롤 농도는 Shan-C군에 비해 OVX군에서 증가하였으며 OVX군 간에는 유의적인 차이를 보이지 않았다. HDL-C 농도는 Sham-C군에 비해 GTP를 첨가한 식이를 제공받은 군에서 유의적으로 증가하였으며 (p<0.

후속연구

따라서 녹차가루와 녹차추출물, 두충추출물, 감잎 추출물 및 검정콩 등을 배합하여 조제된 녹차가공품은 칼슘, 이소플라본, 비타민 C, 카테킨 등이 풍부하여 여성호르몬 저화 등으로 인한 폐경 후 병리현상의 개선에 기여할 수 있을 것으로 사료된다. 그러므로 본 연구에서는 난소절제 흰 쥐에서 녹차 가공품의 지 질강하와 항산화작용을 통한 항동맥 경 화 효과를 분석하여 폐경기 증후 개선을 위한 기능성 식품으로의 가능성을 확인하기 위해 체내 지질 농도, 염증반응인자인 TNF-a 및 항산화효소의 활성 에 미치는 영향을 분석하였다.

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

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용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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