[논문]젖염소 유즙에 적용한 5가지 체세포 염색 방법의 비교

김영철; 박하연; 이윤경; 이정치; 서국현; 이채용

젖염소 유즙에 적용한 5가지 체세포 염색 방법의 비교
Comparison of 5 Staining Methods for Somatic Cells in Dairy Goat Milk Samples 원문보기

Journal of veterinary clinics = 한국임상수의학회지, v.25 no.4 = no.63, 2008년, pp.274 - 279

김영철 (전남대학교 수의과대학) , 박하연 (전남대학교 수의과대학) , 이윤경 (전남대학교 수의과대학) , 이정치 (광주보건대학 임상병리과) , 서국현 (전남대학교 수의과대학) , 이채용 (전남대학교 수의과대학)

Abstract ▼ AI-Helper

This study was performed to investigate the best staining method for the somatic cell classification of dairy goat milk. Dairy goat milk samples, which were collected randomly from a dairy goat farm in Jeollanam-do, South Korea, were stained and analyzed with direct microscopic method, using 5 different staining methods; Wright's stain, Giemsa stain, Diff-quik stain, Newman's stain and Pyronin Y-Methyl Green stain, respectively. Among them, The Newman's staining was found to be the most rapid and effective method, for it required the shortest time for staining and provided the easiest way to classify somatic cells.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

이 연구에서는 젖염소 유즙 염색 소요시간이 가장 빠르고,체세포 감별이 용이한 염색방법을 알아보기 위하여 현재 혈 액세포 염색에 사용되는 Wright's stain, Giemsa stain, DiffQuik stain, 유즙 염색법인 Newman's stain, PYMG stain을 수행하여 젖염소 유즙의 체세포 염색성을 비교하였다. Maisi (15)와 Schalm 등(19)의 방법에 준하여 광학 현미경으로 혈 액 세포와 상피세포를 분류하고 세포들의 염색성을 관찰 한 결과, 5가지 염색법 모두 세포 내 핵을 뚜렷히 구분 할 수 있었으나, 세포 내 세포질과 CPS 염색성은 PYMG stain에서 배경과 뚜렷한 차이를 나타내고 있음을 확인하였다.
그러나 MB 염색법은 세포들과 CPS 와 감별이 어렵고 PYMG 염색법은 염색과정이 복잡하여 야 외에서 간편하게 이용하기 어려운 실정이다(14, 17). 이 연구에서는 젖염소 유즙 염색 시 소요시간이 가장 빠르고, 체세 포 감별이 용이한 염색방법을 알아보기 위하여 현재 혈액세 포 염색에 사용되는 Wright's stain, Giemsa stain, DiffQuik stain, 면양 유즙 염색법인 Newman's stain, 그리고 젖염 소 유즙 염색법인 PYMG stain을 수행하여 젖염소 유즙의 체 세포 염색성을 비교하고자한다.

가설 설정

5 ;Distinct differential classification of cells is impossible both in x 40 and x 100 field.

제안 방법

2007년 4월에 전남지역 농장에서 사육되는 젖염소 40 분방 의 CMT 음성 및 체세포 10만/ml 이하 유즙에서 체세포를 Wright's stain, Giemsa stain, Difl-Quik stain, Newman,s stain, 그리고 Pyronin YMethyl Green stain을' 포함한 종 5가지 염색법을 비교하여 다음과 같은 결론을 얻었다. Newman's stain이 젖염소 유즙의 체세포 염색방법 중 경검시 혈액세포 와 상피세포의 감별이 용이하고, 염색에 소요 되는 시간이 가장 짧았다.
Maisi (15)와 Schalm 등(19)의 방법에 준하여 광학 현미경으 로 혈액 세포와 상피세포를 분류하였으며 해상력 등급을 4단 계로 구분하여 배경, 체세포, CPS, 지방구의 염색상을 각각 비교하였다(Table 2). 그리고 각 염색법에 대하여 염색의 간 편성, 염색시간 및 비용을 비교하였다.
PYMG stain 할 슬라이드는 고정액 처리 없이 24시간 건조시켰다. 각 슬라이드는 고정 및 건조 후 Wnghfs stain (Youngdong, Korea) (9), Giema stain 용액 (Merck, USA) (4), Diff-Quik solution I (Sysmex, Japan) (20), Newman's stain (22), PYMG stain (17)등의 염색을 실시하였다
Maisi (15)와 Schalm 등(19)의 방법에 준하여 광학 현미경으 로 혈액 세포와 상피세포를 분류하였으며 해상력 등급을 4단 계로 구분하여 배경, 체세포, CPS, 지방구의 염색상을 각각 비교하였다(Table 2). 그리고 각 염색법에 대하여 염색의 간 편성, 염색시간 및 비용을 비교하였다.

대상 데이터

2007년 4월에 전남지역 농가에서 사육되는 젖염소 중 califoria mastitis test (CMT) 음성 및 체세포 10만/ml 이히의 Saanen 종 20두, 40 분방을 대상으로 유두를 알코올로 소독한 다음 처음 2-3 줄기는 짜버린 후 약 20 ml를 채유하여 멸 균된 용기에 받아 아이스박스 안에 넣어 실험실로 운반하여 실험하였다.

이론/모형

Fig 5. Cytological findings of somatic cells by Pyronin Y-methyl green staining method. A, epithelial cell (arrow), x 100; B, blood cells (small arrow), cytoplasmic particle (white arrow), x 100.

성능/효과

5가지 염색법에 대한 염색성은 Table 1과 Fig 1-5에 나타내었다. 5가지 염색법 모두 체세포 내 핵 염색성은 배경과 차이를 보이는데 반해 체세포 내 세포질과 CPS 염색성에서는 PYMG stain이 배경과 뚜렷한 차이를 보였다. 지방구 염색성 은 PYMG stain을 제외한 나머지 4가지 염색법에서 배경과 차이를 보였다.
이 연구에서는 젖염소 유즙 염색 소요시간이 가장 빠르고,체세포 감별이 용이한 염색방법을 알아보기 위하여 현재 혈 액세포 염색에 사용되는 Wright's stain, Giemsa stain, DiffQuik stain, 유즙 염색법인 Newman's stain, PYMG stain을 수행하여 젖염소 유즙의 체세포 염색성을 비교하였다. Maisi (15)와 Schalm 등(19)의 방법에 준하여 광학 현미경으로 혈 액 세포와 상피세포를 분류하고 세포들의 염색성을 관찰 한 결과, 5가지 염색법 모두 세포 내 핵을 뚜렷히 구분 할 수 있었으나, 세포 내 세포질과 CPS 염색성은 PYMG stain에서 배경과 뚜렷한 차이를 나타내고 있음을 확인하였다. 또한 체 세포의 판독에 영향을 미치는 지방구의 경우 PYMG stain에서 지방구가 보이지 않아 눈의 피로도에 미치는 영향이 적었다.
2007년 4월에 전남지역 농장에서 사육되는 젖염소 40 분방 의 CMT 음성 및 체세포 10만/ml 이하 유즙에서 체세포를 Wright's stain, Giemsa stain, Difl-Quik stain, Newman,s stain, 그리고 Pyronin YMethyl Green stain을' 포함한 종 5가지 염색법을 비교하여 다음과 같은 결론을 얻었다. Newman's stain이 젖염소 유즙의 체세포 염색방법 중 경검시 혈액세포 와 상피세포의 감별이 용이하고, 염색에 소요 되는 시간이 가장 짧았다.
(13). 또한 PYMG staine 소요 비용이 가장 높았으며(Table 3), 염색과정이 복잡하고 고정액(Camoy's fixate 용액)도 다른 염색법에서 사용되는 고정액(methanol)과 호환이 불가능 하여 따로 제조해야 하는 어려움이 있으며, 유즙 도말 후 하 루정도 충분히 건조하지 않거나 PYMG 용액에 염색 후 완전히 건조하지 않으면 균질 도포된 재료가 N-Butyl alcohol과 xylene으로 씻어 낼 때 떨어져 나가는 것을 방지하기 위해 충분히 건조해야 하므로 검경까지의 시간이 오래 걸린다는 단점이 인정되었다.
Newman's stain이 배경과 상 피 및 혈구세포의 분류에서 나머지 4가지 염색법보다 해상 력이 우수하였다. 배경과 CPS 감별에서는 PYMG stain이 가장 해상력이 우수하였다. Wright's stain, Giemsa stain, DiffQuik staine 상피, 혈구세포의 분류에서 해상력이 낮았다
유즙 도말에서 검경까지의 염 색과정은 Newman's stain과 Giemsa stain이 8단계로 가장 간 단하고 Wright's stain와 DifleQuik stain이 9단계 였으며 PYMG stain이 12단계로 가장 복잡했다. 유즙 도말 후 검경까지의 염색시간은 Newman's stain과 Diff-Quik stain이 15 분으로 가장 짧았으며 Wright's stain 30분, Giemsa stain 45 분이었고 PYMG staine 하루 도말 건조 후 70분으로 다른 염색법에 비해 많은 시간이 소요되었다. 염색 비용은 Wright's stain, Giemsa stain, Newman's stain, Diff-Quik stain 순으로 저렴하였고 PYMG stain이 가장 고가였다.
5가지 염색법에 대한 염색과정과 염색에 소요되는 시간 및 비용은 Table 3에 나타내었다. 유즙 도말에서 검경까지의 염 색과정은 Newman's stain과 Giemsa stain이 8단계로 가장 간 단하고 Wright's stain와 DifleQuik stain이 9단계 였으며 PYMG stain이 12단계로 가장 복잡했다. 유즙 도말 후 검경까지의 염색시간은 Newman's stain과 Diff-Quik stain이 15 분으로 가장 짧았으며 Wright's stain 30분, Giemsa stain 45 분이었고 PYMG staine 하루 도말 건조 후 70분으로 다른 염색법에 비해 많은 시간이 소요되었다.
이 연구에서 공시한 5가지 염색법에 대한 각각의 해상력 등급은 Table 3에 나타낸 바와 같이 Wright's stain, Giemsa stain, DifTQuik stain은 배경, 핵, 그리고 세포질의 염색차가 크게 나지 않았고 체세포의 핵과 세포질간의 해상력이 매우 떨어져서 상피 및 혈구세포 분류에서 해상력이 낮아 젖염소 유즙 염색방법으로는 적용이 불가능하다고 생각된다. 배경과 CPS 감별에서는 PYMG stain이 현미경 400배상에서도 명확 한 감별이 가능하여 가장 우수하였지만 상피 및 혈구세포를 분류하기는 어려웠다.
이 연구에서 나타난 결과 Newman's stain은 상피 및 혈구 세포 분류가 현미경 1,000배상에서 명확한 감별이 가능하여 다른 4가지 염색법보다 해상력이 가장 우수하였으며 염색과 정이 가장 간단하였고 염색시간도 가장 짧았을 뿐만 아니라 비용 또한 비교적 저렴하였다. 따라서 젖염소유의 체세포 검 사법으로 염색시간, 상피세포와 혈구세포의 감별에서 가장 효율적인 Newman's stain이 적합할 것으로 사료되며 앞으로 젖염소유 유질 검사 및 유방염 진단에 효과적으로 적용 할 것으로 생각된다.
MB stain을 변형한 방법인 Newman's staine 염기성 염색염료로서 DNA와 RNA를 blue로 염색함으로써 세포와 미생물을 구별 할 수 있다(6). 젖염소 유즙에 적용한 결과 배경과 세포질 그리고 CPS 염색차가 나타나지 않았지만 배경, 핵의 색상대 비는 있어 보다 쉽게 구별 할 수 있었다(Fig 4). PYMG stain에서 핵은 black, 세포질은 red, 그리고 배경은 pink로 염색되어 보다 쉽게 CPS의 감별이 가능하다(13).

후속연구

이 연구에서 나타난 결과 Newman's stain은 상피 및 혈구 세포 분류가 현미경 1,000배상에서 명확한 감별이 가능하여 다른 4가지 염색법보다 해상력이 가장 우수하였으며 염색과 정이 가장 간단하였고 염색시간도 가장 짧았을 뿐만 아니라 비용 또한 비교적 저렴하였다. 따라서 젖염소유의 체세포 검 사법으로 염색시간, 상피세포와 혈구세포의 감별에서 가장 효율적인 Newman's stain이 적합할 것으로 사료되며 앞으로 젖염소유 유질 검사 및 유방염 진단에 효과적으로 적용 할 것으로 생각된다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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