목 적 : 염색체 검사는 의학의 많은 영역과 혈액종양학 분야에서 중요한 역할을 하고 있다. 세포의 기능을 잘 유지하면서 장기간 보관할 수 있는 가장 효과적인 방법은 냉동보존(cryopreservation)으로 알려져 있으며, 이는 미래에 신기술을 적용할 수 있고 회귀연구를 가능하게 한다. 이에 본 연구에서는 제대혈에서 분리된 단핵세포의 냉동전과 해동후의 염색체 검사 결과를 비교하고자 한다. 방 법 : 실험에 대한 동의서를 획득한 제대혈 1례가 검사되었다. Ficoll-Hypaue로 단핵세포를 분리하였고, DMSO 등 냉동보존을 위한 전처리 후 프로그램 냉동기(Cryomed 1010, 미국)로 냉동하여 질소탱크($-196^{\circ}C$)에 3일간 보관하였고, 급속냉동 후 염색체 검사를 시행하였다. 냉동전과 해동후의 염색체 핵형을 분석하였다. 결 과 : 1례의 제대혈은 3군으로 나누어, 냉동 전 배양과정 없던 CB-1군은 염색체 핵형 검사가 판독 불가능하였으며, 냉동 전 3일간 배양 후 냉동보관을 하였던 CB-2와 CB-3군은 냉동전과 해동후의 염색체 핵형이 판독 가능하였고, 서로 일치하였다. 결 론 : 검체의 분포 불균형과 검체 수가 적다는 제한점이 있으나, 제대혈에서 냉동전과 해동후의 염색체 핵형이 일치하는 결과에서 제대혈 단핵세포의 유전적 안정성과 장기간 보관의 가능성을 예측할 수 있을 것으로 사료된다.
목 적 : 염색체 검사는 의학의 많은 영역과 혈액종양학 분야에서 중요한 역할을 하고 있다. 세포의 기능을 잘 유지하면서 장기간 보관할 수 있는 가장 효과적인 방법은 냉동보존(cryopreservation)으로 알려져 있으며, 이는 미래에 신기술을 적용할 수 있고 회귀연구를 가능하게 한다. 이에 본 연구에서는 제대혈에서 분리된 단핵세포의 냉동전과 해동후의 염색체 검사 결과를 비교하고자 한다. 방 법 : 실험에 대한 동의서를 획득한 제대혈 1례가 검사되었다. Ficoll-Hypaue로 단핵세포를 분리하였고, DMSO 등 냉동보존을 위한 전처리 후 프로그램 냉동기(Cryomed 1010, 미국)로 냉동하여 질소탱크($-196^{\circ}C$)에 3일간 보관하였고, 급속냉동 후 염색체 검사를 시행하였다. 냉동전과 해동후의 염색체 핵형을 분석하였다. 결 과 : 1례의 제대혈은 3군으로 나누어, 냉동 전 배양과정 없던 CB-1군은 염색체 핵형 검사가 판독 불가능하였으며, 냉동 전 3일간 배양 후 냉동보관을 하였던 CB-2와 CB-3군은 냉동전과 해동후의 염색체 핵형이 판독 가능하였고, 서로 일치하였다. 결 론 : 검체의 분포 불균형과 검체 수가 적다는 제한점이 있으나, 제대혈에서 냉동전과 해동후의 염색체 핵형이 일치하는 결과에서 제대혈 단핵세포의 유전적 안정성과 장기간 보관의 가능성을 예측할 수 있을 것으로 사료된다.
Purpose : The ability to perform chromosome analysis of cryopreserved cord blood mononuclear cells is important for future retrospective studies. We compared the karyotypes of cryopreserved cells with cells before cryopreservation. Methods : One cord blood (CB) sample was obtained from normal health...
Purpose : The ability to perform chromosome analysis of cryopreserved cord blood mononuclear cells is important for future retrospective studies. We compared the karyotypes of cryopreserved cells with cells before cryopreservation. Methods : One cord blood (CB) sample was obtained from normal healthy volunteer. Karyotype analysis was performed before cryopreservation. After mononuclear cell separation with Ficoll-Hypaque, the mononuclear cells were cryopreserved by programmed controlled-rate freezer and then transferred into the liquid nitrogen ($-196^{\circ}C$) for 3 days. After rapid thawing, cytogenetic analysis was performed as the same method for each sample by different conditions. The samples were divided by three groups. The first group was no culture before cryopreservation, the second group was 72 hours culture before cryopreservation, but no 24 hours culture after thawing and the third group was 72 hours culture before cryopreservation and 24 hours culture after thawing. Results : The chromosome analysis was successful in the second and third groups of CB sample. Conclusion : The successful result from CB samples may suggest the usefulness of long-term cryopreservation for retrospective study in various clinical settings including hematologic malignancies.
Purpose : The ability to perform chromosome analysis of cryopreserved cord blood mononuclear cells is important for future retrospective studies. We compared the karyotypes of cryopreserved cells with cells before cryopreservation. Methods : One cord blood (CB) sample was obtained from normal healthy volunteer. Karyotype analysis was performed before cryopreservation. After mononuclear cell separation with Ficoll-Hypaque, the mononuclear cells were cryopreserved by programmed controlled-rate freezer and then transferred into the liquid nitrogen ($-196^{\circ}C$) for 3 days. After rapid thawing, cytogenetic analysis was performed as the same method for each sample by different conditions. The samples were divided by three groups. The first group was no culture before cryopreservation, the second group was 72 hours culture before cryopreservation, but no 24 hours culture after thawing and the third group was 72 hours culture before cryopreservation and 24 hours culture after thawing. Results : The chromosome analysis was successful in the second and third groups of CB sample. Conclusion : The successful result from CB samples may suggest the usefulness of long-term cryopreservation for retrospective study in various clinical settings including hematologic malignancies.
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문제 정의
일반적으로 냉동보존 자체는 유전적 안정성을 크게 저하시키지 않는다고 알려져 있으나 자세한 보고는 많지 않다. 본 연구진은 냉동보존과 관련된 유전성 안정성을 염색체 핵형 검사 결과를 확인하고, 장기간 보존에 적합성을 알아보고자 하였다.
이에 본 연구에서는 제대혈검체에서 분리된 단핵세포의 냉동전과 해동후의 염색체 핵형 분석(karyotype analysis)을 통해 염색체의 변화유무를 비교하고자 한다.
세포의 기능을 잘 유지하면서 장기간 보관할 수 있는 가장 효과적인 방법은 냉동보존 (cryopreservation)으로 알려져 있으며, 이는 미래에 신기술을 적용할 수 있고 회귀연구를 가능하게 한다. 이에 본 연구에서는 제대혈에서 분리된 단핵세포의 냉동전과 해동후의 염색체 검사 결과를 비교하고자 한다.
제안 방법
방법: 실험에 대한 동의서를 획득한 제대혈 1례가 검사되 었다. Ficoll-Hypaue로 단핵세포를 분리하였고, DMSO 등 냉동보존을 위한 전처리 후 프로그램 냉동기(Cryomed 1010, 미국)로 냉동하여 질소탱크(-196℃)에 3일간 보관하였고, 급속 냉동 후 염색체 검사를 시행하였다. 냉동전과 해동후의 염색체 핵형을 분석하였다.
분만 후 제대를 결찰하고 산모 측 제대를 알코올로 소독한후 모체의 혈액이 유입되지 않도록 주의하면서 헤파린 용액이 처리된 20 mL 주사기로 제대혈을 20 mL까지 채혈하였다. 검체 도착 즉시 배양용기에 제대혈 검체 4 mL를 RPMI 1640 배양액 7.5 mL정도로 2회 세척한 후 남은 것을 백혈구 수에 따라 0.5-1.5 mL씩 준비된 배양액(RPMI 1640 7.5 mL, FBS 1.5 mL, 10-5 moL methotrexate 0.1 mL) 시험관 2개에 분할하여 37℃ 배양기에서 다음날까지 17-24시간 배양하였다. 배양 후 배양기에서 꺼내어 RPMI 1640으로 2회 세척 한 다음 남은 침전물에 RPMI 7.
검체를 72시간 냉동 후 실온 또는 37℃ 수조 또는 보육기에서 해동하였다.
Ficoll-Hypaue로 단핵세포를 분리하였고, DMSO 등 냉동보존을 위한 전처리 후 프로그램 냉동기(Cryomed 1010, 미국)로 냉동하여 질소탱크(-196℃)에 3일간 보관하였고, 급속 냉동 후 염색체 검사를 시행하였다. 냉동전과 해동후의 염색체 핵형을 분석하였다.
분만 후 제대를 결찰하고 산모 측 제대를 알코올로 소독한후 모체의 혈액이 유입되지 않도록 주의하면서 헤파린 용액이 처리된 20 mL 주사기로 제대혈을 20 mL까지 채혈하였다. 검체 도착 즉시 배양용기에 제대혈 검체 4 mL를 RPMI 1640 배양액 7.
제대혈 1례가 검사되었다. 제대혈은 3군으로 나누어 실험되었다. 냉동 전 배양과정 없던 CB-1군은 염색체 핵형 검사가 판독 불가능하였으며, 냉동 전 3일간 배양 후 냉동보관을 하였던 CB-2와 CB-3군은 냉동 전과 해동 후의 염색체 핵형이 판독 가능하였고, 서로 일치하였다(Fig.
고정액으로 3회 반복 세척을 하고, 마지막으로 원심분리 후 남은 고정액으로 세포 부유액을 만들었다. 흐르는 물에서 수 차례 세척하고 고정액으로 처리하여 차갑게 준비된 슬라이드에 Pasteur pipette으로 고정된 세포 부유액 2-3방울을 30 cm 정도의 높이에서 낙하시켜 염색체 슬라이드를 만든 후 60℃ dry-oven에서 1시간 동안 완전히 건조시키는 공기건조법으로 표본을 작성하여, 2.5% trypsin 용액과 Wright 염색용액으로 염색하여 중기상 염색체를 관찰하였다. 핵형 분석은 최소 20개 이상의 중기세포를 관찰하였고, Paris conference와 Paris conference supplement, International System for Human Gytogenetic Nonenclature [ISCN, (2005)]방법으로 염색체 분석을 수행하였다.
대상 데이터
경북대학교병원 소아과 염색체 검사실에서 실험에 대한 동의서를 획득한 후 정산 산모 태아에서의 제대혈을 대상으로 하였다.
이론/모형
5% trypsin 용액과 Wright 염색용액으로 염색하여 중기상 염색체를 관찰하였다. 핵형 분석은 최소 20개 이상의 중기세포를 관찰하였고, Paris conference와 Paris conference supplement, International System for Human Gytogenetic Nonenclature [ISCN, (2005)]방법으로 염색체 분석을 수행하였다.
성능/효과
결과: 1례의 제대혈은 3군으로 나누어, 냉동 전 배양과정 없던 CB-1군은 염색체 핵형 검사가 판독 불가능하였으며, 냉동 전 3일간 배양 후 냉동보관을 하였던 CB-2와 CB-3군은 냉동전과 해동후의 염색체 핵형이 판독 가능하였고, 서로 일치하였다.
, 냉동된 세포의 세포유전학적 검사에 대한 보고는 적은 편이며 주로 말초혈액과 골수의 조혈모세포를 중심으로 보고되고 있다. 본 연구에서는 제대혈(1례의 2군) 세포에서 냉동보존 후 염색체 핵형분석을 성공적으로 할 수 있었으며, 냉동전과 해동후의 염색체의 핵형은 서로 일치하였다(Fig. 1).
후속연구
결론 : 검체의 분포 불균형과 검체 수가 적다는 제한점이있으나, 제대혈에서 냉동전과 해동후의 염색체 핵형이 일치하는 결과에서 제대혈 단핵세포의 유전적 안정성과 장기간 보관의 가능성을 예측할 수 있을 것으로 사료된다.
결론적으로 검체의 분포 불균형과 검체 수가 적다는 제한 점이 있으나, 제대혈에서 냉동 전과 해동 후의 염색체 핵형이 일치하는 결과에서 유전적 안정성과 장기간 보관의 가능성을 조심스럽게 예측할 수 있을 것으로 사료된다.
본 제대혈 검체에 대한 연구는 염색체 결과의 비교만 이루어졌고, 생존율, 회복률을 측정하지 않았고, 검체 수가 적어 염색체 검사의 성공률등을 통계적으로 평가하지 못했다. 앞으로 좀더 많은 수의 검체로 세포의 생존율, 염색체의 유사분열 유도 정도, 염색체 분석을 위한 중기분열의 상태에 대한 연구가 필요하겠다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
염색체 검사란?
염색체 검사는 유사분열(mitosis)을 하는 세포를 검사하는 것으로, 분열 능력을 유지할 수 있는 살아있는 세포(viable cell)를 보존하는 것이 필요하다. 세포의 기능을 잘 유지하면서 장기간 보관할 수 있는 가장 효과적인 방법은 냉동보존 (cryopreservation)으로 알려져 있다.
인체 세포유전학은 1956년에 Tijo와 Levan이 정상 인체 염색체 수가 몇개라고 밝혔는가?
인체 세포유전학은 1956년에 Tijo와 Levan1)이 정상 인체 염색체 수가 46개라고 밝힌 이후, 염색체의 구조 및 유전을 연구하는 세포유전학은 의학의 많은 영역에서 중요한 역할을 하고 있다. 이는 선천성 기형을 포함하여 성장 및 발달과 관련된 염색체 이상이 의심되는 경우의 임상 진단(clinical diagnosis), 무월경 여성과 불임 또는 반복되는 유산을 경험하는 부부의 생식 문제(reproductive problems), 고령 산모나 고 위험 산모에서의 산전 진단(prenatal diagnosis), 여러 가지 다형성(polymorphism), 그리고 종양(neoplasia) 연구 분야에 적용되고 있다2).
제대혈에서 분리된 단핵세포의 냉동전과 해동후의 염색체 검사 결과를 비교한 연구의 결론은?
결론 : 검체의 분포 불균형과 검체 수가 적다는 제한점이있으나, 제대혈에서 냉동전과 해동후의 염색체 핵형이 일치하는 결과에서 제대혈 단핵세포의 유전적 안정성과 장기간 보관의 가능성을 예측할 수 있을 것으로 사료된다.
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