유전자 변형 작물은 생산성 측면에서 많은 장점이 있지만 이를 섭취할 경우 잠재적인 위험 요소들에 의해 많은 문제가 대두대고 있다. 본 연구는 저항성유전자를 이입한 배추에서 Profillin, Tubulin-${\alpha}$ (Tub-${\alpha}1$), Heat-shock protein (Bchsp 17.6) and Ubiquitin conjugating enzyme (UBE)의 발현과 이를 30일간 섭취한 마우스에서 ${\beta}$-actin(${\beta}$-act), ${\beta}$-2-microglobulin (B2m), Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) and ${\beta}$-glucuronidase (Gus)의 발현 정도를 RT-PCR을 통해 알아보았다. 실험 결과 저항성유전자를 이입한 배추와 그렇지 않은 배추의 유전자 발현 패턴은 큰 차이를 보이지 앓았으며, 이를 섭취한 마우스 장기에서도 발현에 따른 큰 차이는 나타나지 않았다.
유전자 변형 작물은 생산성 측면에서 많은 장점이 있지만 이를 섭취할 경우 잠재적인 위험 요소들에 의해 많은 문제가 대두대고 있다. 본 연구는 저항성유전자를 이입한 배추에서 Profillin, Tubulin-${\alpha}$ (Tub-${\alpha}1$), Heat-shock protein (Bchsp 17.6) and Ubiquitin conjugating enzyme (UBE)의 발현과 이를 30일간 섭취한 마우스에서 ${\beta}$-actin(${\beta}$-act), ${\beta}$-2-microglobulin (B2m), Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) and ${\beta}$-glucuronidase (Gus)의 발현 정도를 RT-PCR을 통해 알아보았다. 실험 결과 저항성유전자를 이입한 배추와 그렇지 않은 배추의 유전자 발현 패턴은 큰 차이를 보이지 앓았으며, 이를 섭취한 마우스 장기에서도 발현에 따른 큰 차이는 나타나지 않았다.
We used RT-PCR to measure housekeeping gene expression in mice fed GM and non-GM cabbage, in an effort to evaluate the risk of GM food to humans. After normalization of housekeeping gene levels, highly uniform expression may be seen in many organisms during various stages of development and under di...
We used RT-PCR to measure housekeeping gene expression in mice fed GM and non-GM cabbage, in an effort to evaluate the risk of GM food to humans. After normalization of housekeeping gene levels, highly uniform expression may be seen in many organisms during various stages of development and under different environmental conditions. We assessed the expression of four genes in Chinese cabbage; these were Profilin, Tubulin-alpha (Tub-1), Heat-shock protein (Bchsp 17.6), and Ubiquitin conjugating enzyme (UBE). We measured the expression of four well-known housekeeping genes in mice: ${\beta}$-actin, (${\beta}$-act), ${\beta}$-2-microglobulin(B2m), Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) and ${\beta}$-glucuronidase (Gus). Gene expression was measured in liver, stomach, small intestine, large intestine, kidney, and spleen of mice fed GM or non-GM cabbage. No significant expression differences were found.
We used RT-PCR to measure housekeeping gene expression in mice fed GM and non-GM cabbage, in an effort to evaluate the risk of GM food to humans. After normalization of housekeeping gene levels, highly uniform expression may be seen in many organisms during various stages of development and under different environmental conditions. We assessed the expression of four genes in Chinese cabbage; these were Profilin, Tubulin-alpha (Tub-1), Heat-shock protein (Bchsp 17.6), and Ubiquitin conjugating enzyme (UBE). We measured the expression of four well-known housekeeping genes in mice: ${\beta}$-actin, (${\beta}$-act), ${\beta}$-2-microglobulin(B2m), Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) and ${\beta}$-glucuronidase (Gus). Gene expression was measured in liver, stomach, small intestine, large intestine, kidney, and spleen of mice fed GM or non-GM cabbage. No significant expression differences were found.
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문제 정의
본 연구는 이러한 GM 작물의 안전성 측면에서 해충 저항성 유전자를 이입한 배추(Brassica camperstris)에서 저항성 유전자가 직간접으로 미치는 이외의 다른 유전자의 발현을 확인 해 보았으며, 이를 섭취한 마우스의 장기에서 housekeeping gene의 발현을 RT-PCR을 통하여 알아보고자 하였다.
제안 방법
GM 배추와 non-GM 배추를 사료로 만들어 이를 섭취한 마우스의 각 장기에서의 housekeeping gene의 발현 패턴을 알아보았다. Housekeeping gene인 P-actin (p-act), P-2-mkroglobulin Gycraldeltyde-3-0iosphate dehydrogenase (GAPDH), P-glucuronidase (Gus) 등 4종에 대한 각 장기별 발현을 알아본 결과 간(liver), 대장(large intestine)의 경우
적출된 장기는 액체질소를 이용하여 급속 동결을 하였으며, 동결 후 -70。(3에 보관 후 RNA 분리를 실시하였다. 동결된 조직을 막자사발을 이용하여 미세하게 분쇄한 후, Tri-Reagent (MRC, USA)를 이용하여 RNA를 획득하였다. 작물 및 마우스의 장기 에서 획 득된 RNA는 RT kit (Intron, Korea) 을 이용하여 reverse transcription 반응을 실시하였으며, PCR 반응 조건은 94℃ (30”), 55℃ (30”), 72℃ (30”)의조건으로 32 cycle을 실시하였다.
마우스에서의 RNA 분리는 각 장기별로 housefceping gene의 변화정도를 확인하였다. 장기 적출은 마취 후 복강을 절개 후 간, 위, 소장, 대장, 신장의 순으로 적출 하였다.
마우스 (3 mouse/cage)는 BALB/c 5-6주령을 사용 하였으며, 경북대학교 농과대학 마우스 사육시설에서 사육을 하였다. 배추를 이용하여 만든 사료는 일반사료와 구별하여 마우스에 섭취도록 하였으며, 30일간 사육하였다.
대두대고 있다. 본 연구는 저항성유전자를 이입 한배 주에서 Profillin, Tubulin-a (Tub-al), Heat-shock protein (Bchspl7.6) and Ubiquitin conjugating enzyme (UBE)의 발현과 이를 30일간 섭취한 마우스에서 B-actin (B-act), 0 -2-rricroglcibulin (B2rr0, Glyceraldehyde-3-ptasphate cfehydrogpiase (GAPDH) and P-glucuronidase (Gus) 의 발현 정도를 RT-PCR을 통해 알아보았다. 실험 결과 저항성유전자를 이입한 배추와 그렇지 않은 배추의 유전자 발현 패턴은 큰 차이를 보이지 앓았으며, 이를 섭취한 마우스 장기에서도 발현에 따른 큰 차이는 나타나지 않았다.
(6). 이는 GM 작물을 섭취한 가축에서의 각종 장기에서이들의 발현 정도를 확인 하였으며, 또한 이를 섭취한 마우스의 주요 장기에서 housekeeping gene의 발현 정도를 RT-PCR을 통하여 알아보았다. 저항성 유전자를 이입한 GM 배추오) non-GM 배추의 Profillin, Tubulin a, Heat-shock protein, Ubiquitin conjugating enzyme 등 4 종의 유전자 발현패턴을 확인해 본 결과 두 그룹 간의 발현의 차이는 크게 나타나지 않았다(Fig.
동결된 조직을 막자사발을 이용하여 미세하게 분쇄한 후, Tri-Reagent (MRC, USA)를 이용하여 RNA를 획득하였다. 작물 및 마우스의 장기 에서 획 득된 RNA는 RT kit (Intron, Korea) 을 이용하여 reverse transcription 반응을 실시하였으며, PCR 반응 조건은 94℃ (30”), 55℃ (30”), 72℃ (30”)의조건으로 32 cycle을 실시하였다. PCR primer로는 배추의 경우 Profillin, Tubulin-a (Tub-al), Heat-shock protein (Bchspl7.
작물에서의 RNA 분리과정은 유전자 이입한 배추와 그렇지 않은 배추를 각각 3개체를 실험실로 운반하여 이들의 잎을 각각 액체질소를 이용하여 냉동상태에서 분쇄한 후, Tri-Reagent (MRC, USA)를 이용하여 RNA 추출 과정을 거쳤다. 마우스에서의 RNA 분리는 각 장기별로 housefceping gene의 변화정도를 확인하였다.
마우스에서의 RNA 분리는 각 장기별로 housefceping gene의 변화정도를 확인하였다. 장기 적출은 마취 후 복강을 절개 후 간, 위, 소장, 대장, 신장의 순으로 적출 하였다. 적출된 장기는 액체질소를 이용하여 급속 동결을 하였으며, 동결 후 -70。(3에 보관 후 RNA 분리를 실시하였다.
대상 데이터
작물 및 마우스의 장기 에서 획 득된 RNA는 RT kit (Intron, Korea) 을 이용하여 reverse transcription 반응을 실시하였으며, PCR 반응 조건은 94℃ (30”), 55℃ (30”), 72℃ (30”)의조건으로 32 cycle을 실시하였다. PCR primer로는 배추의 경우 Profillin, Tubulin-a (Tub-al), Heat-shock protein (Bchspl7.6), Ubiquitin conjugating enzyme (UBE) 등 4 종을 사용하였다(Table 1). 마우스의 경우는 housekeeping gene 을 이용하였는데 사용된 primer로는 P-actin (]3-act), P -2-rnicroglobulin (B2m), Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), B-glucuronidase (Gus) 등 4 종을 사용하였다(Table 2).
만들었다. 마우스 (3 mouse/cage)는 BALB/c 5-6주령을 사용 하였으며, 경북대학교 농과대학 마우스 사육시설에서 사육을 하였다. 배추를 이용하여 만든 사료는 일반사료와 구별하여 마우스에 섭취도록 하였으며, 30일간 사육하였다.
6), Ubiquitin conjugating enzyme (UBE) 등 4 종을 사용하였다(Table 1). 마우스의 경우는 housekeeping gene 을 이용하였는데 사용된 primer로는 P-actin (]3-act), P -2-rnicroglobulin (B2m), Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), B-glucuronidase (Gus) 등 4 종을 사용하였다(Table 2). 유전자 발현 정도의 차이는 gel-doc program (Bio-rad, Italy)을 이용하여 band density를 측정하였으며, PCR이 안된 경우는 분석대상에서 제외하였으며, 통계는 엑셀 프로그램을 이용하여 분석하였다.
실험에 사용한 형질전환 된 배추(Brassica campestris)는곤충저항성 유전자(cry 1A)가 형질전환 되어 있는 배추와 그렇지 않은 배추를 농촌진흥청 생물안전성연구실에서 입수하여 실험에 사용하였다.
데이터처리
마우스의 경우는 housekeeping gene 을 이용하였는데 사용된 primer로는 P-actin (]3-act), P -2-rnicroglobulin (B2m), Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), B-glucuronidase (Gus) 등 4 종을 사용하였다(Table 2). 유전자 발현 정도의 차이는 gel-doc program (Bio-rad, Italy)을 이용하여 band density를 측정하였으며, PCR이 안된 경우는 분석대상에서 제외하였으며, 통계는 엑셀 프로그램을 이용하여 분석하였다.
성능/효과
차이를 받지 않는 것으로 알려져 있다(8). 본 연구에서 또한 부분적으로 유전자의 발현에 차이를 보였지만 전체적으로는 큰 차이를 나타내지 않는 것을 알 수 있었다. 이는 GM 작물의 섭 취 가 housekeeping gene의 발현에 큰 영 향을 주지 않는다는 것을 알 수 있다.
본 연구에서는 GM 작물에서의 4종의 유전자를 선별 하여유전자간의 발현의 차이는 큰 차이를 보이지 않았다. 반면위stomach)의 경우 GM 배추를 섭취한 군에서 GAPDH의 발현이 감소하였으며, Gus의 발현이 높게 나타나는 것을 알 수 있었다.
반면위stomach)의 경우 GM 배추를 섭취한 군에서 GAPDH의 발현이 감소하였으며, Gus의 발현이 높게 나타나는 것을 알 수 있었다. 소장(small intestine)에서는 GM 작물을 섭취한 마우스에서 Gus의 발현이 증가하는 것으로 나타났다.
6) and Ubiquitin conjugating enzyme (UBE)의 발현과 이를 30일간 섭취한 마우스에서 B-actin (B-act), 0 -2-rricroglcibulin (B2rr0, Glyceraldehyde-3-ptasphate cfehydrogpiase (GAPDH) and P-glucuronidase (Gus) 의 발현 정도를 RT-PCR을 통해 알아보았다. 실험 결과 저항성유전자를 이입한 배추와 그렇지 않은 배추의 유전자 발현 패턴은 큰 차이를 보이지 앓았으며, 이를 섭취한 마우스 장기에서도 발현에 따른 큰 차이는 나타나지 않았다.
이는 GM 작물을 섭취한 가축에서의 각종 장기에서이들의 발현 정도를 확인 하였으며, 또한 이를 섭취한 마우스의 주요 장기에서 housekeeping gene의 발현 정도를 RT-PCR을 통하여 알아보았다. 저항성 유전자를 이입한 GM 배추오) non-GM 배추의 Profillin, Tubulin a, Heat-shock protein, Ubiquitin conjugating enzyme 등 4 종의 유전자 발현패턴을 확인해 본 결과 두 그룹 간의 발현의 차이는 크게 나타나지 않았다(Fig. 1).
후속연구
이는 GM 작물의 섭 취 가 housekeeping gene의 발현에 큰 영 향을 주지 않는다는 것을 알 수 있다. 하지만 세포 내 유전자의 발현 과정은 매우 복잡한 네트워크를 구성하기 때문에 보다 많은 연구가 필요한 것으로 사료 된다.
참고문헌 (12)
Blanco-Aparicio, C., Renner, O., Leal, J.F. and Carnero, A. (2007) PTEN, more than the AKT pathway. Carcinogenesis, 28, 1379-1386
Reis, L.F., Van Sluys, M.A., Garratt, R.C., Pereira, H.M. and Teixeira, M.M. (2006) GMOs: building the future on the basis of past experience. Ann. Acad. Bras. Cienc., 78, 667-686
Monastra, G. and Rossi, L. (2003) Transgenic foods as a tool for malnutrition elimination and their impact on agricultural systems. Riv. Biol., 96, 363-384
Deaville, E.R. and Maddison, B.C. (2005) Detection of transgenic and endogenous plant DNA fragments in the blood, tissues, and digesta of broilers. J. Agric. Food Chem., 53, 10268-10275
Gujar, G.T., Kalia, V., Kumari, A., Singh, B.P., Mittal, A., Nair, R. and Mohan, M. (2007) Helicoverpa armigera baseline susceptibility to Bacillus thuringiensis Cry toxins and resistance management for Bt cotton in India. J. Invertebr. Pathol., 95, 214-249
Jain, M., Nijhawan, A., Tyagi, A.K. and Khurana, J.P. (2006) Validation of housekeeping genes as internal control for studying gene expression in rice by quantitative real-time PCR. Biochem. Biophys. Res. Commun.,345, 646-651
Filby, A.L. and Tyler, C.R. (2007) Appropriate 'housekeeping' genes for use in expression profiling the effects of environmental estrogens in fish. BMC Mol. Biol., 8, 10-15
Rodriguez-Mulero, S. and Montanya, E. (2005) Selection of a suitable internal control gene for expression studies in pancreatic islet grafts. Transplantation, 80, 650-652
Mazza, R., Soave, M., Morlacchini, M., Piva, G. and Marocco, A. (2005) Assessing the transfer of genetically modified DNA from feed to animal tissues. Transgenic Res., 14, 775-784
Guerrero, G.G., Russell, W.M. and Moreno-Fierros, L. (2007) Analysis of the cellular immune response induced by Bacillus thuringiensis Cry1A toxins in mice: effect of the hydrophobic motif from diphtheria toxin. Mol. Immunol., 44, 1209-1217
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