선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 본 연구에서는 Ge-132가 CY로 유발된 면역독성에 미치는 영향을 알아보기 위해 Ge-132를 단독 또는 CY와 병용투여 한 후 1차 체액성 면역반응과 접촉성 지연형 과민반응을 측정하였다.
제안 방법
- 실험직전 이 혈청을 5SC에서 30분간 방치하여 불활성화 시켰다. 각 실험동물로부터 얻은 불활성화 혈청 25 pL 를 microtitration tray의 well 에 가하고 PBS로 2배 계열 희석 후, SRBC 용액 25(1L (5 X 10"cells)을 각 well에 첨가하여 37℃에서 2시간 방치시킨 후에 적혈구의 응집여부를 관찰하였고 50% 이상 응집을 일으키는 혈청의 최고 희석도를 1O&로 나타내었다.
- , Japan)를 사용직전에 생리식염수에 용해하여 마우스의 체중 kg당 300. 600 또는 900 ㎎/㎏o] 되도록 1회 경구투여하였다.Ge- 132 와 CY 병용투여군은 cyclophosphamide (CY, Alkyloxan®, (주) 중외제약) 10 또는 50㎎/㎏를 사용 직전에 생리식염수에 용해하여 Ge-132와 동시에 복강내 1회 주사하였다.
- Carboxylethylgermanium sesquioxide (Ge-132)를투여용량과 투여 일 (항원주사 2일 전, 동시에, 또는 항원 주사 2일 후에)을 변화시켜 단독 또는 cyclo- phosphamide(CY)와 병용투여한 후 용혈반형성 세포 수(PFC), 적혈구 응집소가(HA-titer) 및 접촉성 지연형 과민반응을 측정하였다.
- DNFB 감작 2일전 (day-2), 감작일 (day 0), 감작 후 2일째 (day+2)에 Ge-132를 용량별 (300, 600, 900 ㎎/㎏)로 1회 단독 (Fig. 3) 또는 CY (50 ㎎/㎏)와 병용투여 (Fig. 4)하고, DNFB에 대한 접촉성 과민반응은 보문에 따르면 24시간 (Phan叩hak et al., 1974), 48 ~72시간 (Claman and Miller, 1976) 에 최고치를 나타낸다고 하여 차이를 보이고 있는데 본 실험에서는 DNFB로 야기 후 48시간 뒤에 유발된 이종창치 (ear swelling)를 측정하였다.
- 600 또는 900 ㎎/㎏o] 되도록 1회 경구투여하였다.Ge- 132 와 CY 병용투여군은 cyclophosphamide (CY, Alkyloxan®, (주) 중외제약) 10 또는 50㎎/㎏를 사용 직전에 생리식염수에 용해하여 Ge-132와 동시에 복강내 1회 주사하였다.
- Negative group (NC) was sensitized and challenged with vehicle alone. Positive control (PC) and experimental groups were sensitized twice (day 0, day+1) with 0.5% 2.4-dinitro-1 -fluorobenzene (DNFB) and challenged with 0.2% DNFB on day+5 and the ear swelling was measured 48 hrs later. Ge-132 was orally administered on 2nd day before (day—2), simultaneou이y with (day 0) or 2nd day after (day+2) sensitization.
-
3. SRBC 항원 조제 및 면역
면양의 경동맥으로부터 heparin 처리한 주사기로 채혈한 후, 동량의 Alserver's solution (pH 6.7)을 가하여 4℃에 보관한 후 2주 이내에 적혈구 응집소가 와 용혈반형성 세포수 측정을 위한 항원으로 사용하였다.
- 모든 실험동물군의 이종창치 (耳腫脹値)는 mitutoyo engineer's micrometer를 사용하여 최종감작 74시간 후에 마우스의 오른쪽 귀에 동일 부위를 3 회씩 측정하여 그 평균치를 기저치로 하고, 야기시킨 후 48시간 후에 같은 방법으로 측정한 귀 두께의 평균치에서 기저치를 빼어 산출하였다.
- 비장세포의 용혈반형성 세포수(plaque forming cell, PFC)의 측정은 Cunningham (Cunningham and Szenberg, 1968)법을 약간 변형하여 다음과 같이 행하였다. 즉, SRBC 항원주사 후 4일째 (day+4)에 실험동물의 비장을 적출하여 빙냉의 BSS 용액에 넣어 비장세포를 유리시키고 hypotonic shock으로 적혈구를 제거한 후 원심분리 (200 xg, 10 min.
- 사용직전에 이 면양적혈구(SRBC)를 PBS 용액 (pH 7.2)으로 3회 원심분리 (400 g. 5 min, 4℃) 하여세척한 후 SRBC 농도가 2x lO’cells/mL 되도록 PBS용액 으로 부유하여 이 부유액 0.2 mL를 항원 주사일 (day 0)에 모든 실험동물군의 복강내에 주사하여 면역시켰다.
- 사용하였다. 실험동물실의 온도는 21 ~24℃, 습도는 40~60%로 유지하였고, 조명은 12시간 간격으로 조정하였다.
- 즉, SRBC 항원주사 후 4일째 (day+4)에 실험동물의 비장을 적출하여 빙냉의 BSS 용액에 넣어 비장세포를 유리시키고 hypotonic shock으로 적혈구를 제거한 후 원심분리 (200 xg, 10 min. 4℃) 하였다. 상징액을 제거한 후 침전된 비장세포에 일정량의 BBS용액을 가하여 현탁시킨 후 viable cel] 을 trypan blue exclusion method (Mishell and Shiigi, 1980)로 측정하여 1 x [("cells/mL의 비장세포 현탁액으로 만들었다.
- CDTH)을 측정하였다. 즉, 마우스의 복면에 약 3cm, 를 clipper와 면도기를 사용하여 털을 제거한 후 대조군을 제외한 실험동물군의 복면에 실험개시일 (day 0)과 24시간 후(day+1)에 0.5%2, 4-dini- tro-1-fluorobenzene (DNFB) 용액 25 μL을 마우스의 오른쪽 귀 등쪽면에 고루 도포하여 과민반응을 야기시켰으며, 대조군에는 감작 및 야기일에 aceton 과 olive oil (4 : 1) 혼액 인 용매를 같은 방법으로 적용하였다.
- 항원주사 2일전 (day-2), 항원 주사일 (day 0), 항원 주사 후 2일째 (day+2)에 Ge-132를 1회(300, 600, 900 ㎎/㎏) 단독 또는 CY (10 ㎎/㎏)와 병용 투여하고 비장세포 중의 용혈반 생성 세포수 (PFC) 는 1차 면역 후 4일째에 최고에 달하므로 SRBC 항원주사 후 4일째에 PFC수와 적혈구 응집소가 (HA-titer)를 측정하였다(Table 1, Figs. 1, 2).
대상 데이터
- 3~4주령인 ICR 계 암컷 마우스를 유한양행 중앙연구소로부터 분양받아 고형사료와 물을 자유롭게 공급하면서 실험동물실에 적응시킨 후, 건강 상태가 양호한 6~8주령(25 ± 2 g)의 마우스를 실험에 사용하였다. 실험동물실의 온도는 21 ~24℃, 습도는 40~60%로 유지하였고, 조명은 12시간 간격으로 조정하였다.
데이터처리
- 각 실험군의 측정값의 평균과 표준편차를 구하고 모든 실험 결과의 유의성을 Student's t-test에 의해 검정하였다.
이론/모형
- Phanuphak 등(1974)의 방법에 준하여 접촉성 지연형 과민반응(contact-delayed type hypersensiti- vity, CDTH)을 측정하였다. 즉, 마우스의 복면에 약 3cm, 를 clipper와 면도기를 사용하여 털을 제거한 후 대조군을 제외한 실험동물군의 복면에 실험개시일 (day 0)과 24시간 후(day+1)에 0.
- 적혈구 응집소가(hemagglutinin-titer, HA-titer)는 Herrlinger 등(1976)의 방법에 준하여 측정하였다. 즉, SRBC 항원 주사 후 제4일째 (day+4)에 마우스의 안정맥총으로부터 채취한 혈액을 37℃에서 2시간 응고시킨 후, 원심분리 (1,500 xg, 15min, 4℃) 하여 얻은 혈청을 -2(rc에 보관하였다.
성능/효과
- CY 투여군의 경우에는 항원투여시기와 무관하게 대조군에 비하여 감소되었고, 특히 항원주사와 동시 에 (day 0), 그리고 항원주사 후 (day+2) 투여 시에는 유의성 있게 현저히 HA-titer가 낮아졌는데. 이러한 현상은 이미 알려진 CY의 체액성 면역반응을 억제시키는 작용이다(Lagrange et al.
- Fig. 1에서 보는 바와 같이 Ge-132 단독 투여군은 항원주사 2일 후 300㎎/㎏만이 대조군에 비해 유의성 없는 증가를 보이고, 다른 모든 용량 투여군에서는 항원 주사일에 관계없이 용량 의존적으로 유의적 인 증가를 보였다. 이는 Ge-132 투여로 인해 B 세포 기능이 증가되어 채액성 면역반응이 증가되어지는 것으로 생각된다.
- Ge-132 단독 투여군의 적혈구 응집소가 결과를 Table 1에서 보면, 항원투여시기와 무관하게 대조군에 비해 HA-titer가 증가하였으며, 특히 Ge-132 의 600 ㎎/㎏ 투여군에 유의적으로(p<0.05) 증가되었다.
- Ge-132를 단독투여하고 접촉성 지연형 과민반응에 미치는 영향을 Fig. 3에서 보면, 양성 대조군은 용매만으로 감작 및 야기를 시킨 대조군의 이종창치에 비해 높은 수치를 나타내어 생체내에서 DNFB에 대해 특이적으로 반응하는 것을 확인할 수 있었고, Ge-132는 감작시기 및 투여용량에 관계없이 양성대조군에 비하여 이종창치를 유의적으로 감소시켰다.
- 01) 강하게 나타났다. Ge-132을 CY 와병용 투여했을 때 항원 주사 2일 전에 300 및 900㎎/㎏만이 CY 단독 투여군에 비해 유의성 없는 증가를 보였을 뿐, 그 외의 투여군에서는 용량과 투여일에 관계없이 모두 유의적인 증가를 보여 CY 로 유도된 immunoglobulin 합성 억제에 의한 PFC 감소 현상을 효과적으로 저지하는 것으로 보인다.
- 그 결과 Ge-132 단독 투여시 면양적혈구(SRBC) 항원에 대한 HA-titer와 비장세포 중의 PFC 수를 용량 의존적으로 유의성 있게 증가시켰고, DNFB 에대한 접촉성 지연형 과민반응을 억제시키는 작용이 나타났다. 또한 CY투여로 감소된 HA-titer 및 PFC 수가 Ge-132 병용투여로 인하여 대조군에 비슷한 수준까지 회복되었으며 CY로 유발된 접촉성 지연형 과민반응도 억제되었다.
- 나타났다. 또한 CY투여로 감소된 HA-titer 및 PFC 수가 Ge-132 병용투여로 인하여 대조군에 비슷한 수준까지 회복되었으며 CY로 유발된 접촉성 지연형 과민반응도 억제되었다.
- 이는 Ge-132 투여로 인해 B 세포 기능이 증가되어 채액성 면역반응이 증가되어지는 것으로 생각된다. 또한, Fig. 2에서 결과를 보면, CY 투여로 immunoglobulin 합성이 억제되어 PFC가 감소한다고 보고한 논문 (Ahn et al., 1989) 과 같이 본 실험에서도 항원 주사일과 관계없이 비장 세포의 PFC수도 대조군에 비해 감소되었고. 특히 항원 주사후(day+2)에 그 억제 작용이 유의적으로(p<0.
- 이상의 실험 결과, Ge-132는 마우스의 1차 체 액성 면역반응을 증가시키고 접촉성 지연형 과민반응을 억제하며 CY로 유발된 면역독성을 경감시킬 수 있는 것으로 보인다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.