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문제 정의
- 따라서 본 연구에서는 우리나라의 양돈 밀집지 역인 경기지역에 대한 톡소플라즈마병 항체분포조사를 실시하고 PCR을 이용한 톡소플라즈마 특이항원에 대한 감염상태를 조사하여 돼지 톡소플라즈마병의 예방대책에 대한 기초자료를 제공하고자 실험을 실시하였다.
제안 방법
- 10ML를 채혈하여 EDTA(7.5% Vaccu- tainer, UK)가 들어있는 채혈병에 혈액 3ML을 분주하여 DNA 추출재료로 사용하였으며, 나머지 혈액에서 혈청을 분리한 다음 -25℃ 냉장 보관하면서 혈청검사 재료로 사용하였다.
- U형 마이크로플레이트의 각 웰에 완충액 (0.2M 2-amino-2-methyl-l propanol solution, pH 8.0)을 이용하여 가검 혈청 25ML를 1: 16, 1 :32, 1:64배로 희석하고 톡소플라즈마 latex 항원을 25ML씩 분주한 후 실온에서 1 2~15시간 반응시켜 1:32배 이상에서 응집반응이 나타나는 것을 양성으로 판정하였다.
- 증폭산물을 확인하기 위하여 PCR product 10μL를 1.2% agarose gel에 전기영동하여 product size 501bp를 확인하였다 (Fig 1).
- 추출한 DNA와 primer를 상품화 된 PCR premix(Bioneer)를 사용하여 PCR기기 (PTC- 200, MJ research)에 반응시켰으며 시료의 증폭 과정은 먼저 94E에서 4분간 가열하여 변성을 유도하고 94 ℃ 에서 1분간의 denaturation, 52℃에서 1분간 annealing 그리고 72 ℃ 에서 1 분간 extension의 3단계로 총 35회 반복하였으며, 721에서 8분간 더 extension을 실시하였다. 증폭산물을 확인하기 위하여 PCR product 10μL를 1.
- 혈액에서 DNA 추출은 시험관에 histopaque 3ng을 넣고 그 위에 동량의 혈액를 혼합되지 않도록 주입한 다음 l, 300rpm에서 30분간 원심하여 buffy coat 층을 피펫으로 수집한 후 PBS로 3회 세척한 후 시판되는 DNA 추출 킷트(Qiazen)를 이용하여 DNA를 추출하였다
대상 데이터
- Latex 응집반응항원 (국립수의과학검역원 제조)을 이용하여 사용하였으며 다음과 같이 실시하였다.
- 경기지역 33개 돼지농장에서 516두의 혈액 시료를 2007년 3월부터 10월까지 수집하였다. 10ML를 채혈하여 EDTA(7.
성능/효과
- 8%)가 항체 양성을 나타냈으며, 비육돈에서는 358두 중 93두(30%)가 양성으로 모돈 보다 비육돈에 항체 양성율이 높은 것으로 조사되었다. Latex 응집반응 양성 돼지 대한 혈액 중 Toxoplasma PCR 검사 결과 118두 중 68두(58%)에서 양성으로 조사되었다.
- Latex 응집반응 양성개체에 대한 백혈구 중 Toxoplasma 특이 DNA PCR 검사 결과톡소플라즈마 항체양성 118두 중 68두에서 양성으로 조사되었다(Table 3).
- Latex 응집반응법으로 조사한 경기지역의돼지톡소플라즈마 항체보유 검사결과 516두 중 118두(22.9%)에서 항체양성을 나타냈으며, 종돈장에서는 185두 중 26두(14.1%)에서 양성으로 일반농장에서는 331두 중 92두(27.8%)가 양성으로 나타나 종돈장이 일반농장보다 항체양성율이 낮았다(Table 1).
- Latex 응집반응에서 총 516두 중 118두 (22.9%)가 항체양성을 나타냈으며, 종돈장에서는 185두 중 26두(14.1%), 일반농장에서는 331두 중 92두(27.8%)가 항체양성을 나타내 종돈 장이 일반농장보다 양성비율이 낮은 것으로 조사되었다. 항체양성을 연령별로 구분한 결과 모돈에서는 158두 중 25두(15.
- 5일~5일부터 혈액 중충체의 DNA가 검출될 수 있으며 10일 이후부터 혈중항체가 출현함과 동시에 혈액 중에 DNA 검출이 소실되는 것으로 보고되었다 7, 11, 14). pcR 기법을 통하여 초기 감염 및 발증기에 대한 구별이 가능한 것으로 판단되어본 실험에서 Latex 항체 양성개체에 대한 충체 특이 DNA 검사결과 비육돈에서 63두 (67.7%), 모돈에서 5두(20%)가 양성반응으로 확인되어 비육돈에서는 parasitemia 등으로톡소플라즈마 충체가 순환 감염되고 있으며, 모돈에서는 비교적 만성감염상태를 유지하는 것으로 추정된다.
- 또한 모돈과 비육돈에 대한 항체보유 비교 결과 모돈에서는 158두 증 25두가 양성으로 판정되어 양성율이 15.8%이었으나, 비육돈에서는 358두 중 93두(30%)가 양성으로 나타나모돈 보다 비육돈의 항체양성율이 높은 것으로 조사되었다(Table 2).
- 또한 본 실험에서 모돈과 비육돈에서 항체 양성율 비교 결과 모돈에서 15.8%이고 비육돈에서 26.8%인 것으로 나타나 농가에서 환경위생관리 및 방역관리에 따라 항체양성율에 차이가 있는 것으로 사료된다. 이러한 위생관리를 위한 주요사항으로 Kijlstra 등(3) 은 고양이와 설치류 등에 대한 차단을 효과적으로 하는 무창돈사 등 현대식 양돈 시설에는 톡소플라즈마병 감염율을 낮출 수 있다고 지적한 바와 같이 농장에서 톡소플라즈마 원충이 돼지에 감염하는 것을 막기 위해서는 농장 주변의 야생고양이 왕래를 차단하여 감염 고양이의 분변이 사료나 음용수에 오염되는 것을 막어야 하며, 폐사한 동물은 즉시 제거하고 분만 후 태반을 돼지나 다른 동물이 섭식하지 않도록 하여야 할 것으로 판단된다.
- 또한 종돈장에 대한 항체 양성율은 이 등이 경남지역에서 6개 종돈장에서 194두 검사하여 91두(46.9%)인 것으로 조사 보고되었으나 % 경 기지역 에서는 9개 종돈장 185두 검사 결과 14.1%인 것으로 나타나 종돈장의 항체양성율이 크게 낮은 것으로 나타났으나 일반 농장의 경우 항체 양성율이 27%로 타 지역에 비해 약간 높게 나타났다.
- 본 실험 결과 돼지 톡소플라즈마병이 국내에 폭넓게 분포하고 있는 것으로 조사 되었다. 이러한 톡소플라즈마병에 대한 근절 및 피해 예방을 위하여 역학조사 및 예방백신 개발 등보다 광범위한 연구가 필요한 것으로 생각되며, 또한 톡소플라즈마병이 인수공통전염병 임을 감안하여 인체에 미치는 영향과 예방 대책에 대한 효과적인 대처방안이 수립되어져야할 것이라고 생각된다.
- 8%)가 항체양성을 나타내 종돈 장이 일반농장보다 양성비율이 낮은 것으로 조사되었다. 항체양성을 연령별로 구분한 결과 모돈에서는 158두 중 25두(15.8%)가 항체 양성을 나타냈으며, 비육돈에서는 358두 중 93두(30%)가 양성으로 모돈 보다 비육돈에 항체 양성율이 높은 것으로 조사되었다. Latex 응집반응 양성 돼지 대한 혈액 중 Toxoplasma PCR 검사 결과 118두 중 68두(58%)에서 양성으로 조사되었다.
후속연구
- 되었다. 이러한 톡소플라즈마병에 대한 근절 및 피해 예방을 위하여 역학조사 및 예방백신 개발 등보다 광범위한 연구가 필요한 것으로 생각되며, 또한 톡소플라즈마병이 인수공통전염병 임을 감안하여 인체에 미치는 영향과 예방 대책에 대한 효과적인 대처방안이 수립되어져야할 것이라고 생각된다.
- 경남, 전남 및 제주 등 일부 지역 에서 톡소플라즈마병 에 대한 실태조사가 이루어졌으나8-10) 전국적인 조사나 연구는 매우 미진한 실정이다. 톡소플라즈마병이 사람과 동물 모두에서 질병을 일으키는 병원체로서의 중요성과 특히 육류의 공급원으로 돼지고기를 많이 소비하는 우리나라로서는 톡소플라즈마 원충이 돼지에 미치는 영향과 피해에 대한 지속적인 조사와 연구가 필요한 것으로 생각된다.
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