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문제 정의
- 따라서 본 연구는 육상 수조 양식장이 조밀하게 분포하고 있는 제주도 동부 연안 양식장을 대상으로 사육용수, 양어 사료, 양식어류를 채집하여 위생지표세균, 병원성 비브리오, 식중독 원인 세균인 포도상 구균, 살모넬라 등을 모니터링하여 미생물학적 오염도를 조사하였다.
제안 방법
- 의 선택 배지인 Manitol salt agar에 도말하여 37°C에서 24시간 배양한 후 mannitol 분해능이 있는 황색 불투명 집락과 주변에 혼탁한 백색 환이 있는 집락에 대해 확인 실험을 실시하였다. 그리고 확인 시험으로 Gram 염색을 실시하여 포도상의 배열을 갖는 그람 양성 구균을 확인하였다.
- , Salmonella spp., Vibrio para- haemolyticus, Staphylococcus aureus, Bacillus cerezzs를 조사 하였다. 이번 연구를 수행하는 동안 동부지역은 집중적인 호우로 인해 전년보다 400 mm 이상의 많은 강우량을 나타내었다.
- B. cereus 균주에 대한 시험은 Mannitol을 분해하지 못하여 분홍색 colony 를 형성하고 또한 난황양성 반응 (Lecithinase 반응)에 의 한 colony 주변에 백택환을 형성하는 원리를 이용하여 채취된 시료 1 ml를 취하여 Mannitol-Egg yolk-Polymixin agar (OXOID, ENGLAND)에 도말하여 30°C에서 24시간 배양하여 확인하였다.
- coli O157:H7의 선택배지인 MacConkey Sobitol agar (Difco, USA)에 접종하여도 말한 후 37°C에서 24시간 배양한 후, sorbitol을 분해하지 못하는 white colony를 취하여 실험에 사용하였으며, 확인시험은 Eosin Methylene Blue agar (EMB agar; BBL, USA)를 사용하여 확인하였다. EMB agar에서 의심되는 균주는 Gram staining, Triple sugar iron (TSI; Difco) test, Indole, Methyl red, Voges proskayer, citrate utilization (IMViC) test, Lysine decarboxylase, Motility test를 실시하여 동정하였다. 최종 분리된 균은 API 20E kit (bioMerieux, France)를 사용하여 최종 확정 시험을 실시하였다.
- 85% 생리 식염수 9 ml에 넣고 균질화시킨 후 단계별 희석하여 미생물 검사를 하였다. 고형의 양어 사료는 0.85% 생리식염수에서 균질화시킨 후 여과지를 이용하여 여과한 후 여과액 1 ml의 시료를 단계적으로 희석하여 미생물을 검사하였다.
- 균의 분리는 각 단계적으로 희석 되어진 시료를 EC broth (BD, USA)에 접종 하여 37°C의 항온수조에서 24시간의 증 균과 정을 거친 후 동정에 사용하였고, E. coli O157:H7의 선택배지인 MacConkey Sobitol agar (Difco, USA)에 접종하여도 말한 후 37°C에서 24시간 배양한 후, sorbitol을 분해하지 못하는 white colony를 취하여 실험에 사용하였으며, 확인시험은 Eosin Methylene Blue agar (EMB agar; BBL, USA)를 사용하여 확인하였다. EMB agar에서 의심되는 균주는 Gram staining, Triple sugar iron (TSI; Difco) test, Indole, Methyl red, Voges proskayer, citrate utilization (IMViC) test, Lysine decarboxylase, Motility test를 실시하여 동정하였다.
- #의 선택 배지인 Manitol salt agar에 도말하여 37°C에서 24시간 배양한 후 mannitol 분해능이 있는 황색 불투명 집락과 주변에 혼탁한 백색 환이 있는 집락에 대해 확인 실험을 실시하였다. 그리고 확인 시험으로 Gram 염색을 실시하여 포도상의 배열을 갖는 그람 양성 구균을 확인하였다. 그리고 Strepfococms spp.
- 본 연구는 2007년 6월부터 10월까지 제주도에서 양식장이 가장 많이 밀집되어 있는 제주도 동부 연안에 위치한 양식장 4개소를 대상으로 하여 사육 용수, 양어 사료, 양식 넙치의 미생물학적 오염도를 조사하였다.
- 1 ml를 Salmonella spp. 분리배양 배지인 MacConkey agar (Difco, USA)에 도말하여 35°C에서 24시 간 배 양하여 자란 무색투명한 colony를 선택하여 확인시험을 하였다. 확인시험은 Triple Sugar Iron Agar (Difco, USA)를 사용하여 실시하였으며, API 20E kit로 동정하였다.
- 사육 용수는 채취한 시료의 1 ml을 취하여 9 ml의 멸균된 0.85% 생리식염수에 단계별 희석하여 미생물 검사에 사용하였으며, 양식 어류의 미생물 검사를 위해서 넙치를 무균적으로 해부를 한 후 신장 및 간 부위를 1 g씩 멸균된 0.85% 생리 식염수 9 ml에 넣고 균질화시킨 후 단계별 희석하여 미생물 검사를 하였다. 고형의 양어 사료는 0.
- 청녹색 단일 집락을 확인 한 후 생화학 시험을 실시하였고, API 20NE을 사용하여 동정하였다.
- EMB agar에서 의심되는 균주는 Gram staining, Triple sugar iron (TSI; Difco) test, Indole, Methyl red, Voges proskayer, citrate utilization (IMViC) test, Lysine decarboxylase, Motility test를 실시하여 동정하였다. 최종 분리된 균은 API 20E kit (bioMerieux, France)를 사용하여 최종 확정 시험을 실시하였다.
- 분리배양 배지인 MacConkey agar (Difco, USA)에 도말하여 35°C에서 24시 간 배 양하여 자란 무색투명한 colony를 선택하여 확인시험을 하였다. 확인시험은 Triple Sugar Iron Agar (Difco, USA)를 사용하여 실시하였으며, API 20E kit로 동정하였다.
대상 데이터
- 2007년 6월부터 10월까지 제주도 동부 지역에서 성업 중인 육상 수조식 넙치 양식장 4개소를 대상으로 하였다.
- (DAIHAN, KOREA)을 이용하여 채집하였다. 검사용 양식어류는 건강한 어류(넙치)를 대상으로 채집하여 즉살시킨 후 Polyprolene bag에 담아 얼음을 채운 스티로폼 용기에 넣고, 실험실로 운반한 후 분석시료로 사용하였다.
- 사육용수(유입수, 사육수, 배출수)는 1 1 무균채수병(Y&K, KOREA)을 사용하여 현장에서 채수하였고, 양어사료로 쓰이는 배합건조사료(expansion or extruded pellet, EP)와 배합습사료(moist pellet, MP)는 샘플수거용 위생백인 Polyprolene bag (DAIHAN, KOREA)을 이용하여 채집하였다. 검사용 양식어류는 건강한 어류(넙치)를 대상으로 채집하여 즉살시킨 후 Polyprolene bag에 담아 얼음을 채운 스티로폼 용기에 넣고, 실험실로 운반한 후 분석시료로 사용하였다.
이론/모형
- 각 시료에 대해 일반 세균인 경우 Marine agar (Difco, USA), 대장균군의 경우 Micriobiology Chromocult Coliformen agar (Merck, Germany)를 사용하여 제조회사의 방법에 따라 측정하였다.
성능/효과
- parahaemolyticus, Salmonella spp., S. aureus, B. cerens가 빈번하게 검출되었고, 양어 사료의 경우 Salmonella spp, S. aureus, B. cere*s는 각각 0~4.3xl03 CFU/ml, 0~2.7xl04 CFU/mlz 0~7.6xl03 CFU/ml검출 되었다. 또한 양식 넙치의 미생물 검사 결과 적은 양이지만 Salmonella spp.
- 조사 양식장 4개소 모두 일반해수와 지하 해수를 혼용하여 사육용수로 사용하고 있다. J1 양식장의 사육용수의 미생물 검사 결과 장염 비브리오균인 V. para- hnemolyticiis는 8월부터 10월까지의 검사 결과 사육수와 배출수에서 4.0x102~3.4x103 CFU/ml가 검출되었다. Salmonella spp.
- #의 경우 사료가공실과 수조입구가 연결되어 있어 해수의 높은 습도에 의해 사료를 보관하는 과정 에서 검출된 것으로 사료되며, 작업자들은 위생에 좀 더 주위를 기울여야 할 것이다. J2, J3, J4 의 경우 MP 사료를 사용하고 있었으며 양어 사료 미생물 검사 결과 Salmonella spp.z S. aureus, B. ceres가 빈도 높게 나타났다. 또한 총 대장균군과 E.
- 0xl02 CFU/ml이 검출되었다. 또한 8월부터 10월에 조사한 결과에서도 사육수와 배출수에서 검출되었는데 이는 조사 기간동안 전년에 비해 400 mm 이상의 많은 비가 내렸고 집중 호우도 빈번히 발생하여 많은 강우량에 의한 담수 및 유기물의 유입으로 검출된 것으로 사료된다. 6월에 사육 수와 배출수에서 S.
- , Vibrio para- haemolyticus, Staphylococcus aureus, Bacillus cerezzs를 조사 하였다. 이번 연구를 수행하는 동안 동부지역은 집중적인 호우로 인해 전년보다 400 mm 이상의 많은 강우량을 나타내었다. 사육 용수의 검사결과 V.
- 이번 조사 결과로 보아 미생물학적 위해요소는 양식장의 작업 환경 이나 주변 환경 등의 환경적 요인이 크게 작용하는 것으로 사료되며, 양식장의 위생관리에 작업자들은 주의를 기울여야 할 것으로 생각된다. 앞으로 이와 관련하여 수산물위생에 대한 좀 더 체계적인 시스템을 도입하여 적용한다면 수산물에서 야기되는 문제점들이 해결되어 제주도의 청정브랜드의 이미지를 더욱 부각시킬 수 있으며, 안전하고 깨끗한 수산물의 생산이 가능할 것으로 생각된다.
후속연구
- 할 것으로 생각된다. 앞으로 이와 관련하여 수산물위생에 대한 좀 더 체계적인 시스템을 도입하여 적용한다면 수산물에서 야기되는 문제점들이 해결되어 제주도의 청정브랜드의 이미지를 더욱 부각시킬 수 있으며, 안전하고 깨끗한 수산물의 생산이 가능할 것으로 생각된다.
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