본 연구에서는 H. pylori의 감염을 예방하고 치료보조제로 사용할 목적으로 포유동물을 통한 피동면역용 항체를 생산하고자 하였다. 따라서 anti-H. pylori 항체를 함유한 면역우유 생산용 백신개발에 기초자료를 얻고자 H. pylori의 면역성과 면역독성에 관한 실험을 수행하였다. 백신을 반복해서 투여했을 때 야기될 수 있는 알레르기 및 과민반응을 예측하고, 페니실린 쇼크와 같은 심각한 부작용 및 독성유발 가능성을 검색하기 위하여 백신의 면역독성을 평가하였다. 전신성 anaphylaxis 쇼크반응의 유무를 평가하기 위해 각 군당 5마리의 guinea pig에 감작투여한 후 최종감작 1주와 2주째에 귀정맥(ear vein)으로 야기항원을 투여하였다. anaphylaxis 쇼크 반응 시험에서 5마리 중 1마리가 양성반응을 나타낸 경우 의약품의 안전성 평가라는 관점에서는 양성으로 판정한다[11]. H. pylori의 WC항원에 대한 1차 및 2차 야기항원 투여 후 전신성 anaphylaxis 쇼크반응에 대한 관찰 결과는 다음과 같다. H. pylori의 WC에 대한 anaphylaxis 쇼크반응은 WC (H) $60\;{\mu}g/100\;{\mu}l$의 항원농도에서 1차, 2차 야기항원 투여 모두 경증의 증상을 나타내었고, WC (L) $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$의 항원농도에서는 아무런 anaphylaxis 쇼크 증상이 관찰되지 않았다. 그리고 crude urease에 대한 anaphylaxis 쇼크반응은 항원농도가 $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$의 urease (L)와 $60\;{\mu}g/100\;{\mu}l$의 urease (H) 모두에서 아무런 증상도 관찰되지 않았다. Guinea pig-rat를 이용한 PCA 시험에서는 WC (H), WC (L), urease (H), urease (L) 투여군 모두에서 양성반응이 나타나지 않았다. 피부감작성 시험에서는 항원농도에 따라 각각 $80\;{\mu}g/100\;{\mu}l$, $40\;{\mu}g/100\;{\mu}l$, $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$, $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$ 일 때 피부이상 증상 즉, 피부 트러블이 발생하지 않는 최고의 항원농도는 $40\;{\mu}g/100\;{\mu}l$인 것으로 관찰되었다. 결론적으로 항원성 시험에서 H. pylori로부터 분리된 urease 항원이 WC 항원보다 면역독성 측면에서 좀 더 안전할 것으로 조사되었다.
본 연구에서는 H. pylori의 감염을 예방하고 치료보조제로 사용할 목적으로 포유동물을 통한 피동면역용 항체를 생산하고자 하였다. 따라서 anti-H. pylori 항체를 함유한 면역우유 생산용 백신개발에 기초자료를 얻고자 H. pylori의 면역성과 면역독성에 관한 실험을 수행하였다. 백신을 반복해서 투여했을 때 야기될 수 있는 알레르기 및 과민반응을 예측하고, 페니실린 쇼크와 같은 심각한 부작용 및 독성유발 가능성을 검색하기 위하여 백신의 면역독성을 평가하였다. 전신성 anaphylaxis 쇼크반응의 유무를 평가하기 위해 각 군당 5마리의 guinea pig에 감작투여한 후 최종감작 1주와 2주째에 귀정맥(ear vein)으로 야기항원을 투여하였다. anaphylaxis 쇼크 반응 시험에서 5마리 중 1마리가 양성반응을 나타낸 경우 의약품의 안전성 평가라는 관점에서는 양성으로 판정한다[11]. H. pylori의 WC항원에 대한 1차 및 2차 야기항원 투여 후 전신성 anaphylaxis 쇼크반응에 대한 관찰 결과는 다음과 같다. H. pylori의 WC에 대한 anaphylaxis 쇼크반응은 WC (H) $60\;{\mu}g/100\;{\mu}l$의 항원농도에서 1차, 2차 야기항원 투여 모두 경증의 증상을 나타내었고, WC (L) $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$의 항원농도에서는 아무런 anaphylaxis 쇼크 증상이 관찰되지 않았다. 그리고 crude urease에 대한 anaphylaxis 쇼크반응은 항원농도가 $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$의 urease (L)와 $60\;{\mu}g/100\;{\mu}l$의 urease (H) 모두에서 아무런 증상도 관찰되지 않았다. Guinea pig-rat를 이용한 PCA 시험에서는 WC (H), WC (L), urease (H), urease (L) 투여군 모두에서 양성반응이 나타나지 않았다. 피부감작성 시험에서는 항원농도에 따라 각각 $80\;{\mu}g/100\;{\mu}l$, $40\;{\mu}g/100\;{\mu}l$, $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$, $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$ 일 때 피부이상 증상 즉, 피부 트러블이 발생하지 않는 최고의 항원농도는 $40\;{\mu}g/100\;{\mu}l$인 것으로 관찰되었다. 결론적으로 항원성 시험에서 H. pylori로부터 분리된 urease 항원이 WC 항원보다 면역독성 측면에서 좀 더 안전할 것으로 조사되었다.
The anaphylaxis shock reaction on the whole cells of H. pylori exhibited a symptom of slight illness for the first and second medication of causing antigen at an antigen concentration of WC (H) $60\;{\mu}g/100\;{\mu}l$ for WC (H) and no anaphylaxis shock symptom was observed at an antigen...
The anaphylaxis shock reaction on the whole cells of H. pylori exhibited a symptom of slight illness for the first and second medication of causing antigen at an antigen concentration of WC (H) $60\;{\mu}g/100\;{\mu}l$ for WC (H) and no anaphylaxis shock symptom was observed at an antigen concentration of $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$ for WC (L). In the case of anaphylaxis shock reaction on the crude urease, no symptom was observed at an antigen concentration of $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$ for both urease (L) and urease (H). In the heterologous passive cutaneous anaphylaxis (PCA) test using a guinea pig-rat, no positive reaction was detected in all the medication groups of WC (H), WC (L), urease (H) and urease (L). In the skin sensitization test, it was observed that the best antigen concentration not causing skin disorder at each of $80\;{\mu}g/100\;{\mu}l$, $40\;{\mu}g/100\;{\mu}l$, $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$, and $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$ was $40\;{\mu}g/100\;{\mu}l$.
The anaphylaxis shock reaction on the whole cells of H. pylori exhibited a symptom of slight illness for the first and second medication of causing antigen at an antigen concentration of WC (H) $60\;{\mu}g/100\;{\mu}l$ for WC (H) and no anaphylaxis shock symptom was observed at an antigen concentration of $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$ for WC (L). In the case of anaphylaxis shock reaction on the crude urease, no symptom was observed at an antigen concentration of $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$ for both urease (L) and urease (H). In the heterologous passive cutaneous anaphylaxis (PCA) test using a guinea pig-rat, no positive reaction was detected in all the medication groups of WC (H), WC (L), urease (H) and urease (L). In the skin sensitization test, it was observed that the best antigen concentration not causing skin disorder at each of $80\;{\mu}g/100\;{\mu}l$, $40\;{\mu}g/100\;{\mu}l$, $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$, and $20\;{\mu}g/100\;{\mu}l$ was $40\;{\mu}g/100\;{\mu}l$.
* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.
문제 정의
본 시험법은 항원으로 감작시켜 얻은 Guinea pig 항혈청을 rat의 배부 피내에 수동면역시킨 후 항원을 정맥 내에 주사하여 조직 친화성 항체(IgE)의 역가를 알아 보았다. 각 항혈청을 희석하여 피내주사하고 항원과 Evans Blue 혼합액을 정맥 주한 결과, 양성대조군인 BSA (L)에서는 개체에 따라 23 〜26배,BSA (H)는 25〜26배 희석배율까지 5mm 이상 크기의 청색반점을 나타내었다(Table 6, 7).
본 실험에서는 투여하고자 하는 항원의 감작항원량을 결정하기 위하여 WC 항원과 urease 항원을 피내 감작시킨 후 염증이나 이상반응이 발생하지 않는 최고 농도를 알아보고 그 농도를 결정하고자 하였다. 실험결과 WC와 urease 항원 모두 20㎍/100㎕의 농도에서 피부 이상증상 반응을 나타내지 않았으며, 항원농도 80㎍/100㎕와 40㎍/100㎕에서는 염증증상은 아니지만 붉은 반점의 이상증상을 나타내는 것을 볼 수 있었다.
제안 방법
감작에 이용한 용량은 투여용량 중 고용량을 적용하였다. 1차와 2차 야기 항원 투여 후 30분간 전신의 증상을 관찰하고 anaphylaxis 쇼크반응을 판정기준에 따라 판정하여 기록하였다[12].
Guinea pig-rat를 이용한 heterologous passive cutaneouse anaphylaxis(PCA) 시험 Guinea pig을 이용한 항혈청 생산 Anaphylaxis 시험에서 감작시킨 guinea pig으로부터 최종감작 1주 후 채혈하고 실온에 3시간 응고시킨 후 원심분리하여(3,000 x g, 10min) 혈청을 얻었다. 분리한 혈청은 다음 시험까지 -70°C에 보관하여 사용하였다.
본 연구에서는 anti-H. pylori 항체생산을 위한 백신개발과 백신을 반복투여 했을 때 야기될 수 있는 알레르기 및 과민반응을 예측하고, 페니실린 쇼크와 같은 심각한 부작용 및 독성유발 가능성을 검색하기 위하여 안전성 평가의 일환으로 항원성 시험을 실시하였다.
고용량군으로 나누어 감작시켰다. 감작항원량은 20㎍/100㎕의 농도로 adjuvant(FCA, Sigma.F5506)와 동량으로 emulsion하여 등쪽 피하에 1차 감작투여 하였다. 추가 감작 투여는 1차감작 투여 후 2주 간격으로 총 3회 실시하였다[6].
실험결과 WC와 urease 항원 모두 20㎍/100㎕의 농도에서 피부 이상증상 반응을 나타내지 않았으며, 항원농도 80㎍/100㎕와 40㎍/100㎕에서는 염증증상은 아니지만 붉은 반점의 이상증상을 나타내는 것을 볼 수 있었다. 따라서 피부 이상증상이 발생하지 않는 최고의 농도를 20㎍/100㎕로 결정하고 가장 적합한 감작항원 농도로 결정하였다(Fig 1).
본 시험에서는 시험 동물을 각 군당 5마리씩 나누어 Table 1과 같이 정상군, 대조군, 양성대조군, 시험물질 투여군으로 설정하였으며, 양성대조군 및 시험물질 투여군은 저 용량군과 고용량군으로 나누어 감작시켰다. 감작항원량은 20㎍/100㎕의 농도로 adjuvant(FCA, Sigma.
본 실험에서는 1차 야기투여 시 양성대조군인 BSA (H) 투여군에서는 중증인 코를 문지르거나 핥음, 재채기, 배뇨, 보행 불안, 횡와 증상과 3마리가 사망에 이르는 현상을 나타내었다. BSA (L) 투여군에서도 중증인 핥음, 재채기, 배뇨, 보행 불안, 횡와 증상과 1마리가 사망에 이르는 것을 관찰할 수 있었다.
pylori 균주는 한국유전자은행으로부터 KCTC 12083을 분양 받아 사용하였다. 분양 받은 균주는 37°C, CO2 농도 10% 환경에서 5% fetal bovine serum (FBS)과 항생제(H pylori selective supplement(Oxoid, SROM4E, England))가 포함된 Brucella agar plate에서 2〜3일 간격으로 계대배양 하였다. 계대배양으로 활성화된 균주는 Brucella broth에서 48〜72시간 동안 액체배양 하였다[13,15].
주사부위에 출현한 청색 반점의 생성여부를 관찰하여 청색 반점의 직경((장경+단경)/2)이 5mm 이상이면 양성으로 간주하고, 양성을 나타내는 가장 마지막 혈청 희석액의 희석배수를 최대 희석배수로 하였으며, 그 혈청의 최종 항체역가로 정하여 anaphylaxis와 관련이 있는 IgE가 생성되는 것으로 판정하였다.
최종감작투여 1주와 2주 후 야기항원을 귀정맥 내 투여하여 anaphylaxis 쇼크증상의 발현유무를 알아보았다. 감작에 이용한 용량은 투여용량 중 고용량을 적용하였다.
F5506)와 동량으로 emulsion하여 등쪽 피하에 1차 감작투여 하였다. 추가 감작 투여는 1차감작 투여 후 2주 간격으로 총 3회 실시하였다[6].
피내투여 24시간 후, 야기항원과 Evan's blue 1:1 혼합액(5mg/1 ml/body)을 꼬리정맥 내로 투여하였고, 30분 경과 후 CO2 가스로 마취시킨 후 경동맥 부위를 가위로 잘라 실혈치사시켰다. 치사시킨 guinea pig을 배부위 피부를 절취하여 뒷면으로부터 청색반점(Blue spot)을 확인하였다[25].
피부 외용제로 사용되는 의약품의 피부에서 접촉감작 위험성을 예측하기 위한 것으로써 접촉하는 약물의 피부감작성을 평가하기 위하여 피내주사 후 주사부위를 관찰하여 2마리 guinea pig 모두 피부괴사가 나타나지 않는 최고 농도를 감작항원량으로 정하였다[11].
대상 데이터
H. pylori 균주는 한국유전자은행으로부터 KCTC 12083을 분양 받아 사용하였다. 분양 받은 균주는 37°C, CO2 농도 10% 환경에서 5% fetal bovine serum (FBS)과 항생제(H pylori selective supplement(Oxoid, SROM4E, England))가 포함된 Brucella agar plate에서 2〜3일 간격으로 계대배양 하였다.
Sprague-Dawley(# 6주령, 250〜350g) rat에 개체별로 분리된 혈청을 멸균 생리식염수로 공비 2배로 10단계 희석하였다. 군당 3마리씩 배부위에 일정한 간격으로 1회용 주사기(26 G, 1ml)로 100㎕ 씩 피내주사 후 주사부위를 표시하였다 [28].
실험동물은 한림실험동물(주)(경기도 화성, 한국)에서 Hartley계 guinea pig 6주령(250〜350g, #)을 구입하여 1주일간 순화시킨 후 시험에 사용하였다. 사육실은 실험동물 환경조건인 온도 22±3°C, 상대습도 55+5%, 환기횟수 10〜12회/hr, 명암주기 12시간으로 유지하였다.
데이터처리
본 실험에서 얻은 측정치에 대한 통계처리는 SPSS(SPSS 12.0KO for Windows)를 이용하여 평균치와 표주편차를 구하였고, 유의성 검증은 Duncan's multiple range test를 이용하여 유의수준 p<0.05일 때 통계적으로 유의성이 있는 것으로 판정하였다.
이론/모형
강하게 vortex 2,500 rpm, 1min)한 후 원심분리(25,000x g, 15min, 4°C)된 상층액을 crude urease항원으로 사용하였다[22, 23]. 분리된 crude urease는 SDS-PAGE(12%)로 분자량을 확인하였고, 항원 농도는 Lowry법을 이용한 단백질정량 kit로 정량하여 사용 전까지 -70°C에 냉동보관 하였다[7].
45㎛)로 여과하였다. 여과된 WC의 농도는 Lowry법을 이용한 단백질정량 kit로 측정하여 사용 전까지 -70°C에 냉동 보관하였다[4].
성능/효과
2차 야기투여 시 양성대조군인 BSA (H) 투여군에서는 1차 야기투여 후 살아남은 2마리 모두 중증의 횡와 증상을 나타내었고, BSA (L) 투여군에서는 코를 문지르거나 핥음, 재채기, 호흡촉진 등의 중증과 1차 야기투여 후 살아남은 4마리 중 3마리가 사망에 이르는 것을 관찰할 수 있었다. 그리고 시험물질 투여군인 WC (H)에서는 불안, 코를 문지르거나 핥음 증상을 1마리에서 관찰할 수 있었으며, WC (L) 투여군에서는 음성 대조군(Control)과 같이 어떠한 증상도 관찰되지않았다(Table 3).
그러나 음성대조군과 시험물질 투여군인 urease (H)와 urease (L)에서는 anaphylaxis로 보이는 어떠한 증상도 관찰되지 않았다(Table 4). 2차 야기투여 시 양성대조군인 BSA (H) 투여군에서는 1차 야기투여 후 살아남은 2마리 모두 횡와 증상의 중증의 증상을 나타내었고, BSA (L) 투여군에서는 코를 문지르거나 핥음, 재채기, 호흡촉진 등의 중증과 1차 야기투여 후 살아남은 4마리 중 3마리가 사망에 이르는 것을 관찰할 수 있었다. 그리고 1차 투여와 같이 음성대조군, 시험물질 투여군에서는 모두 어떠한 증상도 관찰되지 않았다(Table 5).
Anaphylaxis는 종합적으로 쇼크정도에 따라 음성 [-]은 아무런 임상증상이 관찰되지 않을 때, 경증[±]은 불안(Restlessness), 기모(Piloerection), 진전(Tremor), 코를 문지르거나 핥음(Rubbing or licking nose)의 증상이 나타날 때, 중등도[+]는 재채기(Sneezing), 기침(Coughidng), 호흡촉진(Hyperpnea), 배뇨(Urination), 배변 Evacuation), 유루(Lacrimation)의 증상이 보일 때, 중증[++]은 호흡곤란(Dyspnea), 찍찍거리는 소리(Rhonchus), 청색증(Cyanosis), 보행불안(Staggering gait), 도약(Jumping), 헐떡거리고 몸부림 침(Gasping and wishing), 경련(Convulsion), 횡와(Side position), Cheyne-Stokes 호흡의 증상이 나타날 때, 그리고 사망 시(Death)[+++]로 판정하였다.
BSA (L) 투여군에서도 중증인 핥음, 재채기, 배뇨, 보행 불안, 횡와 증상과 1마리가 사망에 이르는 것을 관찰할 수 있었다. 그리고 시험물질 투여군인 WC (H)에서는 불안, 코를 문지르거나 핥음 증상이 1마리에서 관찰할 수 있었으며, WC (L) 투여군 에서는 음성대조군(Control)과 같이 어떠한 증상도 관찰되지 않았다(Table 2).
조직 친화성 항체(IgE)의 역가를 알아 보았다. 각 항혈청을 희석하여 피내주사하고 항원과 Evans Blue 혼합액을 정맥 주한 결과, 양성대조군인 BSA (L)에서는 개체에 따라 23 〜26배,BSA (H)는 25〜26배 희석배율까지 5mm 이상 크기의 청색반점을 나타내었다(Table 6, 7). 그러나 음성대조군과 시험물질 투여군인 WC (H), WC (L), Urease (H), Urease (L)에서는 청색반점을 관찰 할 수 없었다.
그러나 음성대조군과 시험물질 투여군인 WC (H), WC (L), Urease (H), Urease (L)에서는 청색반점을 관찰 할 수 없었다. 따라서 H, pylori에서 분리된 whole cell과 urease 항원의 PCA 실험결과 조직 친화성 항체 IgE를 생성하지 않는 것으로 나타났다.
농도를 결정하고자 하였다. 실험결과 WC와 urease 항원 모두 20㎍/100㎕의 농도에서 피부 이상증상 반응을 나타내지 않았으며, 항원농도 80㎍/100㎕와 40㎍/100㎕에서는 염증증상은 아니지만 붉은 반점의 이상증상을 나타내는 것을 볼 수 있었다. 따라서 피부 이상증상이 발생하지 않는 최고의 농도를 20㎍/100㎕로 결정하고 가장 적합한 감작항원 농도로 결정하였다(Fig 1).
이와 같이 H. pylori의 whole cell에 대한 전신성 anaphylaxis 쇼크반응은 WC (H) 60㎍/100㎕의 항원농도에서 1차, 2차 모두 경증의 증상을 나타내었고 WC (L) 20㎍/100㎕의 항원농도에서는 아무런 anaphylaxis 쇼크 증상이 관찰되지 않았다. 따라서 H.
후속연구
pylori의 urease에 대한 전신성 anaphylaxis 쇼크반응은 항원농도 20㎍/100㎕의 urease (L)와 60㎍/100 ㎕의 urease (H) 모두 아무런 증상도 관찰되지 않았다. 따라서 whole cell과 비교할 때 urease로 분리된 항원에 대해서는 anaphylaxis 쇼크증상으로부터 더 안전한 결과를 기대할 수 있을 것으로 사료된다.
참고문헌 (26)
Birmingham, N., S. Payankaulam, S. Thanesvorakul, B. Stefura, K. HayGlass and V. Gangur. 2003. An ELISAbased method for measurement of food-specific IgE antibody in mouse serum: an alternative to the passive cutaneous anaphylaxis assay. J. Immunol. Methods 275, 89-98
Blanchard, T. G., J. C. Eisenberg and Y. Matsumoto. 2004. Clearance of Helicobacter pylori infection through immunization: the site of T cell activation contributes to vaccine efficacy. Vaccine 22, 888-897
Ermak, T. H., P. J. Giannasca, R. Nichols, G. A. Myers, J. Nedrud, R. Weltzin, C. K. Lee, H. Kleanthous and T. P. Monath. 1998. Immunization of mice with urease vaccine affords protection against Helicobacter pylori infection in the absence of antibodies and is mediated by MHC class II- restricted responses. J. Exp. Med. 188, 2277-2288
Garhart, C. A., R. W. Redline, J. G. Nedrud and S. J. Czinn. 2002. Clearance of Helicobacter pylori infection and resolution of postimmunization gastritis in a kinetic study of prophylactically immunized mice. Infect. Immun. 3529-3538
Graham, D. Y., H. M. Malaty, D. G. Evans, D. J. Jr Evans, P. D. Klein and E. Adam. 1991. Epidemiology of Helicobacter pylori in an asymptomatic population in the United States. Effect of age, race, and socioeconomic status. Gastroenterology 100, 1495-1501
Hayashi, K., T. Ishikawa, T. Yamashita, T. Tajima and K. Nakayama. 2003. Biphasic response of cutaneous blood flow induced by passive cutaneous anaphylaxis in rats. Eur. J. Pharmacol. 482, 305-311
Hifumi, E., Y. Yamada and T. Uda. 2006. A catalytic antibody heavy chain HpU-2 degrading its epitope peptide and H. pylori Urease. Immunol. Lett. 103, 68-74
IARC working group on the evaluation of carcinogenic risks to humans. 1994. Helicobacter pylori. in: Schistosomes, liver flukes, and Helicobacter pylori: views and expert opinions of IARC working group on the evaluation of carcirogenic risks to humans. Lyon: IARC Monogr Eval Carcinog Risks Hum. 61-241
Jo, E. H., S. D. Cho, N. S. Ahn, J. W.Jung, S. R. Yang, J. S. Park, K. S. Park, I. S. Hong, M. S. Seo, N. B. Tiep, Y. S. Lee and K. S. Kang. 2003. Antigenicity study of nonspecific immunostimulator $BARODON^{{\circledR}}$ . Kor. J. Vet. Res. 43, 255-261
Justine, S. G., E. C. Natalie and H. S. Dieter. 1980. Methods in immunology, a laboratory text for instruction and research. W. A. Benjamin, Inc, Canada
Kim, B. J., B. H. Kang, T. Y. Kim, T. H. Kim and K. W. Kim. 1997. Production and characterization of IgY specific to Helicobacter pylori. Kor. J. Appl. Microbiol. Biotechnol. 25, 612-616
Lee, D. H. 2002. Current status and treatment of Helicobacter pyri infection in korea. Kor. J. Gastrol. 39, 153-160
Lesley, E., M. J. Smythies, K. B. Novak, J. Waites, L. Russell, D. M. Casey and D. S. Phillip. 2005. Poliovirus replicons encoding the B subunit of Helicobacter pylori urease protect mice against H. pylori infection. Vaccine 23, 901-909
Mabe, K., M. Yamada, I. Oguni and T. Takahashi. 1999. In vitro and in vivo activities of tea catechins against Helicobacter pylori. Antimicrob Agents Chemother. 43, 1788-1791
Marshall, B. J. and J. R. Warren. 1984. Unidentified curved bacilli in the stomach of patients with gastritis and peptic ulceration. Lancet. 323, 1311-1315
Megraud, F. 1998. Antibiotic resistance in Helicobacter pylori infection. Br. Med. Bull. 24, 207-216
Michetti, P., I. Corthesy-Theulaz, C. Davin, R. Haas, A. C. Vaney, M. Heitz, J. Bille, J. P. Kraehenbuhl, E. Saraga and A. L. Blum. 1994. Immunization of BALB/c mice against Helicobacter felis infection with Helicobacter pylori urease. Gastroenterology 107, 1002-1011
Parsonnet, J., R. A. Harris, H. M. Hack and D. K. Owens. 1996. Modelling cost-effectiveness of Helicobacter pylori screening to prevent gastric cancer; A mandate for clinical trials. Lancet 348, 150-154
Ruggiero, P., P. Samuele, R. Rino and D. G. Giuseppe. 2003. The quest for a vaccine against Helicobacter pylori: How to move from mouse to man? Micro. Infec. 5, 749-756
Rupnow, M. F., D. K. Owens, R. Shachter and J. Parsonnet. 1999. Helicobacter pylori vaccine development and use: A cost-effectiveness analysis using the institute of Medicine methodology. Helicobacter 4, 272-280
Rupnow, M. F., R. D. Shachter, D. K. Owens and J. Parsonnet. 2001. Quantifying the population impact of a prophylactic Helicobacter pylori vaccine. Vaccine 20, 879-885
Satoh, K., K. Kimura and Y. Taniguchi. 1996. Distribution of inflammation and atrophy in the stomach of Helicobacter pylori-positive and -negative patients with chronic gastritis. Am. J. Gastroenterol 91, 963-969
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.