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문제 정의
- 이용되고 있다27). 본 연구는 난소를 절제하여 갱년기 장애를 유도한 흰쥐에 도라지를 투여함으로써 난소절제에 의한 estrogen결핍에서 발생되는 혈 중 alkaline phosphatase, 골 중주요 단백질인 collagen 함량 변화 및 골다공증의 biomaker인 pyridinoline 및 deoxypyridinoline 함량 변화에 미치는 영향을 집중적으로 검토하였다.
- 따라서 본 연구에서는 난소절제로 인하여 호르몬 분비가 중지되었을 때 collagen 생성 변화에 있어 도라지 추출물이 어떠한 영향을 주는지 검토하였다 (Table 4).
제안 방법
- 알려져 있다. 최근 새로운 식품으로 각광받고 있는 도라지 추출물을 인위적 갱년기 장애를 유발시킨 흰쥐에 투여하여 혈 중 ALP 활성 변화와 골 중의 collagen 의 함량 및 collagen 가교 물질 pyridinoline 과 deoxypyridinoline 함량 변화를 측정하여 그 효과를 검토해 보았다.
- 즉 실험동물은 난소절제 대조군 (OVX-control), 난소절제 없이 절개 부분을 봉합한 군 (Sham), 난소절제 후 도라지 추출물 50 ㎎/㎏ 투여군 (OVX-PG50) 으로 나누어 실험하였다 (Table 1).
- 체중은 실험 사육 기간 중에 격일로 일정 시간에 측정하고, 식이 섭취량은 매일 식이 잔량을 측정하여 산출하였다. 동물 실험실의 사육조건은 온도 24±2℃, 습도 55~60%을 유지 시키며 물과 식이는 자유 공급하였고, 실험시료는 증류수로 용해하여 매일 1 mL씩 6주간 경구 투여 하였고, 대조군은 동일 용량의 증류수를 투여하였다.
- 섭취량은 매일 식이 잔량을 측정하여 산출하였다. 동물 실험실의 사육조건은 온도 24±2℃, 습도 55~60%을 유지 시키며 물과 식이는 자유 공급하였고, 실험시료는 증류수로 용해하여 매일 1 mL씩 6주간 경구 투여 하였고, 대조군은 동일 용량의 증류수를 투여하였다.
- 1 주일 동안 주위환경에 적응시켜 난괴법에 의해 군을 나누어 난소 절제 수술을 실시하였다. 수술은 ether 마취 후 심마취기에 이르면 늑골하부를 절개하여 난소를 제거하고 절개 부는 봉합하였다.
- 난소 절제 수술을 실시하였다. 수술은 ether 마취 후 심마취기에 이르면 늑골하부를 절개하여 난소를 제거하고 절개 부는 봉합하였다. 시술 후 3일부터 매일 도라지 시료를 경구 투여 하였다.
- 수술은 ether 마취 후 심마취기에 이르면 늑골하부를 절개하여 난소를 제거하고 절개 부는 봉합하였다. 시술 후 3일부터 매일 도라지 시료를 경구 투여 하였다.
- 혈액은 실험동물을 해부 전 24시간 절식 시킨 후 ether 마취하에서 개복한 후 대동맥에서 채취하였고, 혈청 중의 효소 활성 및 지질 농도는 실온에서 한 시간 방치 후 3, 000 rpm, 4C 에서 10분간 원심분리 하여 분석하였다. 늑골과 연골은 경계면에서 분리하였으며 피부는 털과 표피위의 지방을 제거하여 실험 시 까지 -70C 에서 보관하였다.
- 혈 중 Alkaline phosphatase(ALP) 활성은 분리한 혈청을 자동 측정용 slide (FU-JI FILM, Japan)를 이용하여 Dry chemistry analyzer 3500i (Fuji, Japan)로 측정하였다.
- 희석한 후 시료용액으로 하였다. 결합조직의 collagen 함량은 Woessner 법을 변형하여 분석하였다. Hydroxyproline 의 정량분석을 위해 조제한 sample 을 다시 증류수로 일정량 희석한 후 실험에 사용하였다.
- 7. Pyridinoline/ Deoxypyridinoline (PYD/ DPD) 함량분석 Collagen 중의 가교물질인 pyridinoline 함량 측정은 위의 방법에서 얻어진 collagen 분석시료를 HPLC 를 이용하여 행하였다. HPLC 분석 조건은 Table 2과 같고, 결과에 관한 분석은 standard 의 peak 를 이용하여 PYD/DPD 의 peak 를 파악 한 후 standard area% 농도와 시료의 area% 농도를 계 산하여 PYD/ collagen, DPD/collagen 으로 나타내었다.
- Pyridinoline/ Deoxypyridinoline (PYD/ DPD) 함량분석 Collagen 중의 가교물질인 pyridinoline 함량 측정은 위의 방법에서 얻어진 collagen 분석시료를 HPLC 를 이용하여 행하였다. HPLC 분석 조건은 Table 2과 같고, 결과에 관한 분석은 standard 의 peak 를 이용하여 PYD/DPD 의 peak 를 파악 한 후 standard area% 농도와 시료의 area% 농도를 계 산하여 PYD/ collagen, DPD/collagen 으로 나타내었다.
대상 데이터
- 본 실험에 사용한 도라지(안동)는 부산시 엄궁동 농수산물시장에서 구입하여(2003년) 수세, 정선 및 탈수과정을 거쳐서 동결 건조하여 분말화 하였다. 건조시료에 80% 에탄올을 가해 2회 추출하여 감압농축기로 농축한 후 동결 건조하여 에탄올 추출물로 동물실험에 사용하였다.
- 건조하여 분말화 하였다. 건조시료에 80% 에탄올을 가해 2회 추출하여 감압농축기로 농축한 후 동결 건조하여 에탄올 추출물로 동물실험에 사용하였다.
- 실험동물은 체중이 평균 180 g되는 Sparaque-dawley 계 암컷 흰쥐를 효창사이언스(대구)로부터 구입하여 본 실험실에서 고형사료(삼양유지)로 사육하였고, 실험 시작 1주일 동안 대조군식이로 적응시킨 후 동물의 체중에 따라 3군으로 나누었다. 즉 실험동물은 난소절제 대조군 (OVX-control), 난소절제 없이 절개 부분을 봉합한 군 (Sham), 난소절제 후 도라지 추출물 50 ㎎/㎏ 투여군 (OVX-PG50) 으로 나누어 실험하였다 (Table 1).
데이터처리
- 본 실험에 대한 모든 실험의 결과는 mean±SD 치로 나타내었고, 실험군 간의 유의성은 ANOVA 로 검증한 후, a=0.05 수준에서 Scheffe 법, Bonferroni 법으로 다중비교 하였다.
성능/효과
- 도라지 추출물을 갱년기를 유도한 흰쥐에 투여하여 혈 중 ALP 활성 변화에 미치는 영향을 검토한 결과 난소절제에 의하여 ALP 활성이 증가하였으나, 도라지 추출물 투여한 군에서 ALP 활성이 억제되는 것을 확인할 수 있었다. 또한 난소 절제에 의해 연골의 collagen 함량이 감소되었는데, 이는 도라지 추출물을 투여함으로써 정상적인 수치로 증가하는 경향을 나타내어 도라지추출물이 골 대사와 관련된 골 대사 질환에 유효한 효과를 나타낼 것으로 추측된다.
- 억제되는 것을 확인할 수 있었다. 또한 난소 절제에 의해 연골의 collagen 함량이 감소되었는데, 이는 도라지 추출물을 투여함으로써 정상적인 수치로 증가하는 경향을 나타내어 도라지추출물이 골 대사와 관련된 골 대사 질환에 유효한 효과를 나타낼 것으로 추측된다. 또한 collagen 가교물질로써 골대사의 biomaker인 pyridinoline 및 deoxypyridinoline의 골 중의 함량은 난소절제에 의해 감소하였고, 도라지 추출물 투여에 의해 증가하여 estrogen 부족으로 인한 골 손실에 도라지 추출물이 유익한 효과를 가지는 것으로 보이며, 이는 도라지 중에 함유되어 있는 phytoestrogen 에 의한 것으로 추측되어 앞으로 구체적인 검토가 필요한 것으로 사료된다.
- OVX-contr이이 Sham 군에 비해 체중이 증가하는 것은 여성호르몬 부족으로 인한 체내 지방조직의 증가에 의한 것이며, 또한 지방조직에서도 여성호르몬을 생성 할 수 있는 기능을 갖고 있기 때문에, 지방조직에서 난소의 기능을 대체 하고자 하는 체내의 비상대책으로 여겨진다. 난소 절제 후 도라지를 투여한 군에서 Sham 군과 비교해 높은 체중 증가량 나타내어 도라지 추출물이 체중감소에는 크게 영향을 미치지 않았다.
- 1은 도라지 추출물이 혈청 ALP 함량에 미치는 영향을 나타내었다. 난소를 절제한 군이 난소를 절제하지 않은 군에 비해 혈청 중의 ALP 활성이 높아지는 경향을 나타내었고, 난소 절제 후 도라지 추출물의 투여로 인해 Sham 군보다 유의적으로 감소하였다. ALP는 조골 대사와 관련이 깊은 것으로 대사성 골 질환 등 골 대사 회전이 빠를 때, 즉 골격 형성 시 조골 세포의 활동이 증가하여 골 교체율이 빠를 때 혈장 내에서의 농도가 증가한다38).
- 절제한 OVX-contr이군은 collagen 함량이 감소하였으나, 난소 절제 후 도라지 추출물 투여함으로써 유의성 있게 증가하는 경향을 나타내었다 (a=0.05). 골 조직에 서는 난소를 절제한 OVX-contr이군이 난소를 절제하지 않은 Sham 군에 비해 collagen 함량이 감소하는 경향을 나타내었다.
- 05). 골 조직에 서는 난소를 절제한 OVX-contr이군이 난소를 절제하지 않은 Sham 군에 비해 collagen 함량이 감소하는 경향을 나타내었다.
- 있다41). 본 연구 결과에서 난소절제로 인한 collagen 합성의 감소가 도라지 추출물의 투여에 의해 회복되어 estrogen 부족으로 인한 골 손실에 도라지가 유익한 효과를 가지는 것으로 추측된다.
- 것이다. 연골 중의 pyridinoline 함량은 차이가 없는 반면, 골에서 pyridinoline 함량은 난소를 절제하지 않은 Sham 군이 난소를 절제한 OVX-contr이군에 비해 높은 경향을 나타냈고, 난소절제 후 도라지 추출물을 투여한 군에서 난소 절제 시 감소되는 pyridinoline 함량을 난소를 절제하지 않은 Sham 군과 비슷한 수준으로 회복시키는 경향을 나타내었다.
- Table 6 의 연골 중 deoxypyridinoline 함량은 난소를 절제하지 않은 Sham 군이 난소를 절제한 OVX-contr이군에 비해 높은 경향을 나타냈고, 골 조직의 경우 난소 절제 후 도라지 추출물을 투여한 군에서는 난소 절제 시 감소되는 deoxypyridinoline 함량을 난소를 절제하지 않은 Sham 보다 오히려 높은 수준으로 회복시키는 경향을 나타내었다. 이상의 결과에서 연골의 pyridinoline 및 deoxypyridinolinee 난소절제에 의해 감소하였고, 도라지 추출물 투여에 의해 증가하여 estrogen 부족으로 인한 골 손실에 도라지 추출물이 유익한 효과를 가지는 것으로 보이며, 이는 도라지 중에 함유되어 있는 phytoestrogen 에 의한 것으로 추측되어 앞으로 구체적인 검토가 필요한 것으로 사료된다.
후속연구
- 경향을 나타내었다. 이상의 결과에서 연골의 pyridinoline 및 deoxypyridinolinee 난소절제에 의해 감소하였고, 도라지 추출물 투여에 의해 증가하여 estrogen 부족으로 인한 골 손실에 도라지 추출물이 유익한 효과를 가지는 것으로 보이며, 이는 도라지 중에 함유되어 있는 phytoestrogen 에 의한 것으로 추측되어 앞으로 구체적인 검토가 필요한 것으로 사료된다.
- 또한 난소 절제에 의해 연골의 collagen 함량이 감소되었는데, 이는 도라지 추출물을 투여함으로써 정상적인 수치로 증가하는 경향을 나타내어 도라지추출물이 골 대사와 관련된 골 대사 질환에 유효한 효과를 나타낼 것으로 추측된다. 또한 collagen 가교물질로써 골대사의 biomaker인 pyridinoline 및 deoxypyridinoline의 골 중의 함량은 난소절제에 의해 감소하였고, 도라지 추출물 투여에 의해 증가하여 estrogen 부족으로 인한 골 손실에 도라지 추출물이 유익한 효과를 가지는 것으로 보이며, 이는 도라지 중에 함유되어 있는 phytoestrogen 에 의한 것으로 추측되어 앞으로 구체적인 검토가 필요한 것으로 사료된다.
- ALP는 조골 대사와 관련이 깊은 것으로 대사성 골 질환 등 골 대사 회전이 빠를 때, 즉 골격 형성 시 조골 세포의 활동이 증가하여 골 교체율이 빠를 때 혈장 내에서의 농도가 증가한다38). OVX-control 군에 비해 도라지 투여군의 ALP 활성이 낮아져 앞으로 폐경 후 골 대사에 유익한 효과가 기대된다.
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