한강유역 4개 정점으로부터 46주의 Enterococcus 속 세균을 분리하였으며 이 세균은 E. faecium 15주, E. casseliflavus 26주, E. facecalis 1주 및 E. hirae 4주로 이루어져 있었다. Streptomycin의 경우 조사대상 균주 40주 중 45주의 세균이 내성을 나타내었으며 tetracycline과 quinupristin/dalfopristin의 경우 각각 21주 및 19주의 세균이 내성을 나타내었다. 한편 gentamicin과 vancomycin의 경우에는 각각 15주 및 2주의 세균이 내성을 나타내었다. 분리된 Enterococcus 속 세균 46주 중 39주가 2가지 이상의 항생제에 대하여 내성을 나타내었으며, 이 세균 중 10주는 5가지 이상의 항생제에 매하여 모두 내성을 가지는 것으로 조사되었다. 특히 정점 C인 안양천에서 분리된 균주는 8가지의 항생제에 대하여 모두 내성을 나타내었다. 조사 정점이 한강 하류로 내려갈수록 다제 내성 균주가 분리되는 빈도수가 증가하는 추세를 나타내었다. 디스크확산법으로 항생제 내성 세균의 MIC값을 측정한 결과 streptomycin에 최대 4,096 ${\mu}g$ mL$^{-1}$의 MIC를 나타낸 균주가 16주이었으며 gentamicin의 경우에도 최대 MIC가 2,048 ${\mu}g$ mL$^{-1}$을 나타낸 균주가 17주이었다. 한편 vancomycin에 대하여는 최대 512 ${\mu}g$ mL$^{-1}$의 MIC값을 나타내는 균주가 1주이 었으며, quinupristin/dalfopristin과 tetracycline에 대하여는 각각 64 ${\mu}g$ mL$^{-1}$의 농도에 내성을 가진 균주가 각각 2주와 33주이었다. 분리한 세균의 vancomycin 및 quinupristin/dalfopristin에 대한 MIC값을 임상에서 분리한 세균의 MIC간과 축산농가에서 분리한 세균의 MIC값을 상호 비교하였을 때 한강 수계에서 분리된 이들 항생제에 대하여 내성을 나타내는 세균은 축산 폐수로부터 유래된 것으로 유추되었다.
한강유역 4개 정점으로부터 46주의 Enterococcus 속 세균을 분리하였으며 이 세균은 E. faecium 15주, E. casseliflavus 26주, E. facecalis 1주 및 E. hirae 4주로 이루어져 있었다. Streptomycin의 경우 조사대상 균주 40주 중 45주의 세균이 내성을 나타내었으며 tetracycline과 quinupristin/dalfopristin의 경우 각각 21주 및 19주의 세균이 내성을 나타내었다. 한편 gentamicin과 vancomycin의 경우에는 각각 15주 및 2주의 세균이 내성을 나타내었다. 분리된 Enterococcus 속 세균 46주 중 39주가 2가지 이상의 항생제에 대하여 내성을 나타내었으며, 이 세균 중 10주는 5가지 이상의 항생제에 매하여 모두 내성을 가지는 것으로 조사되었다. 특히 정점 C인 안양천에서 분리된 균주는 8가지의 항생제에 대하여 모두 내성을 나타내었다. 조사 정점이 한강 하류로 내려갈수록 다제 내성 균주가 분리되는 빈도수가 증가하는 추세를 나타내었다. 디스크확산법으로 항생제 내성 세균의 MIC값을 측정한 결과 streptomycin에 최대 4,096 ${\mu}g$ mL$^{-1}$의 MIC를 나타낸 균주가 16주이었으며 gentamicin의 경우에도 최대 MIC가 2,048 ${\mu}g$ mL$^{-1}$을 나타낸 균주가 17주이었다. 한편 vancomycin에 대하여는 최대 512 ${\mu}g$ mL$^{-1}$의 MIC값을 나타내는 균주가 1주이 었으며, quinupristin/dalfopristin과 tetracycline에 대하여는 각각 64 ${\mu}g$ mL$^{-1}$의 농도에 내성을 가진 균주가 각각 2주와 33주이었다. 분리한 세균의 vancomycin 및 quinupristin/dalfopristin에 대한 MIC값을 임상에서 분리한 세균의 MIC간과 축산농가에서 분리한 세균의 MIC값을 상호 비교하였을 때 한강 수계에서 분리된 이들 항생제에 대하여 내성을 나타내는 세균은 축산 폐수로부터 유래된 것으로 유추되었다.
From the 4 sampling stations located in the basin of the Han River, total 46 strains of Enterococcus spp. composed of 15 E. faecium strains, 26 E. casseliflavus strains, 1 E. faecalis strain and 4 E. hirae strains were isolated. Among the 46 strains, 45 strains exhibited streptomycin-resistance, whi...
From the 4 sampling stations located in the basin of the Han River, total 46 strains of Enterococcus spp. composed of 15 E. faecium strains, 26 E. casseliflavus strains, 1 E. faecalis strain and 4 E. hirae strains were isolated. Among the 46 strains, 45 strains exhibited streptomycin-resistance, while 21 and 19 stains were resistant against tetracycline and quinupristin/dalfopristin, respectively. As for gentamicin and vancomycin, 15 strains and 1 strain showed resistance against the respective antimicrobial agents. Among the 46 strains, 39 strains showed resistance against more than 2 antimicrobial agents, and 10 strains demonstrated resistance to more than 5 antimicrobial agents. Especially, the strain isolated from the station C at Anyangcheon, exhibited resistance against all the 8 kinds of the antimicrobial agents. As the sampling site approached to the lower stream of the Han-river, the antibiotic resistant strains and the multi-drug resistant strains were detected more frequently. The MIC values of the antibiotic resistant strains measured by the disc diffusion method disclosed that 16 strains possessed maximum MIC value of 4,096 ${\mu}g$ mL$^{-1}$ against streptomycin and 17 strains possessed maximum MIC value of 2,048 ${\mu}g$ mL$^{-1}$ against gentamicin. Meanwhile, 1 strain exhibited maximum MIC value of 5121 ${\mu}g$ mL$^{-1}$ against vancomycin. As for quinupristin/dalfopristin and tetracycline, 2 and 33 strains showed maximum MIC value of 641 ${\mu}g$ mL$^{-1}$, respectively. Comparison of the MIC values of the strains of the this study with those of the strains of the other research groups isolated from the hospital drainage and also those from the live stock farm drainage indicated that the strains resistant against vancomycin and quinupristin/dalfopristin may be originated from the livestock farm drainage.
From the 4 sampling stations located in the basin of the Han River, total 46 strains of Enterococcus spp. composed of 15 E. faecium strains, 26 E. casseliflavus strains, 1 E. faecalis strain and 4 E. hirae strains were isolated. Among the 46 strains, 45 strains exhibited streptomycin-resistance, while 21 and 19 stains were resistant against tetracycline and quinupristin/dalfopristin, respectively. As for gentamicin and vancomycin, 15 strains and 1 strain showed resistance against the respective antimicrobial agents. Among the 46 strains, 39 strains showed resistance against more than 2 antimicrobial agents, and 10 strains demonstrated resistance to more than 5 antimicrobial agents. Especially, the strain isolated from the station C at Anyangcheon, exhibited resistance against all the 8 kinds of the antimicrobial agents. As the sampling site approached to the lower stream of the Han-river, the antibiotic resistant strains and the multi-drug resistant strains were detected more frequently. The MIC values of the antibiotic resistant strains measured by the disc diffusion method disclosed that 16 strains possessed maximum MIC value of 4,096 ${\mu}g$ mL$^{-1}$ against streptomycin and 17 strains possessed maximum MIC value of 2,048 ${\mu}g$ mL$^{-1}$ against gentamicin. Meanwhile, 1 strain exhibited maximum MIC value of 5121 ${\mu}g$ mL$^{-1}$ against vancomycin. As for quinupristin/dalfopristin and tetracycline, 2 and 33 strains showed maximum MIC value of 641 ${\mu}g$ mL$^{-1}$, respectively. Comparison of the MIC values of the strains of the this study with those of the strains of the other research groups isolated from the hospital drainage and also those from the live stock farm drainage indicated that the strains resistant against vancomycin and quinupristin/dalfopristin may be originated from the livestock farm drainage.
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제안 방법
5의 탁도로 현탁 시 켜 Mueller Hinton Agar (MHA) 평 판배 지 에 도말하고 항생제 디스크를 올린 후 35±2℃, 18~24시간 '배양하여 clear zone으로 항생제 감수성을 판정하였다. MIC 는 MHA 배지에 각 항생제의 최종농도를 0.5 μgmLL부터 streptomycine 4, 0961g m"까지, gentamicine 2, 048 |ig mLT까시, vancomycin, tetracycline 및 quinupristin/ dalfopristine 512μgmLT까지 사용하고 순수분리 배양된 Enterococcus 세 균을 McFarland No. 0.5의 탁도로 현탁 시켜 접종하여 35±2℃, 18~24시간 배양하여 실험 균주의 50% 이상이 성장 억제를 나타내는 항생제 농도를 MIC50, 90% 이상이 성장 억제를 나타내는 항생제 농도를 MKM으로 측정하였다.
그 후 BHI broth에 배 양하여 DNeasy blood & tissue kit (Qiagen) 로 total genomic DNA를 추출하여 (주)바이오닉스에서구입 한 종 특이 primer (Table 2)를 사용하여 multiplex PCR하여 분리균을 동정하였다.PCR 조건은 94℃에서 10분 pre-denatuiatiori시 킨 후 denaturation step-g: 94℃에서 1분, annealing stepe 54℃에서 1분, extension stepe 72℃에서 1분을 30 cycles 실시하고 최종 extensione 72℃에서 10분 수행하고 PCR 산물을 전기영동하여 확인하였다.
콜로니를 선별하여 Brain-Heart Infusion (BHI) agar에 37℃, 24시간 배양하여 순수분리하였다. 그 후 BHI broth에 배 양하여 DNeasy blood & tissue kit (Qiagen) 로 total genomic DNA를 추출하여 (주)바이오닉스에서구입 한 종 특이 primer (Table 2)를 사용하여 multiplex PCR하여 분리균을 동정하였다.PCR 조건은 94℃에서 10분 pre-denatuiatiori시 킨 후 denaturation step-g: 94℃에서 1분, annealing stepe 54℃에서 1분, extension stepe 72℃에서 1분을 30 cycles 실시하고 최종 extensione 72℃에서 10분 수행하고 PCR 산물을 전기영동하여 확인하였다.
폐수, 생활하수, 농 . 축산 폐수 및 병원 하수가 흘러 들어가는 한강 지역의 하천수와 한강의 최종 도착지인 강화도 지역에서 해수를 채취하여 이로부터 Enterococcus 속 세균을 분리하고, 이 분리균을 대상으로 임상과 축산업에서 질병의 예방과 치료에 널리 사용되고 있는 항생제에 대한 항생제 감수성을 조사하고 항생제 내성 양상을 분석하였다.
Concentration, MIC)를 결정 하였다. 표준균주는 E. faecalis ATCC 29212와 Staphylococcus aureus ATCC 25923을 사용하였다, 디스크확산법은 순수분리 배양된 Enterococcus 세균을 McFarland No. 0.5의 탁도로 현탁 시 켜 Mueller Hinton Agar (MHA) 평 판배 지 에 도말하고 항생제 디스크를 올린 후 35±2℃, 18~24시간 '배양하여 clear zone으로 항생제 감수성을 판정하였다. MIC 는 MHA 배지에 각 항생제의 최종농도를 0.
대상 데이터
Table 1에 수록한 바와 같이 2008년 3월 우리나라 한강 유역의 상류인 팔당댐부터 하류인 강화도에 걸쳐 생활하수 유입 지역. 농 .
농 . 축산 폐수 유입 지역 병원 하수 유입 지역 및 공장폐수 유입 지역에서 각각 표층수를 채취하였다 (Fig. 1).
항생제로는 임상 및 축산업에서 질병의 예방과 치료용으로 널리 사용되고 있는 ampicillin (10 ]ig), tetracycline (30 gg), gentamicin (120 |ig), amoxicillin/clavulanic acid (30 μg), ciprofloxacin (5 |lg), sulfamethoxazole/trimethoprim (23.75 |ig), chloramphenicol (30 |lg), vancomycin (30 |ig), quinupristin/dalfopristin (4.5/10.5 |ig) 및 streptomycin (300 μg) disk형과 tetracycline, gentamicin, streptomycin, vancomycin, quinupristin/dalfopristin powder형을 사용하였다
이론/모형
Clinical Laboratory Standard Institute (CLSI 2007)에 제시된 디스크확산법에 따라 항생제 감수성을 판정하고, 고체 배 지 희 석 법 으로 최 소성 장억 제 농도 (Minimum Inhibition Concentration, MIC)를 결정 하였다. 표준균주는 E.
Enterococcus 속 세균의 분리는 United States Environmental Protection Agency method 1600 (2002)이 제시한 방법에 따라 실시하였다. 하천과 해수 시료 1L를 여과하여 l%NaCl과 1% peptone을 포함한 alkaline peptone water (APW, pH 8.
성능/효과
Fig. 3의 결과에 의하면 ciprofloxacin과 quinupristin/ dalfopristine 조사 정점이 한강 하류에 가까울수록 항생제 내성 비율이 증가하는 경향을 나타내었지만, 다른 항생제의 경우에는 이 경향이 뚜렷하지 않았다.
Vancomycin에 대하여는 최대 512 gg mL-15의 MIC값을 나타내는 균주가 1주 검출되었고, quinupristin /dalfopristin과 tetracycline에 대하여는 각각 64gg mLz1 의 농도에 내성을 가진 균주가 각각 2주와 33주로 검출되었다. MIC 측정 결과는 디스크확산법의 결과와 유사하게 조사 정점이 한강 상류에서 하류로 내려갈수록 MIC의 값이 점차적으로 증가하였다. 특히 vancomycin 과 quinupristin/dalfopristin의 MIC는 정점 A에서 분리된 세균에 비하여 정점 D에서 분리한 세균에서 더 높은 MIC값이 측정되었다.
3과 4에 수록하였다. Streptomycin의 경우 조사대상 균주 46주 중 45주인 97.8%의 세균이 이 항생제에 대한 내성을 나타내어 10종 항생제 중 가장 높은 빈도로 항생제 내성 이 나타났다.
Streptomycin과 같은 계 열의 항생제인 gentamicin의 경우에 도 최대 MIC가 2, 048 |ig 나타낸 균주가 17주로 gentamicin에 대하여 높은 내성을 보였다. Vancomycin에 대하여는 최대 512 gg mL-15의 MIC값을 나타내는 균주가 1주 검출되었고, quinupristin /dalfopristin과 tetracycline에 대하여는 각각 64gg mLz1 의 농도에 내성을 가진 균주가 각각 2주와 33주로 검출되었다. MIC 측정 결과는 디스크확산법의 결과와 유사하게 조사 정점이 한강 상류에서 하류로 내려갈수록 MIC의 값이 점차적으로 증가하였다.
특히 정점 C인 안양천에서 분리된 균주는 8가지의 항생제에 대하여 모두 내성을 나타내었다. 다제 내성 균주가 분리되는 빈도수도 정점이 한강 하류로 내려갈수록 증가하여 정점 C와 D의 경우는 5가지이 상의 항생 제 에 대한 내 성 을 나타내는 Enterococcus 속 세균이 각각 4주씩 분리되어 높은 다제 내성률을 보였다. 임 등(2007)은 돼지분변에서 분리된 세균 중 36.
조사 정점 이 한강 하류로 내려갈수록 다제 내성 균주가 분리되는 빈도수가 증가하는 추세를 나타내었다. 디스크확산법으로 항생제 내성 세균의 MIC 값을 측정한 결과 streptomycin에 최대 4, 096|JgmL MIC 를 나타낸 균주가 16주이었으며 gentamicin의 경우에도 최대 MIC가 2, 048|igmLT을 나타낸 균주가 17주이었다. 한편 vancomycin에 대하여는 최대 512μgmL-1 의 MIC값을 나타내는 균주가 1 주이었으며, quinupristin/dal- fopristin고} tetracycline에 대하여는 각각 64|_lgmLT의 농도에 내성을 가진 균주가 각각 2주와 33주이었다.
이 결과는 본 연구에서 분리된 vancomyciri 내성속 세균이 축산환경에서 유래되 었기 때문으로 판단된다. 또한 국내에서는 항생제 인 virginiamy- cin을 아직 사료 첨가제로 사용하고 있기 때문에 (임 등 2007) 본 연구에서 분리 된 quinupristirv'dalfopristin 내성 Enterococcus 속 세균 또한 임상보다는 정점 B의 축산환경에서 유래된 것으로 사료된다.
권 능(2007)은 죽산에서 분리한 VREF 2주가 vancomycin에 대하여 256 mlL의 MIC값을 나타내었다. 본 연구에서 분리한 세균의 경우 오 등(200X)이 임상에서 분리한 세균에 비하여 vEincomycin에 대한 MIC값이 더 낮은 반면 quinupristin/ dalfopristin에 대한 MIC값은 더 높게 나타났다. 이에 비하여 본 연구에서 분리한 세균의 경우 vancomycin에 대한 MIC값이 권 등(2007)이 축산에서 분리한 세균이 가지고 있는 vancomycin에 대한 M1C값과 상호 유사한 수준이 었다.
내성률을 조사한 결과를 수록한 것이다. 분리된 Enterococcus 속 세균 46주 중 39주가 2가지 이상의 항생제에 대하여 내성을 나타내었으며, 이 세균 중 10주는 5 가지 이상의 항생제에 대하여 모두 내성을 가지는 것으로 조사되었다. 특히 정점 C인 안양천에서 분리된 균주는 8가지의 항생제에 대하여 모두 내성을 나타내었다.
내성률을 조사한 결과를 수록한 것이다. 분리된 Enterococcus 속 세균 46주 중 39주가 2가지 이상의 항생제에 대하여 내성을 나타내었으며, 이 세균 중 10주는 5 가지 이상의 항생제에 대하여 모두 내성을 가지는 것으로 조사되었다. 특히 정점 C인 안양천에서 분리된 균주는 8가지의 항생제에 대하여 모두 내성을 나타내었다.
한편 vancomycin에 대하여는 최대 512μgmL-1 의 MIC값을 나타내는 균주가 1 주이었으며, quinupristin/dal- fopristin고} tetracycline에 대하여는 각각 64|_lgmLT의 농도에 내성을 가진 균주가 각각 2주와 33주이었다. 분리한 세균의 vancomycin 및 quinupristin/dalfopristin에대한 MIC값을 임상에서 분리한 세균의 MIC값과 축산농가에서 분리한 세균의 MIC값을 상호 비교하였을 때 한강 수계에서 분리된 이들 항생제에 대하여 내성을 나타내는 세균은 죽산 폐수로부터 유래된 것으로 유주되었다
특히 정점 C 인 안양천에서 분리된 균주는 8가지의 항생제에 대하여 모두 내성을 나타내었다. 조사 정점 이 한강 하류로 내려갈수록 다제 내성 균주가 분리되는 빈도수가 증가하는 추세를 나타내었다. 디스크확산법으로 항생제 내성 세균의 MIC 값을 측정한 결과 streptomycin에 최대 4, 096|JgmL MIC 를 나타낸 균주가 16주이었으며 gentamicin의 경우에도 최대 MIC가 2, 048|igmLT을 나타낸 균주가 17주이었다.
MIC 측정 결과는 디스크확산법의 결과와 유사하게 조사 정점이 한강 상류에서 하류로 내려갈수록 MIC의 값이 점차적으로 증가하였다. 특히 vancomycin 과 quinupristin/dalfopristin의 MIC는 정점 A에서 분리된 세균에 비하여 정점 D에서 분리한 세균에서 더 높은 MIC값이 측정되었다. 오 등(2008)은 임상에서 분리한 VREF 58주 중 57주의 vancomycin에 대한 MIC값이 >256 p, g 이었으며, quinupristin/dalfopristin에 대한 MIC는 2μg mL", 로 보고하였다.
한강 유역 4개 정점에서 분리된 Enterococcus 속 세균은 모두 46주이었으며 Table 3에 제시한 동정 결과와 같이 이 들은 E. faecium 15주, E. casseliflavus 26주, E. faecalis [ 주 및 E. hirae 4주로 이루어져 있는 것을 Fig. 2에 제시한 바와 같이 PCR로 확인하였다.
한강유역 4개 정점으로부터 46주의 Enterococcus 속 세균을 분리하였으며 이 세균은 E. faecium 15^, E. casseliflavus 26주, E. j'aeealis 1 주 및 E. hirae 4주로 이 루어져 있었다. Streptomycin의 경우 조사대상 균주 46주 중 45주의 세균이 내성을 나타내었으며 tetracycline과 quin- ristin/dopristin의 경우 각각 21주 및 19주의 세균이 내성을 나타내었다.
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