[논문]Butein의 Jurkat T 림포마 세포에서 발현되는 세포괴사 효과

김나영

[국내논문] Butein의 Jurkat T 림포마 세포에서 발현되는 세포괴사 효과
Butein-Induced Apoptosis in Human T Lymphoma Jurkat Cells 원문보기

생약학회지, v.39 no.2 = no.153, 2008년, pp.150 - 154

김나영 (Children's Hospital Boston, Department of Medicine, and Harvard Medical School, Department of Pediatrics)

Abstract ▼ AI-Helper

Butein is a one of polyphenolic compound widely available in numerous plants. It has broad biological activities including antioxidant and anti-inflammatory activities, which contributed to its protective effects against cancer. Evidences that butein influence proliferation of tumor cells make it important to determine how butein affects cell death of various cancers. In this study, we show that butein, a phenolic compound, induces apoptosis in human T lymphoma jurkat cells. We found that treatment of cells with butein increased apoptosis in a dose- and time- dependent manner as determined by staining cells with Annexin V and 7AAD. There was no significant apoptotic cell death when normal lymphocytes and monocytes from healthy donor were treated with butein. We also found caspase-3 activity was increased during butein-induced apoptosis. The buteininduced apoptotic cell death was blocked by the treatment of cells with caspase-3 inhibitor. These results indicate that butein has the potential to provide an effective strategy against cancer with the advantage of being widely avalible.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

새로운 항암치료 약물의 개발을 시도하고 있다. 본 논문에서는 이러한 연구 중 butein에 의해 유도되는 Jurkat T 림포아 세포에서의 세포괴사효과를 나타내는 기전을 연구 하였으며 세포 괴사에 관련된 다양한 단백질과, 효소 활성을 측정하였다.
본 연구진은 실험적 자료를 바탕으로 폴리페놀 계열 성분의 항암효과와 관련된 작용기전을 구체적으로 규명함으로써 새로운 항암치료 약물의 개발을 시도하고 있다. 본 논문에서는 이러한 연구 중 butein에 의해 유도되는 Jurkat T 림포아 세포에서의 세포괴사효과를 나타내는 기전을 연구 하였으며 세포 괴사에 관련된 다양한 단백질과, 효소 활성을 측정하였다.
본 연구진은 폴리페놀계 화합물을 다량 함유하는 여러 천연물의 성분 중에서 새로운 항암 작용을 지닌 약물을 검색할 하는 과정에서 Dalbergia odoriferae 주로 존재 하는 buteinel jurkat T lymphoma 세포에 대한 항암효과를 발견하였다. 지난 수십년간의 실험적 입증을 통해 제시된 이들 폴리페놀계 성분들의 탁월한 세포 증식 억제와 세포괴사 (apoptosis) 작용을 유도함으로써 다양한 종류의 암세포를 괴사시킬 수 있는 항암효과들은 앞으로 더 많은 in vivo 실험과 임상실험을 토대로 입증되어져야 할 것이며, 이들 중 buteine 탁월한 후보물질의 하나로서 평가될 수 있을 것이다.

제안 방법

24시간이 지난 후 MTT시약을 넣고 4시간 동안 방치한 후 상등액을 제거하고 형성된 formazan을 DMSO 100 μ1를첨가하여 용해시키고 30분 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.
2).Buteine 20 昭伺와 40 μg/ml의 농도에서 24시간 동안 각각 43%와 61%의 세포괴사를 유도하였다. Butein에 의한 세포괴사효과는 농도 및 시간 의존적임을 확인하였다 (Fig.
lb). Butein에 의한 세포괴사효과를 구체적으로 증명하기 위하여, Annexin V과 7AAD를 사용하여 세포염색을 한 후에 flow cytometiy analysis를 통한 세포 괴사율을 측정하였다 (Fig. 2).Buteine 20 昭伺와 40 μg/ml의 농도에서 24시간 동안 각각 43%와 61%의 세포괴사를 유도하였다.
B니tein의 세포독성에 대한 효과- Butein의 다양한 종양세포들에 대한세포독성을 측정하기 위해 MTT assay를 수행하였다 (Fig. la).이들 세포들 중, jurkat 세포에 대한 독성작용이 가장 높다는 사실을 확인하였다.
Caspase-3 활성 측정- Caspase-3 활성은 단백질 50 pg 과 50 mM fluorescent substrate Ac・DEVD・AMC을 사용하여 측정하여 방출된 AMC 양을 spectrofluorometers- 이용하여 360 nm 와 460 nm 파장에서 측정하였다.
배양하였다. Jurkat 세포에 시료용액의 여러 농도 (10, 20, 40 μg/ml) 또는 양성대조군을 처리하고 실험조건에 따라서 48시간 동안 배양하였다.
2a).정상세포에 대한 butein의 작용을 확인하기 위해서 건강한 사람의 혈액으로부터 PBMC를 분리하여 같은 실험을 실시하였고 buteine] 세포 독성 작용은 정상적인 세포에서는 발생하지 않았음을 확인하였다(Fig. 2b). Butein에 의한 세포괴사효과는 caspase-3 효소의 활성화를 유발시켰으며 (Fig.
제조회사의 지침에 따라서 세포를 염색하였다 세포괴사는 Annexin V-FITC 와 7AAD에 양성을 나타내는 세포의 %建 측정하였다.

대상 데이터

(Grand Island, NY) 에서 구입하였다. Human leukemia HL-60, lymphoma cell MOIP4 cell과 CCRF-CEM 세포는 American Type Culture Collection (Rockville, Maryland, USA)에서 구입하였다.
Louis, MO, USA) 에서 구입하였고, CaspACE assay kit 는 Promega (Madison, WI, USA) 에서 구입하였다. RPMI 1640 medium, fetal bovine serum (FBS), penicillin, streptomycine Life Technologies Inc. (Grand Island, NY) 에서 구입하였다. Human leukemia HL-60, lymphoma cell MOIP4 cell과 CCRF-CEM 세포는 American Type Culture Collection (Rockville, Maryland, USA)에서 구입하였다.
세포의 배양 — HL-60 (myeloblastic), MOLT-4 (lymphoblastic), Jurkat (lymphoblastic)과 T cell acute lymphoblastic leukemia cell line인 CCRF-CEM 세포는 10% FBS 및 penicillin (100 pg/ml), streptomycin (100 U/ ml)이 포함된 RPMI 1640배지에서 37℃, 5% CO2 incubator에서 배양하였다. Jurkat 세포에 시료용액의 여러 농도 (10, 20, 40 μg/ml) 또는 양성대조군을 처리하고 실험조건에 따라서 48시간 동안 배양하였다.
재료 - Butein 은 Calbiochem-Novabiochem (La Jolla, CA, USA)에서 구입하였으며, 仁 6-diamidino-2-phenylindole, 3, -(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyl tetrazoliumbromide는 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA) 에서 구입하였고, CaspACE assay kit 는 Promega (Madison, WI, USA) 에서 구입하였다. RPMI 1640 medium, fetal bovine serum (FBS), penicillin, streptomycine Life Technologies Inc.

데이터처리

통계학적 분석- 실험치의 값은 mean土S.D로 나타냈으며 분석은 Studenfs『test로 그유의성을 나타내었다.

성능/효과

2b). Butein에 의한 세포괴사효과는 caspase-3 효소의 활성화를 유발시켰으며 (Fig. 3a) 효소 저해제를 처리했을때 butein에 의한 세포괴사작용은 현저히 감소됨을 확인 하였다 (Fig. 3b).이와 같은 사실은 caspase-3 효소 활성이 butein에 의한 세포괴사에 중요한 인자로 작용함을 입증하고 있다.
Buteine 농도 의존적으로 jurkat 세포의 생존 능력을 감소시켰다. Butein의 IC50는 18.2 μg/ml로 확인되었으며 20그리고 40 μg/ml 농도에서 세포 생존율은 각각 56%, 32%로 감소됨을 확인하였다 (Fig. lb). Butein에 의한 세포괴사효과를 구체적으로 증명하기 위하여, Annexin V과 7AAD를 사용하여 세포염색을 한 후에 flow cytometiy analysis를 통한 세포 괴사율을 측정하였다 (Fig.
본 연구진은 폴리페놀계 성분에 속하는 butein을 이용한 실험에서 이 화합물이 HL-60 세포에서 apoptosis를 일으켜 항 암효과를 발휘할 수 있음을 증명하였다.)Butein (3424-tetmhydFOxy산lalcone)은 폴리페놀계 화합물에 속하며 주로 stem-bark of cashews (Semecarpus anacardiuni), the heartwood of Dalbergia odorifera, 그리고 전통적인 중국과 티벳의 천연물 Caragana jubata, Rhus verniciflua Stokes에 존재한다.
la).이들 세포들 중, jurkat 세포에 대한 독성작용이 가장 높다는 사실을 확인하였다. Buteine 농도 의존적으로 jurkat 세포의 생존 능력을 감소시켰다.

후속연구

jurkat T lymphoma 세포에 대한 항암효과를 발견하였다. 지난 수십년간의 실험적 입증을 통해 제시된 이들 폴리페놀계 성분들의 탁월한 세포 증식 억제와 세포괴사 (apoptosis) 작용을 유도함으로써 다양한 종류의 암세포를 괴사시킬 수 있는 항암효과들은 앞으로 더 많은 in vivo 실험과 임상실험을 토대로 입증되어져야 할 것이며, 이들 중 buteine 탁월한 후보물질의 하나로서 평가될 수 있을 것이다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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