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문제 정의
- 본 실험에서는 시험물질인 굼벵이 유래 밀리타리스 동충하초(CMPD) 열수추출물의 경구투여에 의한 혈청내 GOT, GPT, TG; TC, HDL 및 LDL의 활성변화에 미치는 영향을 확인하였다. SD rat에 olive oil과 혼합한 CCl4를 복강 내로 주사한 다음, 시험물질은 CCl4 투여 전후로 6시간째 각각 2회 투여하였으며, 최종투여 48시간 후에 채혈한 혈청으로부터 간손상 지표를 측정하였다.
- 본 연구에서는 제주자생 흰점박이 꽃무지풍뎅이(굼벵이)를 기 주로하여 인공배양한 밀리타리스 동충하초 열수추출물을 대상으로 CCI4로 유도한 간손상실험 동물 모델에서의 간보호효과를 확 인하고, 단회투여 독성시험을 통해 생체내 안전성자료를 확보하였다.
제안 방법
- 시험물질은 독성유발물질(CCl4) 투여 6 시간 전후 경구로 투여하였다. G1군은 손상유발물질 투여 과정 없이 부형제인 3차증류수를 6시간 전후 경구로 투여하였다.
- SD rat에 olive oil과 혼합한 CCl4를 복강 내로 주사한 다음, 시험물질은 CCl4 투여 전후로 6시간째 각각 2회 투여하였으며, 최종투여 48시간 후에 채혈한 혈청으로부터 간손상 지표를 측정하였다. 먼저 CCl4 손상군(G2)과 음성대조군(G1)간의 비교에서 GOT(G2; 3174.
- 간 조직의 병리조직학적 결과: 간손상 지표의 변화를 통한 간접적인 결과를 확인하기 위하여 각 실험군의 간 조직에 대한 병리 조직학적 관찰을 실시하였다. 간손상 유발물질 (CCl4) 투여 및 시험 물질(CMPD extract) 투여 48시간 후 절취한 간에서 간소엽 사이 결합조직 (Glission’s capsule)중 소엽사이 동맥, 소엽 사이 정맥, 소엽사이 담관 즉 소엽사이 간삼조(hepatic triad)부분이 보이게 간조직을 절편한 다음, H&E 염색을 통해 간조직을 관찰하였다.
- 관찰을 실시하였다. 간손상 유발물질 (CCl4) 투여 및 시험 물질(CMPD extract) 투여 48시간 후 절취한 간에서 간소엽 사이 결합조직 (Glission’s capsule)중 소엽사이 동맥, 소엽 사이 정맥, 소엽사이 담관 즉 소엽사이 간삼조(hepatic triad)부분이 보이게 간조직을 절편한 다음, H&E 염색을 통해 간조직을 관찰하였다. 음성대조군 (G1) 에서는 정상세포로서 핵이 뚜렷이 보이며 그 간격이 일정하고, 세포간극이 좁은 잘 짜인 소엽 구조를 관찰할 수 있었다(Fig.
- 굼벵이 유래 밀리타리스 동충하초 열수추출물(CMPD extract)의 안전성 자료를 확보하기 위하여 단회경구투여 독성시험을 실시하였으며, CCl4의 경구투여로 유도된 간손상 실험 동물모델로부터 시험물질(CMPD extract)의 간보호효과를 확인하였다. 단회경구투여 독성시험결과, 시험물질(CMPD extract)의 최고농도(2, 000 ㎎/㎏ body weight)에서 독성을 나타내지 않아 LD50 값을 그 이상으로 결정하였다.
- 급성 간손상 유발 및 시험물질 투여: G2-G6군에서는 급성 간 손상을 유발하기 위하여 12-16시간 절식한 SD Rat에 olive oil과 사염화탄소(CCL)를 1:4로 혼합한 용액을 2mL/kg body weight 로 복강으로 투여하였다. 시험물질은 독성유발물질(CCl4) 투여 6 시간 전후 경구로 투여하였다.
- 결과적으로 본 실험에서 olive oil과 혼합한 CCl4를 복강내 투여하여 유도된 급성간손상 모델에서는 CCl4 투여로 간세포 의 손상과 파괴를 유발하였지만, 전반적으로 지질에 대한 합성율, 이용율 및 분비율 이 평형을 이루고 있음을 시사한다. 다음으로 간손상 유발물질(CCl4) 투여 후 시험 물질(CMPD extract) 또는 양성대조물질 (silymarin)을 투여한 동물에서의 간손상 지표를 손상대조군 (G2) 과 비교하였다. 간손상의 주요 지표인 GOT 측정에서 CCl4 손상대조군(G2)의 3174.
- 단회경구투여 독성시험결과, 시험물질(CMPD extract)의 최고농도(2, 000 ㎎/㎏ body weight)에서 독성을 나타내지 않아 LD50 값을 그 이상으로 결정하였다. 또한 독성물질 (CCl4)로부터 간손상이 유발된 SD rat에 시험물질 (CMPD extract)을 투여한 후 혈청으로부터 간 손상과 관련한 지표물질인 GOT, GPT, TG, TC, LDL 및 HDL 활성도를 측정하였으며, 이와 함께 병리조직학적 소견을 확인하였다.
- 단희경구투여 독성시혐: 본 연구에서는 시험물질의 최고 용량을 건강기능성식품의 단회독성시험에서 적용되는 최고용량 범위에 근거하여 2,000 ㎎/㎏ body weight로부터 공비2로 1, 000, 500 ㎎/㎏ body weight의 3농도 시험군(A2, A3, A4) 및 음성대조군 (멸균증류수; A1)에 대하여 단회경구투여 독성시험을 실시하였다. 시험물질 경구 투여 후 1시간 동안은 지속적으로 관찰하고, 6시간까지는 매시간, 투여 익일부터는 매일 최소 1회씩 관찰하여 최종 14일간 이상반응을 관찰하였다.
- Bio Inc, SeongNam, Korea)로부터 구입하여 사용하였다. 동물 입수 후 검역과 7일간의 순화기간을 거쳐 시험실시 하루 전 암수 각각 5마리씩 배분하여 군분리를 시행하였다. 실험동물은 polycarbonate cage(폭 26cm, 길이 42cm, 높이 18cm) 에넣은 다음, SPF 구역(온도; 19-25oC, 습도; 40-60%, 기류속도; 13- 18cm/sec, 환기횟수; 10-20 회/hr, 기압차; 2-10mmH2。, 명암 cycle; 07:00 점등-19:00 소등, 조도; 150-300 Lux)에서 자외선으로 멸균된 정제수와 실험동물용 사료(SAMTAKO BIO Inc, OSan, Korea)를 자유 섭식시키면서 사육하였다.
- 오리엔트부터 구입하여 시험군당 10마리씩을 사용하였다. 동물의 사육관리 및 사육 환경조건은 단회경구투여 독성 시험과정과 동일한 절차 및 환경에서 수행하였다
- 단회경구투여 독성시험결과, 시험물질(CMPD extract)의 최고농도(2, 000 ㎎/㎏ body weight)에서 독성을 나타내지 않아 LD50 값을 그 이상으로 결정하였다. 또한 독성물질 (CCl4)로부터 간손상이 유발된 SD rat에 시험물질 (CMPD extract)을 투여한 후 혈청으로부터 간 손상과 관련한 지표물질인 GOT, GPT, TG, TC, LDL 및 HDL 활성도를 측정하였으며, 이와 함께 병리조직학적 소견을 확인하였다. 혈청 GOT는 손상군(G2)에 비해 G4, G5 시험물 질투 여군에서 유의한 감소를 나타내었으며, GPT의 경우 고용량 시험물질 투여군(G4)에서 유의한 감소를 나타내었다(p < 0.
- 시험물질인 굼벵이 유래 밀리타리스 동충하초 열수추출물 (CMPDextract)의 LD50(lethal dose of 50%) 값을 통한 안전성 자료를 확보하기 위하여 단회경구투여 독성 시험을 실시하였다. 모든 동물에 대한 임상증상관찰은 매일 최소 1회씩 최종 14일간 관찰하였다. 그 결과 음성대조군(A1)을 포함한 모든 시험물질 투여그룹 (A2, A3, A4)에서 시험물질에 기인한 외견상의 임상적 증상변화도 관찰되지 않았으며, 사망 동물도 발생하지 않았다.
- 시험물질 경구 투여 후 1시간 동안은 지속적으로 관찰하고, 6시간까지는 매시간, 투여 익일부터는 매일 최소 1회씩 관찰하여 최종 14일간 이상반응을 관찰하였다. 체중은 입수 시, 군 분리 시, 시험물질 투여 후 1일, 3일, 7일, 14일째에 측정하였고, 투여 14일 이후에 모든 생존동물은 외관검사를 실시한 다음 부검하여 육안적 이상소견을 검사하였다.
- 급성 간손상 유발 및 시험물질 투여: G2-G6군에서는 급성 간 손상을 유발하기 위하여 12-16시간 절식한 SD Rat에 olive oil과 사염화탄소(CCL)를 1:4로 혼합한 용액을 2mL/kg body weight 로 복강으로 투여하였다. 시험물질은 독성유발물질(CCl4) 투여 6 시간 전후 경구로 투여하였다. G1군은 손상유발물질 투여 과정 없이 부형제인 3차증류수를 6시간 전후 경구로 투여하였다.
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단회경구투여 독성시험
시험물질인 굼벵이 유래 밀리타리스 동충하초 열수추출물 (CMPDextract)의 LD50(lethal dose of 50%) 값을 통한 안전성 자료를 확보하기 위하여 단회경구투여 독성 시험을 실시하였다. 모든 동물에 대한 임상증상관찰은 매일 최소 1회씩 최종 14일간 관찰하였다.
- 시혐군의 구성: 시험물질 50, 25, 12.5㎎/㎏ body weight 를 투여하는 시험물질군(G4, G5, G6)과 실리마린(25㎎/㎏ body weight)올 투여하는 양성대조군(G3), 부형제인 3차 증류수만을 투 여하는 손상대조군(G2) 및 간손상을 유발하지 않은 음성대조군 (G1)으로 구분하였다.
- 동물 입수 후 검역과 7일간의 순화기간을 거쳐 시험실시 하루 전 암수 각각 5마리씩 배분하여 군분리를 시행하였다. 실험동물은 polycarbonate cage(폭 26cm, 길이 42cm, 높이 18cm) 에넣은 다음, SPF 구역(온도; 19-25oC, 습도; 40-60%, 기류속도; 13- 18cm/sec, 환기횟수; 10-20 회/hr, 기압차; 2-10mmH2。, 명암 cycle; 07:00 점등-19:00 소등, 조도; 150-300 Lux)에서 자외선으로 멸균된 정제수와 실험동물용 사료(SAMTAKO BIO Inc, OSan, Korea)를 자유 섭식시키면서 사육하였다. 동물실험은 시험 군간 변이요인을 최소화하기 위하여 제 2005-60호 (10.
- 조직슬라이드 제작: 독성유발물질 투여 48시간 후 에테르 마취하에 개복하여 간조직을 절취한 후, 10% 포르말린에 하룻밤 고정하고, 파라핀을 이용하여 포매한 다음, microtome 으로 4-5 μm 두께의 조직 샘플을 박절하여 슬라이드를 제작하였다. 이들슬라이드 로부터 Hematoxylin and Eosin(H&E)염색을 통해 간 조직의 손상 정도를 관찰하였다(23).
- 시험물질 경구 투여 후 1시간 동안은 지속적으로 관찰하고, 6시간까지는 매시간, 투여 익일부터는 매일 최소 1회씩 관찰하여 최종 14일간 이상반응을 관찰하였다. 체중은 입수 시, 군 분리 시, 시험물질 투여 후 1일, 3일, 7일, 14일째에 측정하였고, 투여 14일 이후에 모든 생존동물은 외관검사를 실시한 다음 부검하여 육안적 이상소견을 검사하였다.
- 혈액생화학적 검사: 손상유발물질 투여 48시간 후 에테르 마취하에 개복하여 복대동맥을 통해 채혈하였으며, 회수한 혈액으로부터 혈청을 분리하여 혈액생화학분석기(RAL Tecnica para el Laboratorio, Barcelona, Spain)를 통히]서 glutamic oxalate transam- inase(GOT)와 glutamic pyruvate transaminase(GPT), 중성지방(triglyceride, TG), 총콜레스테 롤(total cholesterol, TC), 고밀도 지질단백질(high density lipoprotein, HDL) 및 저밀도 지질단백질(low density lipoprotein, LDL)을 측정하였다(1, 18, 22).
대상 데이터
- 굼벵이 유래 밀리타리스 동충하초 열수추출물(CMPD extract) 은 갈색고형분말로 서귀포시 농업기술센터(SeogWpo, Korea) 에서 제공받았다. 즉 굼벵이 유래 밀리타리스 동충하초 시료 100g 에 500 mL의 3차 증류수를 넣고, 70oC 온도에서 1시간 동안 가열 교반 하면서 추출하였다.
- 시험동물 및 사육환경: 시험동물은 6주령의 수컷 SD 成를 (주)오리엔트부터 구입하여 시험군당 10마리씩을 사용하였다. 동물의 사육관리 및 사육 환경조건은 단회경구투여 독성 시험과정과 동일한 절차 및 환경에서 수행하였다
- 62mg 의 코디세핀을 함유한 로트를 4oC 에 보관하면서 사용하였다. 시험물질 조제는 당일에 멸균된 3차 증류수에 용해시켜 사용하였다.
- 시혐동물 및 사육환경: 시험동물은 5주령의 SD mt을 (주 오리엔트(Orient Bio Inc, SeongNam, Korea)로부터 구입하여 사용하였다. 동물 입수 후 검역과 7일간의 순화기간을 거쳐 시험실시 하루 전 암수 각각 5마리씩 배분하여 군분리를 시행하였다.
- 즉 굼벵이 유래 밀리타리스 동충하초 시료 100g 에 500 mL의 3차 증류수를 넣고, 70oC 온도에서 1시간 동안 가열 교반 하면서 추출하였다. 이들 열수추출액을 필터한 후 여과액으로부터 HPLC를 이용하여 지표성분인 cordycepin의 함량을 측정하였으며, 본 시험에 사용한 시험물질은 건조중량 1g 당 4.62mg 의 코디세핀을 함유한 로트를 4oC 에 보관하면서 사용하였다. 시험물질 조제는 당일에 멸균된 3차 증류수에 용해시켜 사용하였다.
데이터처리
- 0, SPSS Inc, Chicago, IL,USA)를 이용하였다. 각 실험군마다 평균±표준오차로 표시 하였으며, 각 군의 유의성은 p <0.05 수준으로 ANOVe Scheffe test에 의해 검정하였다.
- 단회경구투여 독성시험 및 간기능개선에 관한 효능평가 시험에서 체중변화 및 혈액생화학적 결과의 통계 분석은 SPSS(statisticalpackage social science, version 12.0, SPSS Inc, Chicago, IL,USA)를 이용하였다. 각 실험군마다 평균±표준오차로 표시 하였으며, 각 군의 유의성은 p <0.
이론/모형
- 실험동물은 polycarbonate cage(폭 26cm, 길이 42cm, 높이 18cm) 에넣은 다음, SPF 구역(온도; 19-25oC, 습도; 40-60%, 기류속도; 13- 18cm/sec, 환기횟수; 10-20 회/hr, 기압차; 2-10mmH2。, 명암 cycle; 07:00 점등-19:00 소등, 조도; 150-300 Lux)에서 자외선으로 멸균된 정제수와 실험동물용 사료(SAMTAKO BIO Inc, OSan, Korea)를 자유 섭식시키면서 사육하였다. 동물실험은 시험 군간 변이요인을 최소화하기 위하여 제 2005-60호 (10.21)의 “의약품 등의 독성기준시험” 및 비임상관리 기준에 따라 실시하였다.
성능/효과
- 6 U/L로 농도 의존적이고 통계적 유의성이 있는 감소를 나타내었다. GPT 측정에서도 CCl4 손상대조군(G2)의 820.3 U/L에 비하여 양성대조군(G3)은 713.5 U/L로 다소 낮아진 반면, 시험물질투여군(G4, G5, G6)에서는 각각 418.6(p<0.05), 489.3, 621.5 U/L로 농도 의존적이고 유의성 있는 감소양상을 보였다(Fig. 1B). 따라서 본 시험에 사용한 굼벵이 유래 밀리타리스 동충하초 열수추출물(CMPD extract) 은양성대조물질인 silymarin 이상의 간보호효과를 보이는 것으로 사료된다.
- 다음으로 간손상 유발물질(CCl4) 투여 후 시험 물질(CMPD extract) 또는 양성대조물질 (silymarin)을 투여한 동물에서의 간손상 지표를 손상대조군 (G2) 과 비교하였다. 간손상의 주요 지표인 GOT 측정에서 CCl4 손상대조군(G2)의 3174.2 U/L에 비하여 양성대조군(G3)에서는 2689.5 U/L로 다소 낮아진 반면, 시험물질 투여군(G4, G5, G6)에서는 각각 1412.9(p<0.05), 1562.4(p<0.05), 1782.6 U/L로 농도 의존적이고 통계적 유의성이 있는 감소를 나타내었다. GPT 측정에서도 CCl4 손상대조군(G2)의 820.
- 또한 HDL 수치에서는 시험물질 투여군(G4, G5, G6)이 손상군(G2)에 비해 증가를 보였으나 통계적으로 유의한 차이는 나타내지 않았다(Table 3). 결과적으로 본 실험에서 olive oil과 혼합한 CCl4를 복강내 투여하여 유도된 급성간손상 모델에서는 CCl4 투여로 간세포 의 손상과 파괴를 유발하였지만, 전반적으로 지질에 대한 합성율, 이용율 및 분비율 이 평형을 이루고 있음을 시사한다. 다음으로 간손상 유발물질(CCl4) 투여 후 시험 물질(CMPD extract) 또는 양성대조물질 (silymarin)을 투여한 동물에서의 간손상 지표를 손상대조군 (G2) 과 비교하였다.
- 2B). 고용량의 굼벵이 유래 밀리타리스 동충하초 열수추출물(CMPD extract)(50 ㎎/㎏ body weight)을 투여한 시험물질 투여군(G4)과 silymarin을 투여한 양성대조군(G3)에서는 CCl4에 의해 일부 간손상이 일어나 세포의 파괴와 넓어진 세포간극을 보이고 있으나, 손상정도가 CCl4 투여군(G2)에 비해 확연히 감소하였음을 관찰할 수 있다(Fig.2C, 2D).
- 모든 동물에 대한 임상증상관찰은 매일 최소 1회씩 최종 14일간 관찰하였다. 그 결과 음성대조군(A1)을 포함한 모든 시험물질 투여그룹 (A2, A3, A4)에서 시험물질에 기인한 외견상의 임상적 증상변화도 관찰되지 않았으며, 사망 동물도 발생하지 않았다. 또한 시험물질 투여 후 0, 1, 3, 7, 14일째 측정한 체중 에서도 암수 모든 군에서 대조군과 비교하여 유의성 있는 차이가 나타나지 않았으며(Table 1), 부검시 시험물질을 투여한 모든 군에서 어떠한 육안적 이상소견도 관찰되지 않았다(Table 2).
- 또한 시험물질 투여 후 0, 1, 3, 7, 14일째 측정한 체중 에서도 암수 모든 군에서 대조군과 비교하여 유의성 있는 차이가 나타나지 않았으며(Table 1), 부검시 시험물질을 투여한 모든 군에서 어떠한 육안적 이상소견도 관찰되지 않았다(Table 2). 따라서 SD rat를 이용한 굼벵이 유래 밀리타리스 동충 하초 열수추출물(CMPD extract) 의 단회경구투여 독성시험 결과, 임상증상관찰 및 사망동물, 체중 변화, 육안적 해부소견에 따라 최고농도 2,000㎎/㎏ body weight 에서 어떠한 이상변화도 나타나지 않아 본 실험에서는LD50 값을 2,000 ㎎/㎏ body weight 이상으로 산출하였다.
- 1B). 따라서 본 시험에 사용한 굼벵이 유래 밀리타리스 동충하초 열수추출물(CMPD extract) 은양성대조물질인 silymarin 이상의 간보호효과를 보이는 것으로 사료된다. 간의 합성능력 중 지질대사와 관련한 지표인 TG와 TC 측정에서는 모든 실험군에서 유의한 변화를 관찰할 수 없었다.
- 05). 또한 LDL 및 HDL 활성도는 손상군 (G2) 에 비해 유의하지는 않지만 시험 물질투여군(G4, G5, G6)에서 어느 정도 회복기미를 보였다. 병리 조직학적 소견에서도 손상군(G2)의 경우 심각한 세포독성을 보였으나, 시험물질 고용량 투여군 (G4) 에서는 손상된 세포가 감소하였음을 확인하였다.
- 그 결과 음성대조군(A1)을 포함한 모든 시험물질 투여그룹 (A2, A3, A4)에서 시험물질에 기인한 외견상의 임상적 증상변화도 관찰되지 않았으며, 사망 동물도 발생하지 않았다. 또한 시험물질 투여 후 0, 1, 3, 7, 14일째 측정한 체중 에서도 암수 모든 군에서 대조군과 비교하여 유의성 있는 차이가 나타나지 않았으며(Table 1), 부검시 시험물질을 투여한 모든 군에서 어떠한 육안적 이상소견도 관찰되지 않았다(Table 2). 따라서 SD rat를 이용한 굼벵이 유래 밀리타리스 동충 하초 열수추출물(CMPD extract) 의 단회경구투여 독성시험 결과, 임상증상관찰 및 사망동물, 체중 변화, 육안적 해부소견에 따라 최고농도 2,000㎎/㎏ body weight 에서 어떠한 이상변화도 나타나지 않아 본 실험에서는LD50 값을 2,000 ㎎/㎏ body weight 이상으로 산출하였다.
- SD rat에 olive oil과 혼합한 CCl4를 복강 내로 주사한 다음, 시험물질은 CCl4 투여 전후로 6시간째 각각 2회 투여하였으며, 최종투여 48시간 후에 채혈한 혈청으로부터 간손상 지표를 측정하였다. 먼저 CCl4 손상군(G2)과 음성대조군(G1)간의 비교에서 GOT(G2; 3174.2 U/L, G1; 150.7 U/L)와 GPT(G2; 820.3 U/L, G1;54.3 U/L) 측정치는 각각 통계적으로 유의하게(p<0.05) 증가하였음을 확인하였다(Fig. 1A). 반면 손상군(G2)에 비해 시험물질 투여군(G4, G5, G6)의 TC 및 LDL 측정치는 큰 변화를 보이지 않았으며(Table 3), TG 수치 에서는 시험물질 투여군(G4, G5, G6)이 손상군 (G2)과 비교할 경우 다소 감소하는 경향을 나타내었으나 통계적으로 유의성을 나타내지 않았다.
- 1A). 반면 손상군(G2)에 비해 시험물질 투여군(G4, G5, G6)의 TC 및 LDL 측정치는 큰 변화를 보이지 않았으며(Table 3), TG 수치 에서는 시험물질 투여군(G4, G5, G6)이 손상군 (G2)과 비교할 경우 다소 감소하는 경향을 나타내었으나 통계적으로 유의성을 나타내지 않았다. 또한 HDL 수치에서는 시험물질 투여군(G4, G5, G6)이 손상군(G2)에 비해 증가를 보였으나 통계적으로 유의한 차이는 나타내지 않았다(Table 3).
- 또한 LDL 및 HDL 활성도는 손상군 (G2) 에 비해 유의하지는 않지만 시험 물질투여군(G4, G5, G6)에서 어느 정도 회복기미를 보였다. 병리 조직학적 소견에서도 손상군(G2)의 경우 심각한 세포독성을 보였으나, 시험물질 고용량 투여군 (G4) 에서는 손상된 세포가 감소하였음을 확인하였다. 이상의 결과들은 굼벵이 유래 밀리타리스 동충하초 열수추출물(CMPD extract)이 CCl4 투여에 의해 유발된 급성간 손상에 대하여 간조직의 보호와 간세포의 기능유지에 유효한 물질임을 제시 하고 있다.
- 병리 조직학적 소견에서도 손상군(G2)의 경우 심각한 세포독성을 보였으나, 시험물질 고용량 투여군 (G4) 에서는 손상된 세포가 감소하였음을 확인하였다. 이상의 결과들은 굼벵이 유래 밀리타리스 동충하초 열수추출물(CMPD extract)이 CCl4 투여에 의해 유발된 급성간 손상에 대하여 간조직의 보호와 간세포의 기능유지에 유효한 물질임을 제시 하고 있다.
- 또한 독성물질 (CCl4)로부터 간손상이 유발된 SD rat에 시험물질 (CMPD extract)을 투여한 후 혈청으로부터 간 손상과 관련한 지표물질인 GOT, GPT, TG, TC, LDL 및 HDL 활성도를 측정하였으며, 이와 함께 병리조직학적 소견을 확인하였다. 혈청 GOT는 손상군(G2)에 비해 G4, G5 시험물 질투 여군에서 유의한 감소를 나타내었으며, GPT의 경우 고용량 시험물질 투여군(G4)에서 유의한 감소를 나타내었다(p < 0.05). 또한 LDL 및 HDL 활성도는 손상군 (G2) 에 비해 유의하지는 않지만 시험 물질투여군(G4, G5, G6)에서 어느 정도 회복기미를 보였다.
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