[논문]와편모조류 시스트 분리를 위한 Panning 방법과 SPT 용액방법의 비교

강윤자; 문창호; 조현진

doi:10.5657/kfas.2008.41.3.228

[국내논문] 와편모조류 시스트 분리를 위한 Panning 방법과 SPT 용액방법의 비교
Comparison of Panning and Sodium Polytungstate Methods for Separating Dinoflagellate Cysts 원문보기

한국수산학회지 = Journal of the Korean Fisheries Society, v.41 no.3, 2008년, pp.228 - 231

강윤자 (부경대학교 해양학과) , 문창호 (부경대학교 해양학과) , 조현진 (해양경찰청)

Abstract ▼ AI-Helper

Two methods for separating dinoflagellate cysts from marine sediments were compared: panning and sodium polytungstate (SPT). After pretreatment with the SPT solution, Protoperidinium species had a high germination rate and cell growth rate. The germinated cells grew continuously, even in a low nutrient environment. Alexandrium cysts did not germinate, because their germination is usually active in winter. Using SPT solution, the separation process was easier, quicker, and caused much less eye fatigue than the panning method. Therefore, SPT solution offers a convenient way of pretreating dinoflagellate cysts for separation and analysis.

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AI 본문요약
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문제 정의

따라서, 본 연구에서는 저질속의 와편모조류 시스트를 더 정확하게 동정하고, 간편하게 분리하는 방법으로 SPT 용액을 이용한 방법을 소개하고, 일반적으로 사용되고 있는 panning 방법과 비교 분석하였다. 또한, SPT 용액을 이용하여 분리한 와편모조류 시스트를 발아시켜 발아율을 살펴봄으로써, SPT 용액을 사용하는 방법의 효율성을 조사하고자 하였다.
비교 분석하였다. 또한, SPT 용액을 이용하여 분리한 와편모조류 시스트를 발아시켜 발아율을 살펴봄으로써, SPT 용액을 사용하는 방법의 효율성을 조사하고자 하였다.

제안 방법

3 g/cm³의 SPT 용액을 만들었다. 이 혼합액을 이용하여 퇴적물로부터 와편모조류 시스트를 분리하는데, 먼저 퇴적물 시료 중 10 g을 덜어서 FSW오+ 혼합하여 현탁액을 만들고, 약 10-20 초간 초음파처리를 거친 뒤, 공경 125 “m와 20“m 크기의 체에 각각 거르고, 10 mL 폴리에틸렌 튜브에 담아 침전시켰다. 그 후, 상등액을 제거하고, 마이크로 피펫을 이용하여 비중이 L3g/cm³인 SPT 용액 3mL를 현탁액 아래에 주입하였다.
그 후, 상등액을 제거하고, 마이크로 피펫을 이용하여 비중이 L3g/cm³인 SPT 용액 3mL를 현탁액 아래에 주입하였다. 이를 10분간 원심분리시켜 퇴적물 (비중 1.3 g/m3 이상), SPT 용액 셔]중 1.3 g/cm%「洲, (비중 1.3 g/cm³ 이하) 각각 세 개의 층으로 분리시켰다. 여기서, FSW와 SPT 용액 사이에 부유하고 있는 와편모조류 시 스트 (비 중 1.
3g/cm³)를 새 로운 테스트 튜브로 옮겨 FSW를 넣고 원심분리하여 상등액을 제거하고 5一6회 반복 세척하였다. 퇴적물에서 분리된 시스트는 마이크로피펫으로 한 세포씩 분리하여 SWH 배지 (Iwasaki, 1961) 가든 96-well 배양용기에 넣고, 15일 동안 20°C에서 배양(12:12 LD cycle)하면서 발아유무를 매일 관찰하였다. 세포는 발아공의 유무에 따라 생 시 스트 (living cysts) 와 공시 스트 (empty cysts)를 판단하였으며, 생시스트만을 실험에 사용하였다.
세포는 발아공의 유무에 따라 생 시 스트 (living cysts) 와 공시 스트 (empty cysts)를 판단하였으며, 생시스트만을 실험에 사용하였다. 시스트의 발아상태는 영양세포가 출현하거나, 발아한 뒤 남은공시스트가 관찰되면 발아한 것으로 하였다.

대상 데이터

본 연구를 위한 시료 채취는 경상남도 통영시 산양읍 인근 해역에서 2006년 9월 14일에 수행하였다. 길이 30cm, 지름 1.
2006년 9월 14일에 수행하였다. 길이 30cm, 지름 1.1 cm의 아크릴 튜브가 들어있는 중력 채니기를 이용하여 5개 정점에서 표층 퇴적물 시료를 채취하여 분리 및 배양하는데 사용하였다. 퇴적물 시료는 아크릴 튜브 내 해수와 같이 밀봉하여, 실험실로 운반한 뒤, 전처리하기 전까지 냉장 보관하였다.
퇴적물에서 분리된 시스트는 마이크로피펫으로 한 세포씩 분리하여 SWH 배지 (Iwasaki, 1961) 가든 96-well 배양용기에 넣고, 15일 동안 20°C에서 배양(12:12 LD cycle)하면서 발아유무를 매일 관찰하였다. 세포는 발아공의 유무에 따라 생 시 스트 (living cysts) 와 공시 스트 (empty cysts)를 판단하였으며, 생시스트만을 실험에 사용하였다. 시스트의 발아상태는 영양세포가 출현하거나, 발아한 뒤 남은공시스트가 관찰되면 발아한 것으로 하였다.
그 외에도 Quinquecuspis conctretum^ Pro- toperidinium americanum^ Scrippsiella trochoidea, Votadinium carvum, Votadinium sp订iosum&\ 발아하였다. 이 중 Quin quecuspis concretum, Votadinium carvum, Votadinium spinosum 은 10 ceils을 배양 시켰고, 모두 발아하였다. 그러나 Pro toperidinioid groups Selenopempix alticintum, Goniaulacoid group의 Alexandrium affine, Alexandrium catenella Alexandrium tamarense, Tuberculodinioid group의 Tuberculodiniwn vacant- pg는 발아하지 않았다 (Table 1).

성능/효과

실험이 진행된 15일 동안 타가영양종인 Protoperidinioid group에 속하는 종들의 발아율이 높았고, 대부분 2-4일이면발아하였고, 꾸준한 성장을 보였다. Brigantedinium 속은 생시트로는 정 확한 종 (species)까지 구분하기 힘듦으로, 생 시스트중 발아한 것들을 그 유영세포와 비교 후, 시스트 종별 발아 정도를 파* 악하였다 30 ceHs의 Brigantedinium sp.
본 연구에서는 10월에 총 36 cells의 Alexandrium 휴면포자를 분리 배양하였으나 Alexundrh的의 발아가 거의 일어나지 않았던 것은 중분한 휴면기간을 지난 후인 1월과 2월이 발아가 가장 활발히 일어나기 때문인 것으로 판단된다. SPT 용액을 이용하여 와편모조류 시스트를 저질로부터 분리 및 배양한 결과, 시스트의발아율에도 큰 변화가 없었고, Fig. 1에서 한눈에 보아도 비교 가능하듯이 동일한 시료를 전치리했을 때, panning 방법을 이용하였을 때 보다 눈에 띄게 많은 와편모조류 시스트 수가 분리되었다. 무엇보다도 SPT 용액을 사용하면 panning 방법에 비해 상대적으로 세포 손실률이 적고, 세포벽 손상율도 낮아 와편모조류 시스트 연구시 실험의 오차를 줄일 수 있을 것으로 판단된다.

후속연구

발아실험에서도 배양기에 넣기 전까지는 최대한 빛을 차단하고, 시료 채집시의 온도를 유지하도록 하는 것이 필요하다. 그러므로 SPT 용액을 사용하면 세포 분리 시 걸리는 시간을 단축시켜 발아에 미치는 빛의 영향도 panning 방법을 이용하였을 떄 보다 낮출 수 있을 것으로 판단된다.
1에서 한눈에 보아도 비교 가능하듯이 동일한 시료를 전치리했을 때, panning 방법을 이용하였을 때 보다 눈에 띄게 많은 와편모조류 시스트 수가 분리되었다. 무엇보다도 SPT 용액을 사용하면 panning 방법에 비해 상대적으로 세포 손실률이 적고, 세포벽 손상율도 낮아 와편모조류 시스트 연구시 실험의 오차를 줄일 수 있을 것으로 판단된다.

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