성능/효과

• 6시간. 24시간, 48시간, 72시간 장기섭취율을 비교한 결과 시간에 따라 혈액내 방사능치가 서서히 감소하였고 다른 장기의 섭취도 시간에 따라 감소하였고 종양의 섭취는 48시간까지 증가하였다가 그 이후는 감소하였다. 흑색종 동물모델에 131I-DC101 치료를 시행한 결과 3 번째 주사까지는 각군간의 유의한 차이를 보이지 않다가 4번째 주사를 시행한 때부터 1군과 2군, 또는 1군과 4군 간의 유의한 차이를 보이기 시작했다.
• 평가하였다. 24시간까지 확인한 결과 90% 이상의 표지 효율을 보였다(Fig. 2).
• 전체 치료 일수는 17일 이었다. 4회 주사 후 2일째 측정한 결과 식염수를 주사한 군과 100 μg, 150 μg 주사한 군에서 각각 유의한 차이를 보였으나(*P=0.036, **P= 0.032), 5회 주사 후에는 어느군에서도 유의한 차이를 보이지 않았다. 치료효과가 있는 정맥주사량의 결정을 위해 시행한 예비실험결과에서는 흑색종에서 DC101 50 μg의 정맥주사로는 치료효과를 유도할 수 없을 것으로 판단하였다.
• 011 이었다. 5번째 주사한 후 종양체적증가 억제는 PBS를 주사한 군과 비교하여 2군과 4군, 5군에서 의의 있는 억제효과를 보였다. 5번째 주사 후 대조군에 비해 2군과 4군, 5군에서 각각 0.
• 5군은 131I-DC101 15 μg(200 μCi)을 각각 매 3일 ~ 4일마다 주사하고 전체 5회를 주사하였고 종양볼륨을 측정하였다. 결과: 131I-DC101 을 흑색종 모델에 정맥주사하고 78시간까지 영상을 얻은 결과 시간에 따라 종양섭취가 증가하는 영상을 보였다. 시간대별 장기섭취를 정확히 확인하기 위하여 1시간.
• 또한 5번째 주사 이후에는 5군에서도 유의한 차이를 보여 I-131에 의한 효과가 뚜렷해 짐을 확인하였다. 결론 : 마우스 Flk-1 항체로 알려진 DC101 을 흑색종 모델에 정맥내 주사 하였을 때, 종양성장억제 효과를 보이지 않는 항체양에서도 I-131 을 표지하여 치료를 시행했을 경우에는 효율적인 종양성장억제 효과를 보였다.
• 본 연구결과는 경우에따라서 개체별로 충분한 양의 항체가 전달되지 않더라고 방사면역치료를 시행하는 경우에는 치료효과를 충분히 볼 수 있다고 증명하였다는데 그 의의가 있을 것이라 사료된다. 결론적으로, anti-Flk-1 항체에 I-131 을 이용한 방사면역치료는 신생혈관형성을 억제하는 항체 자체 효과가 나타나지 않는 정도의 항체 양에서도 항체에 의해 신생혈관 및 종양세포에 I-131 이 축적되게 됨으로써 방사능에 의한 치료 효과가 발생하게 됨을 확인할 수 있었다.
• 27 nM 이었다. 누드 마우스에 키운 흑색종 종양조직과 흑색종 세포를 각각 western blot 분석을 한 결과 약 170 kDa에 해당된 부위에서 밴드가 관찰되어 종양조직과 세포에 Flk-1 가 발현되어 있음을 확인하였다(Fig. 1B). 조직에서 발현이 좀더 낮아 보이는 이유는 종양세포 외에 종양조직을 구성하는 다른 단백질들의 존재로 세포에서 보여지는 발현정도 보다는 낮게 관찰된 것으로 해석된다.
• 이는 I-131 DC101을 이용하여 흑색종 종양 모델에서 방사면역치료를 시도하였을 때 유의한 치료 효과가 없는 항체 양임에도 불구하고 I-131 을 이용한 방사면역치료의 경우 종양성장이 대조군에 비해 유의미하게 억제됨을 알 수 있었다. 또한 5회 투여 후에는 DC101 15 μg에 I-131 을 표지한 군에서도 유의한 차이를 보이기 시작해서 I-131 에 의한 효과가 확실해 짐을 확인할 수 있다.
• 이러한 예비실험결과를 바탕으로 본 연구에서는 정맥 내 주사량을 DC101 50 μg 이하로 결정하여 I-131에 의한 치료효과 여부를 확인하여 보기로 하였다. 본 연구에서도 예비실험결과와 마찬가지로 I-131 이 표지되지 않은 DC101 50 μg의 농도로는 역시 유의한 치료효과를 보이지 않았다(Fig. 5). 그러나 DC101 30 ng과 50 μg에 I-131 을 표지한 군에서는 4회 투여부터는 유의한 차이를 보이기 시작했다.
• 그러나 아직까지 항체의 복강주사량에 의한 효과를 보고한 예는 많지만 이와 정맥주사량의 관계에 대한 연구를 찾아보기는 힘들었다. 본 연구자들은 흑색종 종양세포에서 주사한 항체가 복강을 통해 혈액내로 모두 흡수된다는 것을 전제로 IC50값이 9.27 nM임 과 3%ID/g의 종양표적성을 갖는 결과를 가지고 추정하였을 때 복강내에 800 Hg 정도를 주사하여야 함을 계산을 통해 알 수 있었고, 이는 기존의 생체적용 연구결과들에서 실제 효과를 나타낸 항체량과 비슷한 정도였다. 그러나 이러한 양은 앞에서도 언급하였듯이 많은 양의 항체이고 주사경로에도 제한점이 있었기 때문에 흑색종에서의 복강주사량과 정맥주사량과의 관계를 정립하기 위해 예비실험으로 흑색종을 4개 군으로 나누어서 각각 PBS, DC101 50 μg, DC101 100 μg, DC101 150 μg을 정맥 주사하여 치료효과를 확인하였다.
• 3). 생체내 분포를 확인한 결과 혈액내 방사능치는 시간에 따라 점점 감소하였고 다른 장기들도 비슷한 양상을 보였다. 종양 섭취는 48시간째에는 2.
• 1A). 억제 실험(Inhibition study)을 시행한 결과 VEGF 농도에 따라 DC101 이 Flk-1에 결합되는 정도가 감소되는 것을 확인할 수 있었다. IC50 값은 9.
• 그러나 DC101 30 ng과 50 μg에 I-131 을 표지한 군에서는 4회 투여부터는 유의한 차이를 보이기 시작했다. 이는 I-131 DC101을 이용하여 흑색종 종양 모델에서 방사면역치료를 시도하였을 때 유의한 치료 효과가 없는 항체 양임에도 불구하고 I-131 을 이용한 방사면역치료의 경우 종양성장이 대조군에 비해 유의미하게 억제됨을 알 수 있었다. 또한 5회 투여 후에는 DC101 15 μg에 I-131 을 표지한 군에서도 유의한 차이를 보이기 시작해서 I-131 에 의한 효과가 확실해 짐을 확인할 수 있다.
• 저자들은 이번 실험에서 Figure 3에서와 같이 항체에 H31 을 표지하여 종양 표적성 여부 및 표적 지속시간대를 먼저 파악하였는데 3일 이상 지속적으로 표적성이 유지되는 것을 확인할 수 있었다. 이는 I-131 표지 항체에 의해 충분한 양의 방사능이 전달되면 방사능치료 효과가 예상되는 결과라고 생각할 수 있다.
• 이는 I-131 표지 항체에 의해 충분한 양의 방사능이 전달되면 방사능치료 효과가 예상되는 결과라고 생각할 수 있다. 정확한 종양 표적성은 생체 내 분포 실험을 진행하여 Table 1과 Figure 4에 정리된 결과와 같이 DC101 을 정맥주사하였을 때 흑색종 종양 모델에서 약 3%ID/g의 종양 표적성이 있음을 파악하였다. 그러나 아직까지 항체의 복강주사량에 의한 효과를 보고한 예는 많지만 이와 정맥주사량의 관계에 대한 연구를 찾아보기는 힘들었다.
• 032), 5회 주사 후에는 어느군에서도 유의한 차이를 보이지 않았다. 치료효과가 있는 정맥주사량의 결정을 위해 시행한 예비실험결과에서는 흑색종에서 DC101 50 μg의 정맥주사로는 치료효과를 유도할 수 없을 것으로 판단하였다. 이러한 예비실험결과를 바탕으로 본 연구에서는 정맥 내 주사량을 DC101 50 μg 이하로 결정하여 I-131에 의한 치료효과 여부를 확인하여 보기로 하였다.
• 항체를 분리하여 분자량분석을 시행한 결과 147,650 Da 이었고, ELISA binding affinity 분석결과 Kd 값은 3.05 pM 이였다(Fig. 1A). 억제 실험(Inhibition study)을 시행한 결과 VEGF 농도에 따라 DC101 이 Flk-1에 결합되는 정도가 감소되는 것을 확인할 수 있었다.