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문제 정의
- 이에 따라 월동세대의 성충 모니터링은 차세대 형성 시기를 예측하는데 중요하다 그러나 이 시기에복숭아순나방 페로몬 트랩에 이 해충과 유사한 나방류가포획되는 것이 안동지역 사과원은 물론이고 군위, 영천및 경산 지역의 사과 재배지에서도 문제시되고 있다. 본연구는 이 나방류의 발생 상황을 안동지역을 중심으로모니터링하였으며, 이 나방류와 복숭아순나방의 판별 지표를 개발하는데 목표를 두고 연구를 진행하였다.
제안 방법
- 2. Occurrence of an unidentified moth ('vOFM') tiapped to a sex pheromone trap of Grapholita molesta ('OFM') (A) Moni- tering of vOFM population in Andong, in which ten pheromone traps were deployed in apple orchards and their vicinity. (B) Comparison of population density of two moth types in apple orchards and their vicinity.
- 이후 최종 사슬연장 단계가추가로 72℃ 에서 10분간 이뤄졌다. PCR 생성물은 lx TAE (40 mM Tris-acetate, 1 mM EDTA, pH 8.0)에서 1% 아가로즈젤로 확인하였다.
- mtDNA 영역별 PCR 증폭물은 PCRquick-spin ((주) 인트론바이오테크놀로지, 대전)을 이용하여 프라이머를 제거시켰고, PCR2.1 TOPO 키트(Invitrogen, Carlsbad, USA) 를 사용하여 클로닝벡터에 재조합시켰다. 재조합된 벡터를 (주) 마크로젠(서울)에 염기서열 분석을 의뢰하여 받은자료를 가지고 DNAstar 프로그램(Version 5.
- 비사과원 지역은 기느리와 길안 사이 지역에서 인접한(최소 500 m 거리) 사과원이 없는 네 개 장소로서 이들은 서로 1-3 km 거리를 두었다. 성페로몬 트랩은텔타트랩(그린아그로텍, Model No. 50106, 경산, 한국)을이용하였으며, 여기에 복숭아순나방의 성페로몬 성분인 Z8-12:Ac, E8-12:Ac, Z8-12:OH를 각각 95.0: 5.0: 1.0 (v/v)로 포함시켰다. 트랩 설치는 3월 말에, 모니터링은 4월 1일을 기점으로(이때까지 야외충의 포획이 없었음) 일주일 간격으로 조사하였다.
- 증류수로 용해시켰다. 이 시료를 영역별로 서로 다른제한효소를 처리하는 데, 이때 Cytochome b 영역은 Msp I, Rsa I, Dde I, Taq I로 효소의 구입처인 Roche (Mannheim, Germany) 제조회사의 반응 온도조건에 따라 3시간 동안 처리하였다. 제한효소 처리물은 lx TAE에서 1.
- 1 TOPO 키트(Invitrogen, Carlsbad, USA) 를 사용하여 클로닝벡터에 재조합시켰다. 재조합된 벡터를 (주) 마크로젠(서울)에 염기서열 분석을 의뢰하여 받은자료를 가지고 DNAstar 프로그램(Version 5.01, DNAstar Inc., Madison, USA)을 이용하여 단일염기서열로 정리하였丑 유사종과 근연관계를 알아내기 위해 NCBI GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov)의 Blast 프로그램을 이용하였다.
- 이 시료를 영역별로 서로 다른제한효소를 처리하는 데, 이때 Cytochome b 영역은 Msp I, Rsa I, Dde I, Taq I로 효소의 구입처인 Roche (Mannheim, Germany) 제조회사의 반응 온도조건에 따라 3시간 동안 처리하였다. 제한효소 처리물은 lx TAE에서 1.2% 아가로즈젤로 분리한 후 ethidium bromide로 염색및 UV등에서 확인하였다.
- 0 (v/v)로 포함시켰다. 트랩 설치는 3월 말에, 모니터링은 4월 1일을 기점으로(이때까지 야외충의 포획이 없었음) 일주일 간격으로 조사하였다.
대상 데이터
- (B) Size difference between the two moth. Measurement of each morphological character used 20 individuals in each moth. Different letters above standard deviations represent significant difference among means at Type I error = 0.
- 5 ul로 구성되었다. Primer와 Taq polymerase는 (주) 바이오니어(대전, 한국)로 부터각각 제작 또는 구입하였다. PCR 반응조건은 초기 94℃ 에서 1분간 불활성단계를 거친 후 35 반복으로 증폭 단계를 거쳤다 증폭과정은 94℃ 에서 30초간 변성단계와 프라이머 결합 반응은 46℃ 에서 30초 72℃ 에서 1분 30초의사슬연장 단계로 구성되었다.
- 경북 안동시에 위치한 3개 사과원(기느리A, 기느리B, 길안)과 이들 과수원 사이에 위치한 4개의 비사과원 지역을 대상으로 복숭아순나방 성페로몬을 이용하여 모니터링하였다 기느리A과 기느리B는 서로 100 m 정도 떨어져서 위치했으며, 길안 사과원은 이들로부터 약 10 km 거리에 위치했다. 비사과원 지역은 기느리와 길안 사이 지역에서 인접한(최소 500 m 거리) 사과원이 없는 네 개 장소로서 이들은 서로 1-3 km 거리를 두었다.
- 두 나방류를 판별하기 위해 비교적 종간 변이가 많은미토콘드리아의 cytochrome b 영역(Simon et al., 1994) 을 선정하였다. 이 cytochrome b 영역을 포함한 PCR 증폭물의 염기서열을 분석한 결과 복숭아순나방은 748 bp이고 유사체는 747 bp를 나타내 단 1개의 염기배열 길이차이를 보였다(Fig.
- 위치했다. 비사과원 지역은 기느리와 길안 사이 지역에서 인접한(최소 500 m 거리) 사과원이 없는 네 개 장소로서 이들은 서로 1-3 km 거리를 두었다. 성페로몬 트랩은텔타트랩(그린아그로텍, Model No.
이론/모형
- 각 개체의 수컷 성충을 날개를 제거하고 일반 게놈 DNA 분리 방식(Sambrook et al., 1989)을 이용하여 DNA를추출하였다. 추출된 DNA 시료는 proteinase A를 처리하고 이후 페놀 추출과 에탄올 침강을 이용하여 순수 DNA 를 분리하였다 분리된 DNA는 정량분석한 후 탈이온증류수를 이용하여 약 100 pg/nl으로 희석하여 PCR에 이용하였다.
- 미토콘드리아 DNA (mtDNA) 가운데 cytochrome b 영역의 universal primer를 이용하여 Kim et al. (1998)의방법으로 증폭하였다. 이때 프라이머 서열은 5'-CATAT TAAAC CCGAA TGATA YTT-3, 과 5'-GATTT TGCTG AAGGT GAATC AGA-孑이다.
성능/효과
- 각 PCR 시료의 구성은다음과 같았다. DNA 추출액 2 |11, dNTP 5 |il, 10x PCR 완충용액 5 jil, primer 각각 2 |il (25 pmol/|il), Taq polymerase 0.5 nl, 3차증류수 33.5 ul로 구성되었다. Primer와 Taq polymerase는 (주) 바이오니어(대전, 한국)로 부터각각 제작 또는 구입하였다.
- 몸의 크기는 머리 및 가슴에서 차이가 크며 전체적으로복숭아순나방 수컷의 평균 체장이 5.9 mm인데 반해, 유사체는 7.4 mm로서 약 1.25배 크기 차이를 보였다(Fig. IB).
- , 1994) 을 선정하였다. 이 cytochrome b 영역을 포함한 PCR 증폭물의 염기서열을 분석한 결과 복숭아순나방은 748 bp이고 유사체는 747 bp를 나타내 단 1개의 염기배열 길이차이를 보였다(Fig. 3A). 물론 이들 증폭물의 크기는 초파리류(Dmsc沥〃a 丿夙泌a)에서 비롯된 예상 크기(713 bp) 보다 모두 큰 크기였다(Clary and Wolstenholme, 1985).
- 3B). 이러한염기서열 변이 속에서 제한효소로 분석한 결과 4개의 제한효소가 복숭아순나방과 이 유사체 사이에 비교적 큰차이를 보여 판별 분자마커로서 유용성을 나타냈다(Fig.3C). 본 연구 결과는 추후 복숭아순나방 유사체의 분류동정 결과가 나오게 되면, 이들이 사과에 피해를 주는정도를 분석하는데 유용한 분자마커로서 이용될 수 있다고 제시한다.
후속연구
- 3C). 본 연구 결과는 추후 복숭아순나방 유사체의 분류동정 결과가 나오게 되면, 이들이 사과에 피해를 주는정도를 분석하는데 유용한 분자마커로서 이용될 수 있다고 제시한다.
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