본 연구는 성인 흡연자를 대상으로 NKF 정제를 단기 (4,000 U를 1회 투여)와 장기(2,000 U를 매일 1회 4주 투여) 실험을 통하여 NKF의 혈전용해 개선 및 항 동맥경화효과를 검증하였다. 임상대상자는 20세${\sim}$31세의 건강한 성인으로 하루 흡연량이 하루 1갑 이상인 고혈압 또는 항 혈전증 약을 섭취하지 않는 사람을 선정하여 무작위로 placebo군과 NKF군으로 분류하여 이중맹검법으로 실험을 하였다. NKF와 placebo 정제는 (주)HK바이오텍에서 제공하였다. 단기시험은 placebo군(10명)과 NKF군(29명)을 대상으로 NKF 섭취전과 섭취 1, 2, 4시간에 혈전용해효과를 검토하였고, 장기시험은 placebo군 10명과 NKF군 15명에게 NKF 섭취 전과 섭취 후 매주 혈전용해효과 및 혈압개서효과를 검토하였다. 단기시험에서 fibrin clot 용해능은 placebo군에 비해 NKF군에서는 섭취 후 2시간에 유의적으로 증가하여 4시까지 그 활성이 유지되었다. ECLT도 NKF 섭취 후 시간이 경과함에 따라 placebo군에 비해 현저하게 감소되었으며 aPTT는 섭취 후 4시에 섭취 전에 비해 12.5% 지연시키는 것으로 나타났다. 장기시험에서는 수축기와 이완기 혈압이 placebo군에서는 섭취 4주에 섭취 전에 비해 2.8%와 3.5%로 증가하였고 NKF군에서는 각각 1.3%와 1.0% 감소하여 두 군 모두에서 유의차는 없었다. Fibrin clot 용해능은 NKF군에서 1주에 증가하여 4주에도 높은 수준으로 유지되었고, ECLT는 NKF군은 섭취 전에 비해 1주에 현저하게 감소되어 4주 후까지 유사한 수준으로 유지하여 NKF의 효과를 볼 수 있었지만, placebo군에서는 효과가 없었다. 따라서 NKF는 PT와 aPTT를 개선하여 전 처리 기간 placebo군에 비해 혈액응고시간을 유의적으로 지연시켰다. 또한 NKF 섭취는 TG/HDL-cholesterol을 감소시켜 항 동맥경화 지수를 상승시키는 효과가 있었다. 이상의 결과로 미루어 볼 때 단기와 장기 임상시험에서 NKF는 fibrin clot 용해능을 증가시키고 ECLT를 감소시키며 PT와 aPTT를 지연시켜 혈전 용해능을 상승시키며, TG/HDL-cholesterol을 낮추어 혈중 지질수준을 개선하고 동맥경화를 예방하는데 유익하게 작용할 것으로 사료된다.
본 연구는 성인 흡연자를 대상으로 NKF 정제를 단기 (4,000 U를 1회 투여)와 장기(2,000 U를 매일 1회 4주 투여) 실험을 통하여 NKF의 혈전용해 개선 및 항 동맥경화효과를 검증하였다. 임상대상자는 20세${\sim}$31세의 건강한 성인으로 하루 흡연량이 하루 1갑 이상인 고혈압 또는 항 혈전증 약을 섭취하지 않는 사람을 선정하여 무작위로 placebo군과 NKF군으로 분류하여 이중맹검법으로 실험을 하였다. NKF와 placebo 정제는 (주)HK바이오텍에서 제공하였다. 단기시험은 placebo군(10명)과 NKF군(29명)을 대상으로 NKF 섭취전과 섭취 1, 2, 4시간에 혈전용해효과를 검토하였고, 장기시험은 placebo군 10명과 NKF군 15명에게 NKF 섭취 전과 섭취 후 매주 혈전용해효과 및 혈압개서효과를 검토하였다. 단기시험에서 fibrin clot 용해능은 placebo군에 비해 NKF군에서는 섭취 후 2시간에 유의적으로 증가하여 4시까지 그 활성이 유지되었다. ECLT도 NKF 섭취 후 시간이 경과함에 따라 placebo군에 비해 현저하게 감소되었으며 aPTT는 섭취 후 4시에 섭취 전에 비해 12.5% 지연시키는 것으로 나타났다. 장기시험에서는 수축기와 이완기 혈압이 placebo군에서는 섭취 4주에 섭취 전에 비해 2.8%와 3.5%로 증가하였고 NKF군에서는 각각 1.3%와 1.0% 감소하여 두 군 모두에서 유의차는 없었다. Fibrin clot 용해능은 NKF군에서 1주에 증가하여 4주에도 높은 수준으로 유지되었고, ECLT는 NKF군은 섭취 전에 비해 1주에 현저하게 감소되어 4주 후까지 유사한 수준으로 유지하여 NKF의 효과를 볼 수 있었지만, placebo군에서는 효과가 없었다. 따라서 NKF는 PT와 aPTT를 개선하여 전 처리 기간 placebo군에 비해 혈액응고시간을 유의적으로 지연시켰다. 또한 NKF 섭취는 TG/HDL-cholesterol을 감소시켜 항 동맥경화 지수를 상승시키는 효과가 있었다. 이상의 결과로 미루어 볼 때 단기와 장기 임상시험에서 NKF는 fibrin clot 용해능을 증가시키고 ECLT를 감소시키며 PT와 aPTT를 지연시켜 혈전 용해능을 상승시키며, TG/HDL-cholesterol을 낮추어 혈중 지질수준을 개선하고 동맥경화를 예방하는데 유익하게 작용할 것으로 사료된다.
Effects of Nattokinase fibrinol (NKF), defined as a fibrinolytic product, on fibrinolytic and atherogenetic markers were studied for healthy adults (20-31 years old), who is smoking more than 20 cigarettes per day. Subjects were divided into 29 for NKF group and 10 for placebo group in a short term ...
Effects of Nattokinase fibrinol (NKF), defined as a fibrinolytic product, on fibrinolytic and atherogenetic markers were studied for healthy adults (20-31 years old), who is smoking more than 20 cigarettes per day. Subjects were divided into 29 for NKF group and 10 for placebo group in a short term study. They were given 2 tablets of NKF (4,000 unit) or placebo tablet and thereafter blood samples were collected at 0, 2, 4 hr prerid. For a 4-week long term study, 15 subjects for NFK group and 10 subjects for placebo group were supplemented one tablet of each NKF (2,000 unit) and placebo per day, respectively. Blood samples were collected at 0, 1, 2, 4 weeks later. The short-term experimental trial showed that NKF remarkably increased fibrinolytic activity at 2hr after consumption, which was maintained up to 4 hr, relative to that of placebo, while NKF reduced the euglobulin clot lysis time (ECLT) and retarded the activated partial thromboplastin time (aPTT), as compared to placebo group. NKF supplementation for 4 weeks elevated fibrinolytic activity, shortened ECLT and retarded aPTT. Furthermore, NKF supplementation increased anti-atherogenic index by decreasing triglyceride (TG) and elevating high-density lipiprotein (HDL)-cholesterol. These results indicate that NKF supplementation for short term or long term might have beneficial effects on preventing and treating cardiovascular disease by increasing fibrinolytic activity and improving atherogenic markers such as hyperlipidemia.
Effects of Nattokinase fibrinol (NKF), defined as a fibrinolytic product, on fibrinolytic and atherogenetic markers were studied for healthy adults (20-31 years old), who is smoking more than 20 cigarettes per day. Subjects were divided into 29 for NKF group and 10 for placebo group in a short term study. They were given 2 tablets of NKF (4,000 unit) or placebo tablet and thereafter blood samples were collected at 0, 2, 4 hr prerid. For a 4-week long term study, 15 subjects for NFK group and 10 subjects for placebo group were supplemented one tablet of each NKF (2,000 unit) and placebo per day, respectively. Blood samples were collected at 0, 1, 2, 4 weeks later. The short-term experimental trial showed that NKF remarkably increased fibrinolytic activity at 2hr after consumption, which was maintained up to 4 hr, relative to that of placebo, while NKF reduced the euglobulin clot lysis time (ECLT) and retarded the activated partial thromboplastin time (aPTT), as compared to placebo group. NKF supplementation for 4 weeks elevated fibrinolytic activity, shortened ECLT and retarded aPTT. Furthermore, NKF supplementation increased anti-atherogenic index by decreasing triglyceride (TG) and elevating high-density lipiprotein (HDL)-cholesterol. These results indicate that NKF supplementation for short term or long term might have beneficial effects on preventing and treating cardiovascular disease by increasing fibrinolytic activity and improving atherogenic markers such as hyperlipidemia.
* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.
문제 정의
따라서 시료의 혈액응고 시간인 PT와 aPTT를 측정하여 항혈전 효과를 추정할 수있다. 본 연구에서는 4주간의 NKF 보충이 PT와 aPTT에 미치는 효과를 측정하였다(Table 7). Placebo군에서의 PT는 섭취 전 11.
가설 설정
1) PT and aPTT represent prothrombin time and activated partial thromboplastin time, respectively.
2)The fibrinolytic activity is 2,000 U as calculated from NKF with 15,000 U/g fibrilolytic activity.
제안 방법
Fibrin clot lysis는 Zhang 등의 방법[39]을 수정하여 측정하였다. 즉, 50 μl HEPES-buffered saline (HBS; 0.
3%)을 포함하고 있었다. NKF 섭취 전과와 섭취 후 1주, 2주, 4주 후에 신체계측과 혈압 측정, 혈장의 fibrinolytic activity 및 지질수준을 분석하였다.
9%)이 포함되어 있었다. NKF군 개인은 2 개 정제(NKF 4,000 U)를 섭취하였고, placebo군 개개인은 2개의 placebo를 섭취한 다음, 0, 2, 4시간 후에 혈액을 취하여 NKF의 fibrinolytic activity를 측정하였다.
PT는혈장 100 μl를 37 ℃에서 3분간 예열한 다음, 37 ℃에서 미리 예열된 PT 진단시약 200 μl를 가한 후 blood coagulation analyzer (BehNKF Elektronik Coagulator, Germany)로 3회 반복 실시하여 평균 응고시간을 측정하였다.
aPTT는 혈장 100 μl에 aPTT 진단시약 100 μl를 혼합하여 37 ℃에서 3분간 예열한 다음 37 ℃에서 미리 예열된 20 mM CaCl 2 100 μl를 가한 후 blood coagulation analyzer (BehNKF Elektronik Coagulator, Germany)로 3회 반복 실시하여 평균 응고시간을 측정하였다.
NKF와 placebo 정제는 (주)HK바이오텍에서 제공하였다. 단기시험은 placebo군(10명)과 NKF군(29명)을 대상으로 NKF 섭취 전과 섭취 1, 2, 4시간에 혈전용해효과를 검토하였고, 장기시 험은 placebo군 10명과 NKF군 15명에게 NKF 섭취 전과 섭취 후 매주 혈전용해효과 및 혈압개서효과를 검토하였다.
0 (한국영양학회)을 사용하여 총 에너지 섭취량, 탄수화물과 단백질 및 지방의 총 에너지에 대한 섭취 비율, Na와 cholesterol 섭취 수준을 분석하여 1일 평균 섭취량으로 제시하였다. 대상자들의 흡연에 관련된 일상적인 질문은 설문지를 통하여 실시하였다.
본 연구는 성인 흡연자를 대상으로 NKF 정제를 단기(4,000 U를 1회 투여)와 장기(2,000 U를 매일 1회 4주 투여)실험을 통하여 NKF의 혈전용해 개선 및 항동맥경화효과를 검증하였다. 임상대상자는 20세～31세의 건강한 성인으로 하루 흡연량이 하루 1갑 이상인 고혈압 또는 항 혈전증 약을 섭취하지 않는 사람을 선정하여 무작위로 placebo군과 NKF 군으로 분류하여 이중맹검법으로 실험을 하였다.
본 연구에서는 natto균을 액체배양 한 후 여과 농축한 것을 신령버섯균사체 액체배양 추출물과 혼합하여 분말화한 다음, 섭취가 편리하도록 이를 정제화하여 나토키나제 피브리놀(Nattokinase fibrinol; NKF)을 제조하였다. 흡연을 하는 건강한 성인을 대상으로 NKF를 1회만 경구섭취 하는 단기 실험과 4주간 매일 섭취하는 장기시험으로 구분하여 NKF의 fibrinolytic activity와 동맥경화 개선효과를 연구하였다.
임상 대상자는 20세～31세의 건강한 성인으로 흡연량이 최소 하루 20개피 이상 또는 하지정맥류가 있는 사람으로 고혈압 또는 혈전증으로 복약하지 않는 사람을 선정하여 무작위로 대상자를 분류하여 이중맹검 임상시험으로 실시하였다. 시험시작 1주전 대상자들에게 시험의 내용, 중요성 및 시험 과정에서의 주의점 등을 숙지시켰고 대조군(placebo군)과 실험군(NKF군)으로 구분하여 NKF와 placebo를 대상자들에게 섭취시켰다.
식이섭취조사는 각 대상자들의 평상시 영양소 섭취 수준을 확인하기 위하여 대상자들에게 3일간의 식사 기록법을 작성하도록 하였으며 영양소 섭취 수준은 Can pro 3.0 (한국영양학회)을 사용하여 총 에너지 섭취량, 탄수화물과 단백질 및 지방의 총 에너지에 대한 섭취 비율, Na와 cholesterol 섭취 수준을 분석하여 1일 평균 섭취량으로 제시하였다. 대상자들의 흡연에 관련된 일상적인 질문은 설문지를 통하여 실시하였다.
신체 계측은 Inbody 3.0 (Biospace, Korea)을 사용하여 신장, 체중 및 BMI를 측정하였다. 혈압은 혈압계(Jawon medical Co.
외인성 경로에 기인하는 항 응고활성은 PT로, 내인성 혈액응고 과정의 항 응고활성은 aPTT로 측정하였다[17]. PT는혈장 100 μl를 37 ℃에서 3분간 예열한 다음, 37 ℃에서 미리 예열된 PT 진단시약 200 μl를 가한 후 blood coagulation analyzer (BehNKF Elektronik Coagulator, Germany)로 3회 반복 실시하여 평균 응고시간을 측정하였다.
임상 대상자는 20세～31세의 건강한 성인으로 흡연량이 최소 하루 20개피 이상 또는 하지정맥류가 있는 사람으로 고혈압 또는 혈전증으로 복약하지 않는 사람을 선정하여 무작위로 대상자를 분류하여 이중맹검 임상시험으로 실시하였다. 시험시작 1주전 대상자들에게 시험의 내용, 중요성 및 시험 과정에서의 주의점 등을 숙지시켰고 대조군(placebo군)과 실험군(NKF군)으로 구분하여 NKF와 placebo를 대상자들에게 섭취시켰다.
본 연구는 성인 흡연자를 대상으로 NKF 정제를 단기(4,000 U를 1회 투여)와 장기(2,000 U를 매일 1회 4주 투여)실험을 통하여 NKF의 혈전용해 개선 및 항동맥경화효과를 검증하였다. 임상대상자는 20세～31세의 건강한 성인으로 하루 흡연량이 하루 1갑 이상인 고혈압 또는 항 혈전증 약을 섭취하지 않는 사람을 선정하여 무작위로 placebo군과 NKF 군으로 분류하여 이중맹검법으로 실험을 하였다. NKF와 placebo 정제는 (주)HK바이오텍에서 제공하였다.
장기시험에는 25명을 대상으로 placebo군 10명과 NKF군 15명을 선정하여 이들은 NKF 또는 placebo 정제를 매일 1개씩 4주간 식사 1시간 후에 섭취하였다(Table 3). 이들의 BMI는 22.
NKF 시료는 (주)HK바이오텍에서 제조하였다. 탈지대두분 5%와 말토오스 1%를 함유하는 살균된 액체배지(121℃, 1시간)에 B. subtilis natto를 5 l 용 배양기(Kobiotech, Co., Inchen, Korea)에서 24시간 배양(30℃)하여 여과한 후 농축하였다. 이 농축물에 신령버섯균사체 액체배양 추출 농축액(Brix 30)을 1% (w/w) 비율로 혼합한 다음.
혈장의 TG, total cholesterol 및 HDL-cholesterol은 각각의 영동제약 분석 kit를 사용하여 분석하였다.
흡연을 하는 건강한 성인을 대상으로 NKF를 1회만 경구섭취 하는 단기 실험과 4주간 매일 섭취하는 장기시험으로 구분하여 NKF의 fibrinolytic activity와 동맥경화 개선효과를 연구하였다.
Natto 균(B. subtilis natto: KCCM12027)은 Korean Culture Center of Microoganisms (KCCM) (Seoul, Korea)으로부터 구입하였다. 난소화성 말토덱스트린은 대상(주)(한국)에서 구입하였다.
Louis, MO, USA)에서 구입하였다. Prothrombin time(PT)와 activated partial thromboplastin time (aPTT) 분석 진단 kit는 Fisher Diagnostics (Pacific Hematosis, VA, USA)로부터 구입하였고, triglyceride (TG), total cholesterol 및 HDL-cholesterol 분석 kit는 영동제약(Seoul, Korea)으로부터 구입하였다. 그 외 사용 된 시약은 reagent급 이상이었다.
subtilis natto: KCCM12027)은 Korean Culture Center of Microoganisms (KCCM) (Seoul, Korea)으로부터 구입하였다. 난소화성 말토덱스트린은 대상(주)(한국)에서 구입하였다. 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazine ethanesulphonic acid (HEPES), thrombin 및 fibrinogen은 Sigma-Aldrich Co.
단기시험에는 39명을 대상(placebo군 10명과 NKF군 29)자로 선정하였다(Table 2). 체질량지수인 body mass index(BMI)는 평균 22.
혈액은 sodium citrate가 처리된 혈액채취 tube에 채취하여 원심분리(750× g, 15분)한 후 혈장을 취하였다. 혈장은 fibrinolytic activity 및 지질개선 효과분석 시료로 사용하였다.
데이터처리
통계 처리는 SPSS PC + program (Version 15.0, SPSS Inc., Chicago, USA)을 사용하여 분석하였으며 모든 실험결과는 Mean±SE로 표시하였고 두 군 간에 유의성은 p<0.05 수준에서 Student t-test로 검정하였다.
이론/모형
시료의 ECLT는 Smith 등의 방법[25]을 이용하여 측정하였다. 즉, 50 μl 혈장을 0.
성능/효과
2)MBI stands for the body mass index.
단기시험에서 fibrin clot 용해능은 placebo군에 비해 NKF 군에서는 섭취 후 2시간에 유의적으로 증가하여 4시까지 그활성이 유지되었다. ECLT도 NKF 섭취 후 시간이 경과함에 따라 placebo군에 비해 현저하게 감소되었으며 aPTT는 섭취 후 4시에 섭취 전에 비해 12.5% 지연시키는 것으로 나타났다. 장기시험에서는 수축기와 이완기 혈압이 placebo군에서는 섭취 4주에 섭취 전에 비해 2.
0% 감소하여 두 군 모두에서 유의차는 없었다. Fibrin clot 용해능은 NKF군에서 1주에 증가하여 4주에도 높은 수준으로 유지되었고, ECLT는 NKF군은 섭취 전에 비해 1주에 현저하게 감소되어 4주 후까지 유사한 수준으로 유지하여 NKF의 효과를 볼 수 있었지만, placebo군에서는 효과가 없었다. 따라서 NKF는 PT와 aPTT를 개선하여 전 처리 기간 placebo군에 비해 혈액응고시간을 유의적으로 지연 시켰다.
Placebo 섭취는 혈장 HDL-cholesterol을 섭취 후 2주까지는 섭취 전에 비해 다소 감소시킨 후 4주에는 증가하는 경향을 보였으며 NKF 섭취에 의해 1주까지는 섭취 전과 유사한 수준이었으나 2주 후부터는 증가하는 경향이었다. HDL-cholesterol 변화량은 섭취 후 2주와 4주에 placebo 섭취에 비해 NKF 섭취에 의해 현저하게 증가하는 것으로 나타나 NKF가 혈 중 HDL-cholesterol을 증가시키는 것으로 사료된다.
NKF 4,000 U를 1회 섭취한 대상자 혈장의 fibrin clot lysis 정도는 placebo를 섭취한 대상자 혈장보다 유의성 있게 증가하였다(Fig. 1). NKF군에서는 placebo군에 비해 fibrin clot 용해능이 유의성 있게 증가하였다.
6초로 나타났다. NKF군에서는 섭취 전 10.6초였으며 섭취 후 4주에도 10.6초로 나타나 큰 변화는 없었으나, 섭취 후 4주에 placebo군이 섭취 전에 비해 94.3%로 감소되었고, NKF군은 100.1%로 다소 증가하여 두 처리 간에는 유의차가 있었다. aPTT는 placebo 섭취 전 33.
NKF의 fibrin clot 용해능은 섭취기간 중 placebo군에 비해 유의성 있게 증가하였다. NKF군의 fibrin clot 용해능은 섭취 후 1주에 증가하여 4주까지 거의 동일한 수준으로 혈전용해 활성이 유지됨을 알 수 있었으나 placebo 섭취는 그러하지 못하여 NKF의 효과를 볼 수 있었다. Sumi 등[28]은 임상연구에서 21～55세의 남녀 각각 6명씩 건강한 12명의 일본인에게 공복 시 200 g의 natt℃heese를 섭취도록 한 후, 혈장의 혈전용해 능이 2～8시간까지 유의적으로 증가시키는 것을 확인하였다.
이 그림에서 405 nm에서 흡광도가더 이상 감소하지 않는 시간을 임계시간(critical time)으로 계산하여 혈청의 ECLT를 계산하였다. NKF를 섭취한 대상 자들의 ECLT를 측정한 결과 ECLT는 placebo를 섭취한 대상자보다 유의성 있게 짧았다(Fig. 3). 이 효과는 섭취 후 4시간까지 유지되었다.
혈장 total cholesterol 수준은두 처리 모두 유사한 수준으로 증가하였으며 변화량은 섭취후 4주에 NKF처리가 다소 높았으나 큰 차이는 없어 NKF가혈장의 total cholesterol 수준에는 크게 영향을 미치지 않다. Placebo 섭취는 혈장 HDL-cholesterol을 섭취 후 2주까지는 섭취 전에 비해 다소 감소시킨 후 4주에는 증가하는 경향을 보였으며 NKF 섭취에 의해 1주까지는 섭취 전과 유사한 수준이었으나 2주 후부터는 증가하는 경향이었다. HDL-cholesterol 변화량은 섭취 후 2주와 4주에 placebo 섭취에 비해 NKF 섭취에 의해 현저하게 증가하는 것으로 나타나 NKF가 혈 중 HDL-cholesterol을 증가시키는 것으로 사료된다.
NKF 섭취가 대상자들의 혈장 지질 수준에 미치는 영향은 Table 8에서 보는 바와 같다. TG 수준은 placebo처리는 4주까지 TG를 증가시키는 반면 NKF는 감소시키는 경향이었다. TG의 변화량은 2주와 4주에 두 군 간에 유의차를 보였으며 NKF가 TG 수준을 감소시켰다.
따라서 본 연구에서는 NKF 섭취 기간이 경과 할수록 TG/HDL-cholesterol이 감소되었고, placebo 섭취는 오히려 다소 증가하였다. TG/HDL-cholesterol의 변화는 NKF 섭취 후 2주에 placebo 섭취에 비해 유의적으로 감소되었으나 4주에는 유의차를 보이지 않았다. 항동맥경화 지수에서는 placebo군에서는 섭취 기간이 경과할수록 다소 감소하는 반면 NKF를 섭취한 군에서는 증가하여 섭취 후 4주에는 NKF 군에서 유의성 있게 높은 수준으로 나타났다.
1%로 다소 증가하여 두 처리 간에는 유의차가 있었다. aPTT는 placebo 섭취 전 33.9초에서 섭취 후 4주에 29.5초로 13% 감소하였다. 그러나 NKF는 섭취 전에는 28.
단기시험에서 fibrin clot 용해능은 placebo군에 비해 NKF 군에서는 섭취 후 2시간에 유의적으로 증가하여 4시까지 그활성이 유지되었다. ECLT도 NKF 섭취 후 시간이 경과함에 따라 placebo군에 비해 현저하게 감소되었으며 aPTT는 섭취 후 4시에 섭취 전에 비해 12.
혈청의 TG는 동맥경화 발생의 주요 원인이 되며 TG/ HDL-cholesterol이 증가하면 할수록 동맥경화의 위험이 증가한다[16]. 따라서 본 연구에서는 NKF 섭취 기간이 경과 할수록 TG/HDL-cholesterol이 감소되었고, placebo 섭취는 오히려 다소 증가하였다. TG/HDL-cholesterol의 변화는 NKF 섭취 후 2주에 placebo 섭취에 비해 유의적으로 감소되었으나 4주에는 유의차를 보이지 않았다.
경구 투여한 NK는 상피세포 및 간으로부터 tPA의 수준을 증가시켰으며 NF는 내인성 pro-UK를 활성화시킬 뿐 아니라 직접 fibrin을 분해할 수 있다. 따라서 본연구의 NKF도 tPA 를 활성화시켜 plasminogen을 plasmin으로 전환하여 fibrin clot을 용해시켜 ECLT을 감소시킴으로써 혈전 용해능을 증가시키는 것으로 사료된다.
7% 증가하여 4주 변화량은 두 처리군 간에 유의차가 있었다. 따라서, 본 연구 결과는 NKF가 PT와 aPTT를 지연시켜 fibrin clot의 형성을 억제하였다.
또한 NK는 경구섭취가 효과적이고 효과가 오랜 시간 지속되며 기준 섭취량은 250～ 1,000 mg으로 다양하며 긍정적인 효과는 50 mg 정도라는 보고도 있다[30]. 따라서, 본 연구에서 사용한 NKF 2,000 U는혈전용해 개선효과를 나타내기에 충분할 것으로 사료된다.
따라서 NKF는 PT와 aPTT를 개선하여 전 처리 기간 placebo군에 비해 혈액응고시간을 유의적으로 지연 시켰다. 또한 NKF 섭취는 TG/HDL-cholesterol을 감소시켜항 동맥경화 지수를 상승시키는 효과가 있었다.
Sumi 등[28]은 개를 이용한 전임상시험에서 대퇴정맥에 혈전을 유도한 후 NK 1,000 mg 을 함유한 capsule을 4개씩 경구 투여했을 때 NK를 섭취 군에서는 투여 5시간 내에 혈전이 완전히 용해되어 정상적인 혈액 순환으로 회복되었으나, placebo군에서는 혈전용해 효과가 투여 18시간 후에도 관찰되지 않아 NK가 효과적으로 혈전을 용해시키는 것으로 보고하였다. 본 연구의 결과는 Sumi 등[28]의 연구결과와 일치하는 것으로 NKF의 섭취가 fibrin clot을 용해시켜 혈전을 분해하여 혈액순환을 도와줄 것으로 사료된다.
이들 혼합물에 난소화성 말토덱스트린을 혼합하여 고형분이 35%가 되도록 조정 한 다음 spray dry하였다. 분말의 혈전용해효소 활성을 Astrup과 Mullertz의 fibrin plate 방법[2]으로 분석한 결과 15,000 U/g이었다. Placebo와 NKF 정제 조제를 위한 조성은 Table 1에서 보는 바와 같이, NKF 함량은 133.
이상의 결과로 미루어 볼 때 단기와 장기 임상시험에서 NKF는 fibrin clot 용해능을 증가시키고 ECLT를 감소시키며 PT와 aPTT를 지연시켜 혈전 용해능을 상승시키며, TG /HDL-cholesterol을 낮추어 혈중 지질수준을 개선하고 동맥 경화를 예방하는데 유익하게 작용할 것으로 사료된다.
3%로 섭취 전에 비해 다소 증가하였으나 두 군간 유의차는 없었다. 이완기 혈압은 두 군 모두에서 큰 변화는 없었으나 placebo군이 75.1 mmHg에서 섭취 후 4주에 77.7 mmHg으로 3.5% 증가한 반면 NKF군에서는 78.5 mmHg에서 섭취 후 4주에 77.7 mmHg로 다소 감소하였지만 유의차는 없어 NKF는 다소의 혈압개선효과 있었지만, 유의성은 없었다.
단기시험에는 39명을 대상(placebo군 10명과 NKF군 29)자로 선정하였다(Table 2). 체질량지수인 body mass index(BMI)는 평균 22.9로 정상이었고 하루 평균 흡연량은 placebo군이 35.8개피, NKF군이 34.6개피였다. 하지정맥류를 가진 대상자는 placebo 군에는 포함되어 있지 않았지만, NKF군에 2명(6.
대상자들의 3일 간의 식사 기록으로 분석한 1일 총 에너지섭취량, 탄수화물과 단백질 및 지질의 에너지 섭취비율과 Na, cholesterol 및 식이섬유 섭취 수준은 Table 5에서 보는 바와 같다. 총 섭취 에너지에 대한 탄수화물의 섭취비와 식이섬유의 섭취량은 placebo군에서 57.7%와 23.6 g으로 NKF 군의 54.3%와 21.3 g 보다 다소 높은 수준이었으나 두 군간 유의성은 없었다. 총 에너지섭취량, 총에너지 섭취에 대한 단백질과 지방 섭취 비율 및 Na과 cholesterol 섭취량은 placebo군에 비해 NKF군에서 다소 높았으나 유의차는 없었다.
3 g 보다 다소 높은 수준이었으나 두 군간 유의성은 없었다. 총 에너지섭취량, 총에너지 섭취에 대한 단백질과 지방 섭취 비율 및 Na과 cholesterol 섭취량은 placebo군에 비해 NKF군에서 다소 높았으나 유의차는 없었다.
TG/HDL-cholesterol의 변화는 NKF 섭취 후 2주에 placebo 섭취에 비해 유의적으로 감소되었으나 4주에는 유의차를 보이지 않았다. 항동맥경화 지수에서는 placebo군에서는 섭취 기간이 경과할수록 다소 감소하는 반면 NKF를 섭취한 군에서는 증가하여 섭취 후 4주에는 NKF 군에서 유의성 있게 높은 수준으로 나타났다. 우리나라에서도 natto와 같이 콩을 원료로 하여 발효시킨 전통식품인 청국장, 된장, 젓갈, 김치 등에서 혈전용해작용이 우수함이 보고[11,14,18]되어, 본태성 고혈압 대상자에게 청국장 분말을 단백질원으로 48.
TG의 변화량은 2주와 4주에 두 군 간에 유의차를 보였으며 NKF가 TG 수준을 감소시켰다. 혈장 total cholesterol 수준은두 처리 모두 유사한 수준으로 증가하였으며 변화량은 섭취후 4주에 NKF처리가 다소 높았으나 큰 차이는 없어 NKF가혈장의 total cholesterol 수준에는 크게 영향을 미치지 않다. Placebo 섭취는 혈장 HDL-cholesterol을 섭취 후 2주까지는 섭취 전에 비해 다소 감소시킨 후 4주에는 증가하는 경향을 보였으며 NKF 섭취에 의해 1주까지는 섭취 전과 유사한 수준이었으나 2주 후부터는 증가하는 경향이었다.
후속연구
41로 청국장 처리 에서 가장 낮았다는 보고가 있다[37]. 따라서 본 연구결과는 이러한 보고와 유사한 것으로 NKF가 혈장의 HDL-cholesterol 수준을 증가시키고 TG/HDL-cholesterol을 감소시켜 항동맥경화 지수를 개선하여 동맥경화를 예방하는데 유익하게 작용할 것으로 사료된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
혈전이 동맥에 생성되면 어떤 질환을 발생시키는가?
혈전은 생체에 상처가 생길 때 혈액 구성분인 fibrinogen이 thrombin에 의해 fibrin으로 전환되어 불용성의 중합체를 형성함으로써 생성된다. 혈전이 정맥에서 생성되면 혈액순환장애가 야기되어 부종이나 염증이 발생하지만, 동맥에서 발생하면 허혈이나 경색을 유발하여 동맥경화, 심근경색증, 뇌졸중 및 폐동맥 색전증 등의 심혈관계 질환을 초래하게 된다[9,22-24]. 혈전증은 혈관에 혈전이 쌓여 혈액의 흐름을 방해하여 세포 성장 장애 및 기능 장애를 유발시켜 뇌경색, 심근경색 등 여러 형태의 성인병을 일으키는 주요 원인이다.
혈전은 어떻게 생성되는가?
생체 내에서 혈액은 응고와 용해작용이 항상 균형을 이루고 있으며 정상적으로 순환하고 있는 동안 생성된 혈전은 즉시 분해된다[1]. 혈전은 생체에 상처가 생길 때 혈액 구성분인 fibrinogen이 thrombin에 의해 fibrin으로 전환되어 불용성의 중합체를 형성함으로써 생성된다. 혈전이 정맥에서 생성되면 혈액순환장애가 야기되어 부종이나 염증이 발생하지만, 동맥에서 발생하면 허혈이나 경색을 유발하여 동맥경화, 심근경색증, 뇌졸중 및 폐동맥 색전증 등의 심혈관계 질환을 초래하게 된다[9,22-24].
NKF의 혈전용해 개선 및 항 동맥경화효과를 검증하고자 성인 흡연자를 대상으로 NKF 정제를 단기 및 장기투여한 실험 연구 결과는 무엇인가?
단기시험에서 fibrin clot 용해능은 placebo군에 비해 NKF 군에서는 섭취 후 2시간에 유의적으로 증가하여 4시까지 그활성이 유지되었다. ECLT도 NKF 섭취 후 시간이 경과함에 따라 placebo군에 비해 현저하게 감소되었으며 aPTT는 섭취 후 4시에 섭취 전에 비해 12.5% 지연시키는 것으로 나타났다. 장기시험에서는 수축기와 이완기 혈압이 placebo군에서는 섭취 4주에 섭취 전에 비해 2.8%와 3.5%로 증가하였고 NKF군에서는 각각 1.3%와 1.0% 감소하여 두 군 모두에서 유의차는 없었다. Fibrin clot 용해능은 NKF군에서 1주에 증가하여 4주에도 높은 수준으로 유지되었고, ECLT는 NKF군은 섭취 전에 비해 1주에 현저하게 감소되어 4주 후까지 유사한 수준으로 유지하여 NKF의 효과를 볼 수 있었지만, placebo군에서는 효과가 없었다. 따라서 NKF는 PT와 aPTT를 개선하여 전 처리 기간 placebo군에 비해 혈액응고시간을 유의적으로 지연 시켰다. 또한 NKF 섭취는 TG/HDL-cholesterol을 감소시켜항 동맥경화 지수를 상승시키는 효과가 있었다.
참고문헌 (39)
Arbige, M. and W. H. Pitcher. 1989. Industrial enzymology. a look towards the future. Trends Biotechnol. 7, 330-3
Chang, Y. Y., J. S. Liu, S. L. Lai, H. S. Wu, and M. Y. Lan. 2008. Cerebellar hemorrhage provoked by combined use of nattokinase and aspirin in a patient with cerebral microbleeds. Inter. Med. 47, 467-469
Fletcher, A. P. and A. J. Johnson. 1957. Methods employed for purification of streptokinase. Por. Soc. Exp. Boal. Med. 94, 223-236
Fujita, M., K. Hong, Y. Ito, S. Misawa, N. Takeuchi, K. Kariya, and S. Nishimuro. 1995. Transport of nattokinase across the rat intestinal tract. Biol. Pharm. Bull. 18, 1194-1196
Fujita, M., K. Hong, and Y. Ito. 1995. Thrombolytic effect of nattokinase on a chemically induced thrombosis model in rat. Biol. Pharm. Bull. 18, 1387-1391
Fujita, M., Y. Ito, K. Hong, and S. Nishimuro. 1995. Characterization of nattokinase -degraded products from human fibrinogen or cross-liNKFed fibrin. Fibrinolysis 9, 157-164
Grande, P., A. M. Grauholt, and J. K. Madsen. 1990. Unstable angina pectoris. Platelet behavior and prognosis in progressive angina and intermediate coronary syndrome. Circulation 81, 116-119
Gwak, H. S. and I. K. Chun. 2000. Performulation study of aspalatone, a new antithrombotic agent. J. Appl. Pharmacol. 8, 332-337
Kim, H. K., G. T. Kim, D. K. Kim, W. A. Choi, S. H. Park, Y. K. Jeong, and I. S. Kang. 1997. Purification abd characterization of a novel fibrinolytic enzyme from Bacillus sp. KA38 originated from fermenter fish. J. Ferment. Bioengin. 84, 307-312
Kim, J. K. 2002. Biologically Active Components of Soy-Fermented Foods. Korea Soybean Digest 19, 1-7
Kim, J. Y., S. N. Gum, J. K. Paik, H. H. Lim, K. C. Kim, K. Ogasawara., K. Ainoue, S. Park, Y. S. Jang, and J. H. Lee. 2008. Effects of nattokinase on blood pressure: A randomized, controlled trial. Hypertens. Res. 31, 1583-1588
Kim, S. H. 1998. New trends of studying on potential activities of Doen-jang. Korea Soybean Digest. 15, 8-15
Kumada, K., T. Onga, and H. Hoshino. 1994. The effect of natto possessing a high fibrinolytic activity in human plasma. Igaku Seibutsugaku 128, 117-119
Lee, J. H. and H. J. Park. 1998. Effects of intaking of red ginseng products on human platelet aggregation and blood lipids. J. Ginseng Res. 22, 173-180
Lee, S. S., S. M. Kim, U. K. Park, H. Y. Kim, and I. S. Shin. 2002. Studies on proteolytic and fibrinolytic activity of Bacillus subtilis JM-3 isolated from anchovy sauce. Korean J. Food Sci. Technol. 34, 283-289
Lee, Y. H., S. H. Lee, J. M. Jeon, H. C. Kim, Y. U. Cho, K. H. Park, Y. J. Choi, and S. W. Gal. 2005. Cloning and characterization of a gene for fibrinolytic enzyme from Bacillus subtilis BB-1 isolated from black bean chung-kuk. Korean J. Life Sci. 15, 513-521
Lee, Y. H., S. H. Lee, K. H. Park, Y. J. Choi, S. W. Lee, C. H. Kim, S. J. Cho, and S. W. Gal. 2006. In vivo biological function of a fibrinolytic enzyme after oral adminstration. Korean J. Biotechnol. Bioeng. 21, 433-438
Lijnen, H. R., B. van Hoef, O. Matsuo, and D. Collen. 1992. On the molecular interactions between plasminogen-staphylokinase, alpha 2-antiplasmin and fibrin. Biochim. Biophys. Acta. 1118, 144-148
Shin, K. S., J. J. Lee, Y. R. Jin, J. Y. Yu, E. S. Park, J. H. Im, S. H. You, K. W. Oh, M. K. Lee, J. J. Wee, Y. S. Kim, and Y. P. Yun. 2007. Effect of Korean red ginseng extract on blood circulation in healthy volunteers. A randomized, double-blind, placebo-controlled trial. J. Ginseng Res. 31, 109-116
Smith, A. A., L. J. Jacobson, B. I. Miller, W. E. Hathaway, and M. J. Manco-Johnson. 2003. A new euglobulin clot lysis assay for global fibrinolysis. Thromb. Res. 112, 329-337
Sohn, H. Y., H. Y. Ryu, Y. S. Kwon, E. J. Kum, C. S. Kwon, G. S. Kwon, K. W. Kim, and K. H. Son. 2005. Screening of thrombin inhibitor from medicinal and wild plants(II). Kor. J. Pharmacogn. 36, 263-272
Sumi, H., H. Hamada, H. Mihara, K. Nakanishi, and H. Hiratani. 1989. Fibrinolytic effect of the Japanese traditional food natto (natto kinase). Thromb. Haemost. 62, 549-554
Sumi, H., H. Hamada, K. Nakanashi, and H. Hiratani. 1990. Enhancement of the fibrinolytic activity in plasma by oral administration of NKF. Acta Haematol. 84, 139-143
Sumi, H., H. Hamada, H. Tsushima, H. Mihara, and H. Muraki. 1987. A novel fibrinolytic enzyme (nattokinase) in the vegetable cheese natto; a typical and popular soybean food in the Japanese diet. Experimentia 43, 1110-1111
Sumi, H. 1987. Development of nattokinase and healthy natto (in Japanese). Bioindustry 7, 725-731
Suzuki, Y., K. Kondo, H. Ichise, Y. Tsukamoto, T. Urano, and K. Umemura. 2003. Dietary supplementation with fermented soybeans suppresses intimal thickening. Nutrition. 19, 261-264
Suzuki, Y., K. Kondo, Y. Matsumoto, B. Q. Zhao, K. Otsuguro, T. Maeda, Y. Tsukamoto, T. Urano, and K. Umemura. 2003. Dietary supplementation of fermented soybean, natto, suppresses intimal thickening and modulates the lysis of mural thrombi after endothelial injury in rat femoral artery. Life Sci 73, 1289-1298
Toki, N., H. Sumi, K. Sasaki, I. Boreisha, and Robbins K. C. 1985. Transport of urokinase across the intestinal tract of normal human subjects with stimulation of synthesis and/or release of urokinase-type proteins. J. Clin. Invest. 75, 1212-1222
Urano, T., H. Ihara H, K. Umemura, Y. Suzuki, M. Oike, S. Akita, Y. Tsukamoto, I. Suzuki, and A. Takada. 2001. The profibrinolytic enzyme subtilisin NAT purified from Bacillus subtilis cleaves and inactivates plasminogen activator inhibitor type 1. J. Biol. Chem. 276, 24690-24696
Yang, J. R. 2000. Doctoral thesis, Antiatherogenic effect of chongkukjang. Busan National University
Yong, P., X. J. Yang, and Y. Zhang. 2005. Microbial fibrinolytic enzymes: an overview of source, production, properties, and thrombolytic activity in vivo. Appl. Microbiol. Biotechnol. 69, 126-132
Zhang, L., J. Wang, M. Yu, and B. Ru. 2004. Functional properties of a recombinant chimeric plasminogen activator with platelet-targeted fibrinolytic and anticoagulant potential. Mol. Genet. Metab. 82, 304-311
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.