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문제 정의
- 국내 양돈산업 뿐만 아니라 전 세계 양돈산업에 있어서 막대한 경제적 손실을 주고 있는 돼지 전신성 질병인 PCV2와 포유자돈 소화기 질병 인 PEDV과의 상관관계를 구명하고자 감염실험을 실시하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
- 이루어지지 않고 있다. 따라서 국내에서 분리된 PEDV와 PCV2를 초유를 섭취한 일반 포유자돈에 감염시킨 다음 미생물학적, 병리학적 검사를 통하여 PCV2가 PED에 미치는 영향을 구명하고자 실시하였다 .
- 특히 국내에서는 PEDV 인한 피해가 심각하여 매년 상당수의 자돈이 폐사되는 것으로 추정된다. 본 연구에서는 국내뿐만 아니라 전 세계적으로 문제를 일으키는 PCVD 인 PCV2와 돼지 유행성 설사병인 PEDV 의 복합감염에 대한 병인을 구명하기 위하여 포유자돈에 PEDV와 PCV2> 단독 또는 복합으로 접종하여 경시적으로 혈청학적 검사, RT-PCR 검사 및 형광 항체검사를 실시하였다.
제안 방법
- 5mM MgC. (Promega)를 첨가하여 65°C에서 10분간 반응시킨 뒤 200unit Molony murine leukemia virus reverse transcriptase (MBI)를 첨가하여 50μl의 반응액으로 42°C에서 1시간, 94°C에서 5분으로 Icycle을 시행하여 cDNA를 합성하였다.
- 5분간 3회 세척하였다. FITC conjugated anti-mouse IgG(국립수의과학검 역원 분양)를 첨가한 다음 37°C 의 습상에서 30분 동안 반응시 킨 후 PBS (pH 7.2)로 5분간 3회 세척한 다음 mounting media로 처리하여 형광현미경 (Olympus BX50, Japan)으로 검경하였다. 형광 반응에 대한 양성반응지수는 박 등(1994)의 방법에 따라 음성은 0, 1 〜29%의 상피세포에 나타난 것은 1, 30〜59% 의 상피세포에 나타난 것은 2, 60〜 100%의 상피세포에 나타난 것은 3으로 구분하여 판정하였으며, 소장의 부위별 평균 양성반응지수는 소장검사재료의 양성반응지수를 더하여 소장검사재료 수로 나누어 표시하였다.
- 4°C에서 10분 동안 냉장상태로 고정시켰다.PEDV monoclonal antibody (MAb) (국립수의과학검 역원 분양)를 첨가하고 37°C의 습상에서 45분간 반응시켰다. 여분의 MAb를 제거하고 PBS (pH 7.
- PEDV 또는 PCV2를 단독 또는 복합감염시켰을 때의 분변, 뇨 소장, 폐, 간, 비장, 편도 및 림프절 등의 배설물 및 조직을 균질화하여 멸균된 500jxl PBS (pH 7.2)에 넣어 충분히 혼합시킨 다음 14, 000rpm에서 20 분간 원심분리하여 상층액을 취하여 -70°C에 보존하여 RT-PCR을 실시하였다.
- -Text 1). 각 실험군에 3일령 때부터 덱사메타손을 3ml/두씩 매일 근육주사 실시하였다. 실험자돈은 PEDV를 공격 접종 24시간 후부터 12시간 간격으로 경정맥에서 채혈하였고 항문에서 분변 채취 하였다.
- 돼지 써코바이러스가 돼지 유행성 설사에 미치는 영향을 관찰하기 위하여 PCV2를 공격접종하기전과 7일령에 PEDV를 공격접종 24시간, 36시간, 48시간, 60시간 및 72시간에 실험군이 각각 2두 혹은 3두를 대조군 각각 1두를, 시기별로 채혈하여 항체역가를 측정하였다(Text-Fig. 2A and B).
- 유의한 상승을 통하여 감염여부를 판정할 수 있다(Prager와 Witte, 1981; Carvajal 등 1995; Callebaut 등 1982; 津田, 1999). 본 연구에서 혈청학적 검사는 최근 가장 널리 이용되고 있는 ELISA를 이용하여 PEDV 와 PCV2의 항체가를 PEDV와 PCV2를 단독접종 또는 복합접종 24시간 후 부터 12시간 간격으로 채혈하여 실시하였다. PEDV의 항체조사에서는 PEDV를 단독접종한 실험 I군에서 공격전의 혈청항체가는 2.
- 분변과 소장조직에서 RNA 추출은 RNeasy® Mini kit (QIAGEN, Germany)를 사용하였고 폐장, 간장, 비장, 편도 및 림프절 등의 조직 에서 DNA 추출은 DNe. asy® Mini kit (QIAGEN, Germany)를 사용하여 실시 하였다.
- 37°C, 1 시간 동안 micro plate# 정치시킨 다음, microplate# PBST로 3회, 5분 간격으로 씻어 낸 다음 substrate solution (ABTS)을 100μl씩 각 well에 분주하였다. 상온에서 1시간 동안 microplate를 정치시키고 0.1% sodium dodecyl sulfate (SDS) solution을 50ul씩 각 well 에 분주하여 반응을 정지시킨 후 405nm흡광도를 측정하였다.
- 실험군은 4개 군으로 구분하여 실험 I, II군은 12두씩, 실험 III와 대조군은 각각 11두, 5두씩 배치하였다. 실험 I군(group I)은 6 일령때 PEDV를 2.5ml/두씩 구강 접종한 구 실험 II군 (group II)은 3일령때 PCV2를 2.5ml/두씩 각각 비강 및 근육 접종한 다음 6일령때 PEDV를 2.5ml/두씩 구강 접종한 군, 실험 III군(group III)은 3일령때 PCV2를 2.5ml/두씩 각각 비강 및 근육 접종한 군, 실험 IV군 (groupIV)은 대조군으로 멸균 생리식염수를 접종한 군으로 구분하였다(Fig.-Text 1). 각 실험군에 3일령 때부터 덱사메타손을 3ml/두씩 매일 근육주사 실시하였다.
- 시험동물로 선발하였다. 실험군과 대조군의 포유자돈은 각각의 실험돈방에 넣어 24시간 동안 적응시킨 후 3일령에 공격접종을 실시하였다. 실험군은 4개 군으로 구분하여 실험 I, II군은 12두씩, 실험 III와 대조군은 각각 11두, 5두씩 배치하였다.
- 실험군과 대조군의 포유자돈은 각각의 실험돈방에 넣어 24시간 동안 적응시킨 후 3일령에 공격접종을 실시하였다. 실험군은 4개 군으로 구분하여 실험 I, II군은 12두씩, 실험 III와 대조군은 각각 11두, 5두씩 배치하였다. 실험 I군(group I)은 6 일령때 PEDV를 2.
- 실험대상 자돈의 면역상태를 확인하기 위한 항체 역가 검사를 위하여 경정맥에서 혈액을 채취하여 응고시킨 후 3, 000rpm에서 30분간 원심분리하여 상층액을 eppendorf tube에 옮긴 다음 56°C에서 30분간 비동화 시킨 뒤 사용하였다.
- 실험도중에 폐사하였거나 시간별로 안락사시킨 실험자돈은 부검을 실시하여 십이지장, 공장, 회장의 조직을 lOpim 두께로 냉동절편하여 슬라이드에 부착 시켜 실온에서 5분간 정치하여 건조시킨 후 냉동 아세톤으로 4°C에서 10분 동안 냉장상태로 고정시켰다.PEDV monoclonal antibody (MAb) (국립수의과학검 역원 분양)를 첨가하고 37°C의 습상에서 45분간 반응시켰다.
- 각 실험군에 3일령 때부터 덱사메타손을 3ml/두씩 매일 근육주사 실시하였다. 실험자돈은 PEDV를 공격 접종 24시간 후부터 12시간 간격으로 경정맥에서 채혈하였고 항문에서 분변 채취 하였다.
- 역전사 반응에서 합성된 5ul cDNA에 0.2mM의 primer, 10 x PCR buffer, 2.5 unit Taq DNA polymerase, 0.2mM dNTPs, 2.5mM MgCl2, 멸균된 증류수 32 ul를 첨가한 50μl의 반응액을 95°C 5분 52°C 45초, 72°C 1 분의 반응조건에서 1회 시행한 다음 계속하여 95°C 45 초, 52°C 45초 72°C 1분의 반응조건에서 30회 반복하였고 52°C 45초, 72°C 5분간 반응조건에서 1회 시행하였다.
- 5mM MgCl2, 멸균된 증류수 32μl를 첨가한 50ul의 반응액을 94°C 5분간 1차 반응시킨 다음, 94°C 에 45초 52°C 45초, 72°C 1분씩 30회 반응시킨 후 최종 72°C에서 10분간 반응시켰다. 증폭된 PCR산물의 확인은 TAE buffer (40mM Tris acetate, ImM EDTA, pH 8.0)롤 전해질로 사용한 1% agarose gel에서 전기 영동을 실시한 후, 40mM ehidium bromide 용액에서 gel을 염색하여 UV transilluminator (Vilber- lourmat, France)로 생성된 band를 확인하였으며 DNA marker로는 lOObp DNA ladder (Promega, USA)를 사용하였다.
- 증폭된 PCR산물의 확인은 TAE buffer (40mM Tris acetate, ImM EDTA, pH 8.0)를 전해질로 사용한 1% agarose gel에서 전기 영동을 실시한 후, 40mM ehidium bromide용액에서 gel을 염색하여 UV transilluminator (Vilberlourmat, France)로 생성된 band를 확인하였으며, DNA marker로는 lOObp DNA ladder (Promega,USA)를 사용하였다.
- 포유자돈에 PCVD 원인체의 PCV2와 포유자돈 바이러스 설사병인 PEDV를 자돈에 감염시켜 돼지 써 코 바이러스 2형이 돼지유행성설사에 미치는 영향을 관찰하고자 ELISA 항체가 검사, RT-PCR 검사 및 형광 항체검사를 실시하여 다음과 같은 결론을 얻었다.
- 2)로 5분간 3회 세척한 다음 mounting media로 처리하여 형광현미경 (Olympus BX50, Japan)으로 검경하였다. 형광 반응에 대한 양성반응지수는 박 등(1994)의 방법에 따라 음성은 0, 1 〜29%의 상피세포에 나타난 것은 1, 30〜59% 의 상피세포에 나타난 것은 2, 60〜 100%의 상피세포에 나타난 것은 3으로 구분하여 판정하였으며, 소장의 부위별 평균 양성반응지수는 소장검사재료의 양성반응지수를 더하여 소장검사재료 수로 나누어 표시하였다.
대상 데이터
- PEDV는 국내에서 분리된 바이 러스를 녹십자 수의 약품 주식 회사 연구소에서 아프리 카원숭이 콩팥세포(Vero cell)를 이용하여 배양한 DR13주(1.5 x 1()5 TCIDWml)를 분양받아 사용하였고 PCV2는 국내에서 분리된 바이러스를 서울대학교 수의과대학 미생물학 교실에서 돼지 신장세포주(nPK-15 cell)를 이용하여 배 양한 99R주(13 TCIDRml)를 사용하였다.
- 산차를 고려하여 초유를 섭취한 4복의 포유자돈 40 두를 시험동물로 선발하였다. 실험군과 대조군의 포유자돈은 각각의 실험돈방에 넣어 24시간 동안 적응시킨 후 3일령에 공격접종을 실시하였다.
데이터처리
- 실험을 통하여 얻은 결과를 통계학적 유의성 검사는 SAS package (Ver. 6.12, USA)를 이용한 Mann-Whitney U test를 실시하였다.
성능/효과
- PEDV를 공격 접종한 실험 I군에서 공격접종 24 시간 후 2두를 부검시 1두의 십이지장, 공장, 회장에서 양성 반응을 보였고 1두는 PEDV가 검출되지 않았다. 36시간 후 2두를 부검시 1두의 십이지장에서 음성 반응 보였고 공장, 회장에서 모두 양성을 보였으며 48시간 후 2두를 부검시 십이지장, 공장 및 회장에서 모두 양성 반응을 보였으며 60시간 후 3두를 부검시 모든 십이지장, 공장 및 회장에서 양성 반응을 보였고, 72시간 후 3두를 부검시 모든 십이지장, 공장 및 회장에서 양성 반응을 보였다. PEDV와 PCV2 복합 공격 접종한 실험 II군에서 공격접종 24시간, 36시간, 48시간 및 60 시간 후 각각 2두, 2두, 2두, 3두를 부검시 모든 십이지장, 공장 및 회장에서 양성 반응을 보였고 72시간 후 3 두를 부검시 3두중 1두가 십이지장, 공장에서 음성 반응을 보였고, 회장에서 모두 양성 반응을 보였다.
- PEDV를 공격 접종한 실험 I군은 공격 접종 24시간 후 2두를 부검시 1 두의 공장, 회장에서 뚜렷한 양성반응을 보였고 1두는 PEDV가 검출되지 않았다. 36시간 후 2두를 부검시에도 유사한 양상을 보였고, 48시간 후 2두를 부검시 십이지장, 공장, 회장에서 모두 강한 양성 반응을 보였으며 60시간 후 3두를 부검 시 3두중 2두는 십이지장 및 회장에서 비교적 강한 반응을, 3두 모두 공장에서 강한 반응을 보였으며, 72시간 후 3두를 부검시 3두중 2두는 십이지장에서 비교적 강한 반응을 보였고 3두 모두 공장 및 회장에서 강한 반응을 보였다.
- 6%의 검출률을 보였다. PCV2 단독 접종한 실험 III 군에서는 각각 35예의 비강, 직장 및 혈액재료 중 각각 10예 검출되어 28.5%의 검출률을 보였고, 5에가 검출되어 14.2%의 검출률을 보였고, 3예가 검출되어 8.5% 의 검출률을 보였다. 두 실험군의 뇨에서 PCV2는 검출되 지 않았다.
- PEDV와 PCV2 복합 접종후 24 시간에는 혈중 모체이행항체가 바이러스를 중화 시켜 항체가 감소된 것으로 생각되며 접종후 72시간에 혈중항체가 는 실험 I군에 비교하여 낮게 형성된 것은 능동면역이 지연 혹은 억제된 것으로 판단된다. PCV2를 공격 접종한 실험 Ⅲ군과 대조군의 항체가는 유사한 양상을 보였고 접종후 24시간에는 실험 I군과 실험 II 군에 비하여 현저히 높은 역가를 보였으며 실험종료 시까지 완만한 감소를 나타냈다. 이는 모체 이행항체가 바이러스를 중화하지 않고 자연적으로 감소된 것으로 사료된다.
- 07이었다. PCV2를 공격접종한 실험 III군과 대조군의 평균 혈청항체가는 각각, 공격접종 전에는 2.92 ± 0.13, 2.77±0.06, 공격접종 24시간 후에는 2.48士0.09, 2.35±0.12, 공격접종 36시간 후에는 2.43士0.11, 2.22 ±0.11, 공격접종 48시간 후에는 2.32±0.08, 2.18± 0.10, 공격접종 60시간 후에는 2.27±0.15, 2.07±0.07, 공격접종 72시간 후에는 2.15±0.13, 1.97±0.11이었다(F<0.05) (Text-Fig. 2A).
- PEDV를 공격 접종한 실험 I군에서 공격접종 24 시간 후 2두를 부검시 1두의 십이지장, 공장, 회장에서 양성 반응을 보였고 1두는 PEDV가 검출되지 않았다. 36시간 후 2두를 부검시 1두의 십이지장에서 음성 반응 보였고 공장, 회장에서 모두 양성을 보였으며 48시간 후 2두를 부검시 십이지장, 공장 및 회장에서 모두 양성 반응을 보였으며 60시간 후 3두를 부검시 모든 십이지장, 공장 및 회장에서 양성 반응을 보였고, 72시간 후 3두를 부검시 모든 십이지장, 공장 및 회장에서 양성 반응을 보였다.
- PEDV를 공격 접종한 실험 I군에서는 총 39예의 분변 재료 중 34예에서 PEDV가 검출되어 87.1%의 검출률을 보였으나 PEDV와 PCV2 혼합 공격 접종한 실험 II군에서는 총 39예의 분변재료 중 37예에서 PEDV가검출되어 94.9%의 검출률을 보였다. PEDV를 공격 접종한 실험 I군의 12두 자돈의 십이지장, 공장, 회장조직에서 PEDV에 대한 RT-PCR검사시에 양성율은 각각 83.
- 4과 같다. PEDV를 공격 접종한 실험 I군은 공격 접종 24시간 후 2두를 부검시 1 두의 공장, 회장에서 뚜렷한 양성반응을 보였고 1두는 PEDV가 검출되지 않았다. 36시간 후 2두를 부검시에도 유사한 양상을 보였고, 48시간 후 2두를 부검시 십이지장, 공장, 회장에서 모두 강한 양성 반응을 보였으며 60시간 후 3두를 부검 시 3두중 2두는 십이지장 및 회장에서 비교적 강한 반응을, 3두 모두 공장에서 강한 반응을 보였으며, 72시간 후 3두를 부검시 3두중 2두는 십이지장에서 비교적 강한 반응을 보였고 3두 모두 공장 및 회장에서 강한 반응을 보였다.
- 9%의 검출률을 보였다. PEDV를 공격 접종한 실험 I군의 12두 자돈의 십이지장, 공장, 회장조직에서 PEDV에 대한 RT-PCR검사시에 양성율은 각각 83.3%, 91.6%, 91.6%인데 비해 PEDV와 PCV2 복합 공격 접종한 실험 II군에서는 십이지장, 공장, 회장조직에서 PEDV에 대한 형광항체검사시에 양성율은 각각 91.6%, 91.6%, 100%의 더 높은 것으로 보였다. PCV2를 공격 접종한 실험 III군와 대조군의 포유자돈은 십이지장, 공장, 회장에서 PEDV가 검출되지 않았다.
- PEDV를 공격 접종한 실험 I군의 12두 자돈의 십이지장, 공장, 회장조직에서 PEDV에 대한 형광 항체검사 시에 양성율은 각각 75%, 83%, 75%인데 비해 PEDV 와 PCV2 복합 공격 접종한 실험 II군에서는 십이지장, 공장, 회장조직에서 PEDV에 대한 형광항체검사 시에양성율은 각각 91.3%, 91.3%, 83.3%의 더 높은 것으로 보였다. PCV2를 공격 접종한 실험 III군와 대조군의 포유자돈은 십이지장, 공장, 회장에서 PEDV가 검출되지 않았다.
- PEDV와 PCV2 복합 공격 접종한 실험 III군에서 공격 접종 24시간 및 36시간 후 각 2두를 부검시 모두의 십이지장, 공장, 회장에서 강한 반응을 보였고 48시간 후 2두를 부검시 모두 십이지장, 공장, 회장에서 모두 비교적 강한 반응을 보였으며 60시간 및 72시간 후 3 두를 부검시 3두 모두 십이지장, 공장에서 약한 반응을 보였고 3두중 2두는 회장에서 약한 반응을 보였다.
- 36시간 후 2두를 부검시 1두의 십이지장에서 음성 반응 보였고 공장, 회장에서 모두 양성을 보였으며 48시간 후 2두를 부검시 십이지장, 공장 및 회장에서 모두 양성 반응을 보였으며 60시간 후 3두를 부검시 모든 십이지장, 공장 및 회장에서 양성 반응을 보였고, 72시간 후 3두를 부검시 모든 십이지장, 공장 및 회장에서 양성 반응을 보였다. PEDV와 PCV2 복합 공격 접종한 실험 II군에서 공격접종 24시간, 36시간, 48시간 및 60 시간 후 각각 2두, 2두, 2두, 3두를 부검시 모든 십이지장, 공장 및 회장에서 양성 반응을 보였고 72시간 후 3 두를 부검시 3두중 1두가 십이지장, 공장에서 음성 반응을 보였고, 회장에서 모두 양성 반응을 보였다.
- PEDV, PCV2를 단독 또는 복합감염시켰을 때의 조직에서 PCV2를 검출한 결과는 Table 3과 같다. PEDV와 PCV2 복합 접종군에서는 12예 폐재료 중 4예 검출되어 33.3%의 검출률을 보였고, 12예 소장재료 중 2예 검출되어 16.6%의 검출률을 보였으며 PCV2 단독 접종군에서는 11예 폐재료 중 4예 검출되어 36.3%의 검출률을 보였고 11예 소장재료 중 1예 검출되어 9%의 검출률을 보였으며 편도에서도 1예 검출되어 9%의 검출률을 보였다. 또한 PEDV 단독 접종 군과 대조군에서는 모두 PCV2가 검출되지 않았다.
- 2과 같다. PEDV와 PCV2 복합 접종한 실험 II 군에서는 각각 39 샘플의 비강, 직장 및 혈액재료 중 각각 9예가 검출되어 23%의 검출률을 보였고, 6예가 검출되어 15.3%의 검출률을 보였고, 3예가 검출되어 7.6%의 검출률을 보였다. PCV2 단독 접종한 실험 III 군에서는 각각 35예의 비강, 직장 및 혈액재료 중 각각 10예 검출되어 28.
- 유지하였다. PEDV와 PCV2 혼합 공격 접종한 실험 II군은 공격접종 후 24시간에서 PEDV의 항체가가 PEDV> 단독 감염시킨 실험 I군과 비해 서서히 감소하였으며 공격접종 후 공격접종 48시간 후부터 공격 접종 72시간 후까지 별다른 변화를 보이지 않았다. PCV2를 공격접종한 실험 III군 및 PEDV와 PCV2 혼합 공격 접종한 실험 II군은 실험시작부터 종료까지 PCV2 평균 혈청항체가 유사하였다.
- 감염초기에 복합 접종 군은 단독 접종군 비해 더 강력한 PEDV의 감염을 일으킨 것으로 추정된다. 단독 접종군은 12두 자돈의 십이지장, 공장, 회장조직에서 PEDV에 대한 형광항체검사 시에 양성율은 각각 75%, 83%, 75%인데 비해 복합 접종 군에서는 각각 91.3%, 91.3%, 83.3%의 더 높은 양성율나타냈으며 RT-PCR검사와 유사한 결과를 나타내 었다. 실험 후기에 검사시 복합 접종군과 단독 접종군 모두검출율이 떨어지는 양상을 나타내었으며 이는 감염 후반에 바이러스에 의해 소장융모상피세포의 탈락이 심하기 때문에 검출율이 떨어지는 것으로 사료된다.
- 감염초기에 PEDV와 PCV2 복합 접종한 실험 II군은 PEDV 단독 접종한 실험 I군 비해 PEDV 높게 검출된 것으로 나타내어 더 신속한 감염을 일으키는 것으로 추정된다. 단독 접종군의 십이지장, 공장, 회장조직에서 PEDV 양성율은 각각 83.3%, 91.6%, 91.6%인데 비해 복합 접종군에서는 각각 91.6%, 91.6%, 100%로 더 높은 양성율을 보였다. 단독 접종군에서의 검출률은 Kim 등(2000)의 연구결과에 비해 유사하게 나타났었지만 복합 접종군에 비해서는 낮아 PEDV와 PCV2 복합 감염에 따른 바이러스가 더 많은 증식이 되었다고 사료된다.
- 이는 모체 이행항체가 바이러스를 중화하지 않고 자연적으로 감소된 것으로 사료된다. 또한 PCV2의 감염이 PEI*] 면역형성에 영향을 준 것으로 사료되었다. PCV2의 항체조사에서는 PEDV와 PCV2를 복합 접종한 실험 II군과 PCV2 단독접종한 실험 Ⅲ군의 항체가가 실험전후에 유사하게 나타났고 PCV2의 항체 역가는 PEDV 감염 여부와 관계가없은 것으로 생각된다.
- 본 연구에서 RT-PCR을 이용한 분변과 소장에서 공격 접종한 PEDV의 검출결과는 PEDV를 단독 접종한 실험 I 군의 포유자돈에서 접종 후 24시간에 2두를 부검 시 1두의 십이지장, 공장, 회장에서 양성 반응을 보였고 1두는 PEDV가 검출되지 않았다. 반면에 PEDV와 PCV2 복합접종한 실험 II군에서 접종후 24시간에 부검한 2두의 십이지장, 공장, 회장에서 모두 양성 반응을 보였다. 감염초기에 PEDV와 PCV2 복합 접종한 실험 II군은 PEDV 단독 접종한 실험 I군 비해 PEDV 높게 검출된 것으로 나타내어 더 신속한 감염을 일으키는 것으로 추정된다.
- 바이러스가 검출되었다고 보고하였다. 본 연구에서 RT-PCR을 이용한 분변과 소장에서 공격 접종한 PEDV의 검출결과는 PEDV를 단독 접종한 실험 I 군의 포유자돈에서 접종 후 24시간에 2두를 부검 시 1두의 십이지장, 공장, 회장에서 양성 반응을 보였고 1두는 PEDV가 검출되지 않았다. 반면에 PEDV와 PCV2 복합접종한 실험 II군에서 접종후 24시간에 부검한 2두의 십이지장, 공장, 회장에서 모두 양성 반응을 보였다.
- 설사가 시작된 뒤 6시간 이내에는 공장과 회장의 융모 상피세포의 90〜100%에서 형광항체에 대한 강한 양성반응이 나타나고 12〜45시간에서는 반응이 급격히 떨어지며 24〜45시간에서는 1~10%의 소장융모의 상피세포에서만 양성반응을 확인할 수 있었으나 재생된 상피세포에 재감염을 일으켰을 시 융모상피세포의 90 〜100%에서 양성반응이 나타난다고 보고하였다. 본연구에서 PEDV를 공격 접종한 실험 I군은 공격 접종 24시간 후 2두를 부검 시 1두의 공장, 회장의 융모 상피세포의 40%에서 양성반응을 보였고 1두는 PEDV가검출되지 않았고 반면에 PEDV와 PCV2 복합 접종한 실험 II군에서 접종 후 24시간에 부검한 2두의 십이지장, 공장, 회장의 융모상피세포의 60〜70%에서에서강한 양성반응을 보였다. 감염초기에 복합 접종 군은 단독 접종군 비해 더 강력한 PEDV의 감염을 일으킨 것으로 추정된다.
- 3%의 더 높은 양성율나타냈으며 RT-PCR검사와 유사한 결과를 나타내 었다. 실험 후기에 검사시 복합 접종군과 단독 접종군 모두검출율이 떨어지는 양상을 나타내었으며 이는 감염 후반에 바이러스에 의해 소장융모상피세포의 탈락이 심하기 때문에 검출율이 떨어지는 것으로 사료된다.
- 이상의 결과에서 PEDV와 PCV2를 복합 감염시킨 포유자돈은 단독 감염시킨 포유자돈에 비하여 심한 임상 및 병리조직학적 소견을 보여 돼지써코바이러스 2 형이 돼지유행성설사를 더욱 심화시키는 것으로 나타났다.
- 07로 급격히 항체가 저하를 보였다. 접종후 36시간, 48시간, 60 시간에 소폭 감소를 보였고 접종후 72시간에는 접종후 60시간에 비해 항체가가 소폭 증가하였다. PEDV 공격 접종 후 24시간에는 혈중 모체이행항체가 침입된 바이러스를 중화시켜 항체가가 감소한 것으로 생각하며 접종 후 72시간에 항체가가 다시 상승하였으며 이는 PEDV에 대한 능동면역에 의하여 항체형성된 것으로 사료된다.
- 12로 나타나 실험 I군과 비교하여 더 낮은 항체가를 나타내었다. 접종후 36시간, 48시간, 60 시간에도 다소 감소된 항체가를 나타내었고 접종후 72 시간에 1.05 ±0.07로 나타내어 실험 I군과 비하여 항체가 낮게 형성되었다. PEDV와 PCV2 복합 접종후 24 시간에는 혈중 모체이행항체가 바이러스를 중화 시켜 항체가 감소된 것으로 생각되며 접종후 72시간에 혈중항체가 는 실험 I군에 비교하여 낮게 형성된 것은 능동면역이 지연 혹은 억제된 것으로 판단된다.
- 형광항체법에 의한 소장에서 PEDV의 검출시에 PEDV와 PCV2 복합 접종한 실험 II군이 PEDV 단독접종한 실험 I군에 비하여 높은 검출률을 보였고 특히 감염 초기에 현저히 높게 검출되었다.
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