[논문]충남 서산태안지역에서 사육중인 송아지의 코로나바이러스 감염률 조사

육심용; 남이현; 이미성; 한우수; 강형주; 전동민; 이재봉

충남 서산태안지역에서 사육중인 송아지의 코로나바이러스 감염률 조사
A study on the prevalence of bovine coronavirus infection for calves in Seosan-Taean Area 원문보기

韓國家畜衛生學會誌 = Korean journal of veterinary service, v.32 no.3, 2009년, pp.209 - 213

육심용 (충청남도가축위생연구소 태안지소) , 남이현 (충청남도가축위생연구소 태안지소) , 이미성 (충청남도가축위생연구소 태안지소) , 한우수 (충청남도가축위생연구소 태안지소) , 강형주 (충청남도가축위생연구소 태안지소) , 전동민 (충청남도가축위생연구소 태안지소) , 이재봉 (충청남도가축위생연구소 태안지소)

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This survey was carried out to investigate the prevalence of bovine coronavirus (BCV) infection for the calves in Seosan-Taean Area. A total of 75 samples were collected from fecal swab to detect BCV by RT-PCR Results obtained through the survey were as follows; By RT-PCR(455bp) BCV was detected fro...

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문제 정의

본 시험에서는 충남 서산 태안지역 양축농가에서 의뢰된 가검물과 분변시료를 조사하여 송아지의 코로나바이러스 감염률을 조사한 후, 농가 피해를 경감시킴은 물론 방역지도 및 질병 예방을 위한 기초 자료로 활용하고자 한다.
본 조사에서는 송아지 분변 swab 에서 신속하고 간편하게 소 코로나바이 러스를 검출하고자 RT-PCR법 이 개발되어 이를 응용하여 서산태안지역 양축농가의 감염률을 조사하였다. 그 결과 소 코로나바이러스 감염된 것으로 확인된 분변 시료에서 소 코로나바이 러스의특이한 증폭산물을 확인할 수 있었다.

제안 방법

PCR로 증폭된 산물을 확인하기 위하여 5㎕의 PCR산물을 1㎕1의 gel loading buffer (0.25% bromophenol blue tracking dye in 25% Ficoll)와 혼합하여 ml당 0*g .5] ethidium bromide 가 포함된 1% agarose gel 에 로딩한 다음 전기 영동이 끝난 gel을 UV illuminator에서 BCV 의 455bp증폭산물의 유무를 확인하였다(강, 2008; 안 등, 1999)
역전사 및 증폭을 위해Quiagen Onestep RT-PCR kit를 사용하였다. RNase- free water 12p, l, 5 RT-PCR buffer 5㎕1, dNTP Mix RT-PCR Enzyme Mix Ijzl, Primer (R) 0.5^1, Primer (F)0.5jxl, RNA 추출물 5㎕1를 순서대로 가하여 최종 반응액을 25叫로 되게 하였고 이 혼합액을 Thermocycler (Bio-metra)에서 45°C 30분, 94°C 15분 반응후 증폭을 위해 94°C 10초, 50°C 10초, 72°C 15초씩 총 35회 반응 시 킨 다음 최종 72°C에서 10분간 연장시 켰다.
BCV의 유전자 증폭은 안 등(1999)과 허 등(2008)의방법을 응용하여 실시하였다. 역전사 및 증폭을 위해Quiagen Onestep RT-PCR kit를 사용하였다. RNase- free water 12p, l, 5 RT-PCR buffer 5㎕1, dNTP Mix RT-PCR Enzyme Mix Ijzl, Primer (R) 0.
3회 동결 . 융해를 반복 후, 3, 000rprn에서 10분간 원심분리 한 다음 상층액 200㎕를 취하여 RNA를 추출에 사용하였고, RNA 추출은 RNasy Minikit (Qiagen, USA)의 glass fiber column을 이용하여 공시된 방법에준하여 수행하였다.
비특이적 요인이 많아 신뢰도가 저하된다고 보고되었다(Benefied와 Saif, 1990). 이번 연구과정에서는 간섭효과를 제거하고, 바이러스 특이적 증폭산물만을 생성하여 신속하고 정확성이 확보된 reverse transcrip- tion-polymerase chain reaction(RT-PCR) 방법으로BCV 감염률을 조사하였다.
서산 . 태안지역 양축농가에서 사육중인 송아지 분변내 BCV 검출을 위한 RT-PCR 검사결과 Fig. 1 과 같이 증폭산물 밴드를 확인하였다.

대상 데이터

2008년 1 월부터 2008년 12월까지 서산, 태안지역 내 소 사육농장에서 의뢰된 분변 75건을 공시하였다.

이론/모형

BCV의 반응 증폭산물은 생성하기 위해 Table 1와 같이 안 등(1999)의 방법에 따라 제작된 primer를 이용하여 증폭시 켰다(강, 2008).
융해를 반복 후, 3, 000ipm에서 10분간 원심분리 한 다음 상층액 200㎕를 취하여 RNA를 추출에 사용하였고, RNA추출은 RNasy Minikit (Qiagen, USA) 의 glass fiber column을 이용하여 공시된 방법에 준하여 수행하였다.

성능/효과

조사하였다. 그 결과 소 코로나바이러스 감염된 것으로 확인된 분변 시료에서 소 코로나바이 러스의특이한 증폭산물을 확인할 수 있었다. 또한 검사 결과 설사 증상을 나타낸 송아지 분변으로부터 신속하게 소코로나 바이러스를 검출하고 이에 적합한 치료 방법을 농가에 제시하고 조기 및 적기 에 치료를 유도함으로써 농가의 경제적 손실을 조기에 방지할 수 있는 기초 자료가 될 것으로 사료된다.
본 실험에서는 분리 대장균에 대한 항생제감수성시험을 실시한 결과 유효항생제는 amikacin (85%), ampi- cilline (55%), enorfloxacin (70%)로 순으로 감수성 이나타나 유사한 성적으로 조사되 었다.
등, 1997; 안 등, 1999). 본 실험에서도 간편하고 정확한 RT-PCR 검사을 실시하여 증폭산물 확인 결과 455bp로 양성으로 판정하였다
6%가 양성으로조사되어 소 코로나바이러스 감염증이 상당히 만연되고 있다고 보고하였다(김 등, 1999), 또한 국내에서는 소 코로나바이러스 감염률은 지역별 연령별 다양한 차이를 나타내고 있다. 본 조사에서도 17.3%로 국내 조사성적과 유사함을 확인할 수 있었다. 특히, 충남 서산지역에서는 타 지역과 달리 사양 환경과 송아지의 포유기에 사양관리에 따른 비교적 높은 감염률을 나타낸 것으로 사료된다.
같이 조사되었다. 연령별 BCV의 감염률을 조사한 결과 1월령 미만에서는 3건, 1-3월령에서는 9건, 3월령 이상에서 1 건이 검사결과 양성으로 조사되었다.
Table 2와 같다. 요약하면, 총 75건의 분변 중에 13건이 검출되었으며, 서산지역에서는 10건(18%), 태안지역에서 3건(15%)이 검출되어 서산지역이 비교적 높게 검출되었다.

후속연구

그 결과 소 코로나바이러스 감염된 것으로 확인된 분변 시료에서 소 코로나바이 러스의특이한 증폭산물을 확인할 수 있었다. 또한 검사 결과 설사 증상을 나타낸 송아지 분변으로부터 신속하게 소코로나 바이러스를 검출하고 이에 적합한 치료 방법을 농가에 제시하고 조기 및 적기 에 치료를 유도함으로써 농가의 경제적 손실을 조기에 방지할 수 있는 기초 자료가 될 것으로 사료된다.
8% 가 집중적으로 발생된다고 보고(강 등, 2001)되어 있어 신생 송아지 설사는 분만 초기부터 중요한 질병으로 분류되고 있다고 보고하고 있는 상황이다. 본 시험에서는 송아지 설사병의 BCV의 검사에서는 1〜3월령(이등, 1997)에서 비교적 높은 검출로 이 등(2008)이 보고한 연령과는 다소 차이가 있으나 어린 일령에서 발생하여 발생시기와 상관없이 상시 백신접종 및 관리가 필요하다고 판단된다.

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