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문제 정의
- OVE의 항마이코플라즈마 작용 외에 임상적으로 문제가 되는 만성 염증의 억제하는 효능을 검정하고자 하였다. 이러한 효능 검증을 위하여 먼저 병원성 M.
- 따라서 본 연구에서는 1차적으로 여러가지 식물 추출물에서 항마이코플라즈마에 효과가 있는 phytobiotics 에서 스크리닝 과정을 거쳐 가장 항균 효과가 탁월한 추출물을 선택하였으며, 마이코플라즈마의 항염증 검증을 위하여 RAW 264.7세포주에서 염증성 사이토카인의 유전자 및 단백질 발현을 조사한 후에 선발된 식물 추출물의 염증 억제 유무를 확인하였다. 확인된 식물추 출물에 대한 성분 분석과 기존의 마이코프라즈마 항균제인 tiamulin(TIA)과의 병용 투여 시 상호작용에 대하여 조 사하였다.
- 따라서 본 연구에서는 약용식물의 주줄 물을 이용히 여 M. hyo의 호흡기 질병에 대한 항균 작용과 항염증 작용을 갖는 물질을 찾고자 하였다.
- [2].본 연구는 이러한 문제를 해결하기 위해 항마이코플라즈마와 항염증 효과를 갖고 있는 천연식물 주출물을 탐색하고자 하였다.
제안 방법
- 최종 PCR 산 물을 ethidium bromide로 염색한 1% TAE agarose gel 싱에서 전기영시킨 후 EAG-LE-EYETM(Stratagene, USA) 을 이용하여 band의 위치를 확인하고 density를 측정하였다. Eagle-eye spot dentisometry를 사용하여 denstiy로 정량한 후, 각 cytokine의 intensity는 0-actin의 intensity에 대한 퍼센트로 나타내었다.
- OVE의 성분 분석을 위하여 GC/MS analysis을 실시하였다. 분석기기는 Hewlett-Packard(HP) 6890 Plus GC gas chromatograph with(MSD)-HP 5973 MSD mass selective detector 이었다.
- RT 반응은 AccuPower RT-Premix(Bioneer, Korea)을 이용하여 42℃에서 90분간 반응시키고 95℃에서 효소 반응을 중지시켰다. RT products와 목적 primer(cyclooxygenoase(COX)-2, IL-ip, IL-6, inducible nitric oxide synthase(iNOS), tumor necrosis fiictor(TNF)-a, [3-actin를 AccuPower PCR premix를 이용하여 MyCyclerTM thermal cycler(Bio-Rad, Singapore)0, ]서 PCR 반응시켰다. 반응 조건은 denaturation 95℃/60초, annealing 55℃/45초(iNOS 60℃/45초), extension 72℃/45초 였으며, COX-2, IL-ip, IL-6, iNOS 그리고 TNF-a는 총 35 cycles, [3-actin는 30 cycles을 실시하였다.
- 가축사료 첨가용 소재로 활용 가능한 Citrus imshiu Markovich(진피), Berberls koreana(매자나무)의 뿌리 및 줄기, 상백피), Dendrobium nioniUfomie(석곡), Aster gramineus석창포), A. scabar(취나물), Allsma candicidatum(택사, ) 그리고 Fallopia japonica(호장근)를 선정하여miller로 분쇄하고 포준망체(40 mesh)를 통과한 분말에 10배 증류수를 첨가한 다음 95℃에서 2시간 환류주출하였다. 한편 Origanum vulgare 주출물(OVE)은 ether 관류로 정유만을 모아서 농축 후에 시험에 사용하였다.
- hyo의 용량 선택이 중요하다. 그러나 M. hyo는 세균과는 달리 집락수에 의한 접종 기준을 설정하기에는 많은 어려움이 있으므로 성장에 따른 배지색을 기준으로 M. hyo의 단백질 양을 이용하여 실험에 사용하였다. Fig.
- hyo는 상기에서 기술한 방법으로 배양하였다. 기존의 마이코플라즈마에 사용하는 항생제인 TIA과 OVE 를 각각의 MIC를 기준으로 2배희석법을 이용한 checkerboard method로 FIC를 측정하여 TIA과 OVEE의 상호작용을 FIC index를 구하여 평가하였다 [8].
- 그러나 OVEe 시기, 계절 및 수확지의 장소에 따라 조금씩 달라지므로 성분 분석을 통한 성분 비율 및 지표물질의 확인이 중요하다. 따라서 본 연구에서는 GC/MS 를 통하여 0VE의 주된 성분을 분석하였다. 0VE의 구 성성분은 carvacrol(68.
- RT products와 목적 primer(cyclooxygenoase(COX)-2, IL-ip, IL-6, inducible nitric oxide synthase(iNOS), tumor necrosis fiictor(TNF)-a, [3-actin를 AccuPower PCR premix를 이용하여 MyCyclerTM thermal cycler(Bio-Rad, Singapore)0, ]서 PCR 반응시켰다. 반응 조건은 denaturation 95℃/60초, annealing 55℃/45초(iNOS 60℃/45초), extension 72℃/45초 였으며, COX-2, IL-ip, IL-6, iNOS 그리고 TNF-a는 총 35 cycles, [3-actin는 30 cycles을 실시하였다. 최종 PCR 산 물을 ethidium bromide로 염색한 1% TAE agarose gel 싱에서 전기영시킨 후 EAG-LE-EYETM(Stratagene, USA) 을 이용하여 band의 위치를 확인하고 density를 측정하였다.
- 양성대조군으로는 lipopolysaccharide(LPS)를 1 jig/mL의 농도로 처리하였다. 배양 후 상층액에서 염증성 사이토카인mRNA를 측정하기 위하여 a solid phase sandwich Enzyme Linked-Immuno Sorbent Assay(ELISA; Camerillo, USA)에서 kit로 측정하여 450nm에서 ELISA로 흡광도를 측정하여 사이토카인 단백질량을 정량하였다. 이와 더불어 mRNA cytokine 발현 양상을 함께 비교하기 위하여 M.
- aureus(ATCC 6538) 균주를 5 mL TSB 배지에 37℃에서 하룻밤 진탕배양을 실시하였다. 배양된 각각의 균주는 멸균된 생리식염수로 희석하여 agar dilution method로 균수를 각각 계산한 후 10배 희석법으로 균주를 IO, CFU로 조정하여 minimal inhibitory concentration(MIC)측정을 위한 시험 균주로 사용하였다.
- 또한 사이토카인 단백질을 측정하기 위해 RTPCR때 와 동일한 시간과 농도로 세포를 처리한 뒤 상층액을 제거하고 PBS로 2회 세척한 후에 scrapper로 세포를 수확하고 lysis buffer를 넣어서 세포를 용해시켰다. 수확된 단백질은 bovine serum albumin를 이용하여 단백질량을 보정하였다.
- 앞의 실험에서 항마이코플라즈마 효과를 보인 OVE 가 항엮증 효과에 활성이 있는지를 조사하였다. 30 |ig/mL 의 M.
- hyo 100|ig/mL를 처리하고 24시간 배양시켰다. 양성대 조군은 LPS 1μg/mL를 처리하고 음성 대 조군으로 LPS 없이 RAW 264.7 cell을 배양하여 cytokine 발현 양상을 상기의 방법으로 측정하였다.
- /g를 30 |ig/mL 농도로 처리하여 18시간 배양하였다. 양성대조군으로는 lipopolysaccharide(LPS)를 1 jig/mL의 농도로 처리하였다. 배양 후 상층액에서 염증성 사이토카인mRNA를 측정하기 위하여 a solid phase sandwich Enzyme Linked-Immuno Sorbent Assay(ELISA; Camerillo, USA)에서 kit로 측정하여 450nm에서 ELISA로 흡광도를 측정하여 사이토카인 단백질량을 정량하였다.
- 위의 결과를 기초로 OVE의 마이코플라즈마의 MIC 를 기준으로 RAW 264.7 세포주에 OVE 32 jig/mL로 전처리를 실시한 후에 M. hyO의 30 jig/mL를 처리하였다. 그 결과 M.
- OVE의 항마이코플라즈마 작용 외에 임상적으로 문제가 되는 만성 염증의 억제하는 효능을 검정하고자 하였다. 이러한 효능 검증을 위하여 먼저 병원성 M. hyO에 의한 염증 사이토카인의 mRNA 수준과 단백질의 유도를 확인하였으며, 염증 억제에 대한 효능 검증을 위해서는 RAW 264.7세포주에 시료처리에 따른 NO 발생 감소를 측정함으로서 항염증 작용 정도를 측정하였다 [10].그 결과 M.
- 배양 후 상층액에서 염증성 사이토카인mRNA를 측정하기 위하여 a solid phase sandwich Enzyme Linked-Immuno Sorbent Assay(ELISA; Camerillo, USA)에서 kit로 측정하여 450nm에서 ELISA로 흡광도를 측정하여 사이토카인 단백질량을 정량하였다. 이와 더불어 mRNA cytokine 발현 양상을 함께 비교하기 위하여 M.hyo 처리 후에 세포를 모으고 Trizol reagent(Bioneer, Korea)를 사용하여 total RNA를 분리하여 0.02% Diethylpyrocar bonate(DEPC) 에서 -2(TC에서 냉동 보관 하였다. 모든 시료는 260 run/ 280 nm ratio가 1.
- 반응 조건은 denaturation 95℃/60초, annealing 55℃/45초(iNOS 60℃/45초), extension 72℃/45초 였으며, COX-2, IL-ip, IL-6, iNOS 그리고 TNF-a는 총 35 cycles, [3-actin는 30 cycles을 실시하였다. 최종 PCR 산 물을 ethidium bromide로 염색한 1% TAE agarose gel 싱에서 전기영시킨 후 EAG-LE-EYETM(Stratagene, USA) 을 이용하여 band의 위치를 확인하고 density를 측정하였다. Eagle-eye spot dentisometry를 사용하여 denstiy로 정량한 후, 각 cytokine의 intensity는 0-actin의 intensity에 대한 퍼센트로 나타내었다.
- 마이코플라즈마균체 단백질을 bicinchoninic acid(BCA) assay(Pierce Biotechnology, USA)를 이용하여 즉정하였다. 최종균체농도는 BCA assay를 실시하여 단백질 농도를 측정하여 300 |ig/mL(l X 10101 X io11 CCU)로 조정하여 사용하였다. 마이코플라즈마의 염증 반응을 보기 위하여 마우스 유래의 대식세포인 RAW 264.
- 항균 작용 검증을 위한 양성대조용 물질로는 surfactin C, norfloxacin, streptomycin 그리고 TIA을 시험에 사용하였다. 항마이코플라즈마 활성을 측정하기 위하여 건조 중량을 측정하여 96 well plate에 각 시료 추출물을 1, 024 jig/mL에서 시작하여 2단계 희석으로 희석시킨 후에 105 CCU의 마이코플라즈마를 이미 각 well 에 lOOpL씩 천연 추출물 및 항균제가 포함된 well에 분주하여 3일, 7일 그리고 14일 후에 색의 변화를 보고 마이코플라즈마의 성장 유무를 판단하였다.
- 7세포주에서 염증성 사이토카인의 유전자 및 단백질 발현을 조사한 후에 선발된 식물 추출물의 염증 억제 유무를 확인하였다. 확인된 식물추 출물에 대한 성분 분석과 기존의 마이코프라즈마 항균제인 tiamulin(TIA)과의 병용 투여 시 상호작용에 대하여 조 사하였다.
대상 데이터
- 가축사료 첨가용 소재로 활용 가능한 Citims unshiu Malkovich(진피)외 9개 시료를 대상으로 항마이코플라즈마 활성에 대하여 시간에 따라 조사하였다. 그 결과를 Table 1에 나타내었다.
- 최종균체농도는 BCA assay를 실시하여 단백질 농도를 측정하여 300 |ig/mL(l X 10101 X io11 CCU)로 조정하여 사용하였다. 마이코플라즈마의 염증 반응을 보기 위하여 마우스 유래의 대식세포인 RAW 264.7 세포주(KCLB; Korean Cell Line Bank, Korean을 Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM)에 10% fetal bovine serum(FBS)와 100 jig/mL의 streptomycin 과 100unit/ml] penicillin을 첨가하여 5% CO2 조건의 37℃에서 배양하였다.
- OVE의 성분 분석을 위하여 GC/MS analysis을 실시하였다. 분석기기는 Hewlett-Packard(HP) 6890 Plus GC gas chromatograph with(MSD)-HP 5973 MSD mass selective detector 이었다. 시료는 HPLC 급의 메탄올로 1 : L000(v/v)으로 희석하여 1 pL을 HP-5 컬럼에 주입하였다.
- scabar(취나물), Allsma candicidatum(택사, ) 그리고 Fallopia japonica(호장근)를 선정하여miller로 분쇄하고 포준망체(40 mesh)를 통과한 분말에 10배 증류수를 첨가한 다음 95℃에서 2시간 환류주출하였다. 한편 Origanum vulgare 주출물(OVE)은 ether 관류로 정유만을 모아서 농축 후에 시험에 사용하였다. 항균 작용 검증을 위한 양성대조용 물질로는 surfactin C, norfloxacin, streptomycin 그리고 TIA을 시험에 사용하였다.
- 한편 Origanum vulgare 주출물(OVE)은 ether 관류로 정유만을 모아서 농축 후에 시험에 사용하였다. 항균 작용 검증을 위한 양성대조용 물질로는 surfactin C, norfloxacin, streptomycin 그리고 TIA을 시험에 사용하였다. 항마이코플라즈마 활성을 측정하기 위하여 건조 중량을 측정하여 96 well plate에 각 시료 추출물을 1, 024 jig/mL에서 시작하여 2단계 희석으로 희석시킨 후에 105 CCU의 마이코플라즈마를 이미 각 well 에 lOOpL씩 천연 추출물 및 항균제가 포함된 well에 분주하여 3일, 7일 그리고 14일 후에 색의 변화를 보고 마이코플라즈마의 성장 유무를 판단하였다.
- 호흡기 세균인 R multicida type A, P. multiclda type D, K. Pneumoniae 2001, K. Pneumoniae 1560, K. Pneumoniae 2208 그리고 S. aureus(ATCC 6538) 균주를 5 mL TSB 배지에 37℃에서 하룻밤 진탕배양을 실시하였다. 배양된 각각의 균주는 멸균된 생리식염수로 희석하여 agar dilution method로 균수를 각각 계산한 후 10배 희석법으로 균주를 IO, CFU로 조정하여 minimal inhibitory concentration(MIC)측정을 위한 시험 균주로 사용하였다.
데이터처리
- 통계학적 분석은 SAS system을 이용하였으며, M. hyo 와 OVES] NO assay 결과는 one-way analysis of variance (ANOVA) 법을 사용하였다.
이론/모형
- Nitric oxide(NO) 생성은 Griess reaction을 이용하여 nitrite 농도로 NO 생산을 측정하였다. Griess reagent A, B를 각각 50 JJ.
- 손상되지 않은 마이코플라즈마 단백질은 27 gauge 바늘을 이용하여 PBS로 균질화를 실시하였다. 마이코플라즈마균체 단백질을 bicinchoninic acid(BCA) assay(Pierce Biotechnology, USA)를 이용하여 즉정하였다. 최종균체농도는 BCA assay를 실시하여 단백질 농도를 측정하여 300 |ig/mL(l X 10101 X io11 CCU)로 조정하여 사용하였다.
- 7mL/min의 속도로 흘렸다. 정량분석은 Area normalization method로 계산하였다.
성능/효과
- 4일 동안 꾸준하게 항균 활성을 보여주었다. 14일째 M. hyo에 대한 OVE의 MIC값은 32 μg/mL로 3일째 항마이코플라즈마 활성보다 W배 감소한 결과로 나타났다.
- 항마이코플라즈마 활성과 항염증 활성을 갖는 OVE 에 대한 성분 분석을 위하여 GC/MS analysis을 실시하여 그 결과를 Table 2에 나타내었다. GC/MS 분석 결과 주요 성분으로는 carvacrol(68.78%)이며 그 외 o-cymene (9.80%), Y-tcrpinene(7.61%) 그리고 thymol(4.03%)로 구 성뇌어 있었다. 이 중 총 carvacrol thymol이 72.
- M. hyo의 감염증에 대한 예방 및 치료는 현재 어려운 실정이므로 항생제를 대체할 식물항균제(phytobiotics) 개발을 위하여 첨가용 사료 소재로 활용 가능한 10개 식 물추출물에 대한 항균 활성을 비교한 결과 허브 추출물인 0VE는 다른 열수 추출물과는 다르게 강한 항마이코플라즈마의 효과를 보였다. 이러한 결과는 전보[기에서 보고한 세균 유래의 계면활성제인 surfactin C인 항 마 이코플라즈마 물질보다 항균능력이 우수함을 보여준다.
- 그러나 IL-6의 경우는 mRNA 의 발현과 동시에 단백질이 생성되는 것을 확인할 수가 있었다. NO의 발생은 iNOS mRNA의 발현 증가와 비슷한 시간에 증가되는 경향을 보였으나 TNF-a는 단백질은 M. hyo 전 처리 후에 빠른 생성을 보여 4시간에 최고점을 보였으나 mRNA의 발현은 변화가 없음을 확인할 수 있었다.
- vulgare의 정유추출물(OVE)이 가장 효과가 좋은 것으로 판단되었다. OVE는 GC/MS분석을 이용하여 72.81% carvacrol-thym이로 이루어진 물질로 밝혀졌으며, OVE의 염증 억제 정도를 측정하기 위한 과정으로 M. hyo에 의한 cytokine 발현 양상을 알아본 결과, 24시간의 M. hyo의 처리 시간이 적합하다고 판단되었다. RT-PCR과 NO assay를 통해 농도의존적인 항염증 작용을 확인하였고, OVE가 마이코 플라 즈마에 사용되는 항생제인 TIA과의 병용 투여로 호흡기 세균에서 항균 작용의 상가 작용과 상승작용을 일으킴을 확인하였다.
- hyo의 처리 시간이 적합하다고 판단되었다. RT-PCR과 NO assay를 통해 농도의존적인 항염증 작용을 확인하였고, OVE가 마이코 플라 즈마에 사용되는 항생제인 TIA과의 병용 투여로 호흡기 세균에서 항균 작용의 상가 작용과 상승작용을 일으킴을 확인하였다. 따라서, 이 연구에서 사용된 OVE는 천연식물 추출물로 항마이코플라즈마를 위한 수의학 적 응용의 소재로 충분한 가치가 있다고 평가된다.
- Table 3에서 RAW 264.7 세포에 M. hyo 30 jig/mL 처리시 COX2, IL-ip, IL-6, TNF-a, iNOS값이 증가하였고, OVE 처리 시 사이토카 인 수준은 농도&] 존적으로 감소 하였다.
- hyO의 30 jig/mL를 처리하였다. 그 결과 M. hyO의 단독 처리군보다 60% 낮은 NO 생산을 보여 항염증 작용이 있음을 확인하였다. 이러한 결과는 OVE의 항염증 작용을 입증시켜주는 결과이며, 앞서 보고된 surfectin(50 jig/mL)과 함께 M.
- 7세포주에 시료처리에 따른 NO 발생 감소를 측정함으로서 항염증 작용 정도를 측정하였다 [10].그 결과 M. hyc는 3 μg/mL에서 30 jig/mL까지는 농도-의존적으로 RAW 264.7 세포주에서 NO 생성을 유도하였으나, 100|ig/mL에서는 NO 생성량이 약간 떨어지는 것으로 보아 이는 M. hyo로 인한 세포독성 작용으로 인한 상대적 세포수의 감소에 따른 NO의 생성량 감소로 사료된다. 따라서 M.
- 1은 마이코플라즈마 성장에 따른 색의 변화와 단백질 양의 상관관계를 나타내었다. 그 결과 마이코플라즈마 농도 100 jig/mL에서 300 jig/mL는 1010CCU에 해당 되었고, 10 |ig/mL 농도에서는 109CCU에 해당되었다.
- 기존의 마이코플라즈마에 사용하는 항생제인 TIA과 의 상호작용을 알아보기 위하여 여러 호흡기 세균에서 MIC와 FIC를 측정하였을 때, TIA와 OVE의 MIC값은 각각 0.25-64 jig/mL 그리고 16-32 jig/mL이었으나, 병용 투여하였을 때 M1C 값은 TIA와 OVE에서 0.06-32 jig/ mL 그리고 2-8 |ig/mL로 감소하였으며 F1C 값 또한 0.371.00이었다. 시험 균주인 S.
- RT-PCR과 NO assay를 통해 농도의존적인 항염증 작용을 확인하였고, OVE가 마이코 플라 즈마에 사용되는 항생제인 TIA과의 병용 투여로 호흡기 세균에서 항균 작용의 상가 작용과 상승작용을 일으킴을 확인하였다. 따라서, 이 연구에서 사용된 OVE는 천연식물 추출물로 항마이코플라즈마를 위한 수의학 적 응용의 소재로 충분한 가치가 있다고 평가된다.
- [13]. 모두 성분은 carvacrol과 유사한 구조체 혹은 동족체로써 분류할 수 있으므로 품질 확인 및 성분 확인을 위한 지표물질로 적절한 한 것으로 생각 되었다.
- 02% Diethylpyrocar bonate(DEPC) 에서 -2(TC에서 냉동 보관 하였다. 모든 시료는 260 run/ 280 nm ratio가 1.80 이상을 확인하였다. 분리한 total RNA는 oligo(dT) 16 primer와 DEPC-DDW를 넣어 70℃에서 10분간 반응시킨 후 냉각시켰다.
- 본 연구의 결과 9가지 약용식물의 열수주출물과 O. vulgare의 정유추출물을 MIC값을 이용하여 항마이코플라즈마 효과를 측정한 결과 O. vulgare의 정유추출물(OVE)이 가장 효과가 좋은 것으로 판단되었다. OVE는 GC/MS분석을 이용하여 72.
- 00이었다. 시험 균주인 S. aureus에서 뚜렷한 상가 작용을 보였으며, 나머지 호흡기 세균에서는 상승작용을 일으키는 것으로 나타났다. 따라서 OVE는 항생제와의 병용 투여제로서 좋은 항마이코플라즈마 제재라고 할 수 있겠으며, 이는 수의 임상에서 사용 가능 함을 알려준다.
- 위의 내용으로 볼 때, Af hyo는 집약적 양돈장 시스템과 보균돈의 생존 및 백신의 낮은 효율성으로 예방하기 어려운 질병임을 알 수 있다.
- 03%)로 구 성뇌어 있었다. 이 중 총 carvacrol thymol이 72.81%로 주요 성분임을 확인할 수 있었다.
- hyO의 단독 처리군보다 60% 낮은 NO 생산을 보여 항염증 작용이 있음을 확인하였다. 이러한 결과는 OVE의 항염증 작용을 입증시켜주는 결과이며, 앞서 보고된 surfectin(50 jig/mL)과 함께 M. hyo(100 jig/mL)를 처리한 군이 M. hyO(100jig/mL)의 단독 처리군보다 약 33% 낮은 NO 생산을 보인 결과보다 우수함을 알 수가 있었다 [8].한편 RTPCR을 이용하여 염증 관련 사이토카인을 측정한 결과, OVE 처리군은 M.
- hyO(100jig/mL)의 단독 처리군보다 약 33% 낮은 NO 생산을 보인 결과보다 우수함을 알 수가 있었다 [8].한편 RTPCR을 이용하여 염증 관련 사이토카인을 측정한 결과, OVE 처리군은 M. hyo 단독 처리군과 비교하여 확연한 농도-의존적 감소를 보였으며 이는 NO 생산 결과와 함께 OVE의 항염증 작용을 입증시 켜주었다.
- 그 결과를 Table 1에 나타내었다. 항균제인 TIA와 norfloxacinephytobiotics의 열수 추출물과 비교시 현 격한 항마이코플라즈마 효과를 보여주었다. 허브 추출물인 OVE는 다른 열수 추출물과는 다르게 ether 추출로 만들어진 정유로 3일째 보여준 항마이코플라즈마의 효과가 1.
- 항균제인 TIA와 norfloxacinephytobiotics의 열수 추출물과 비교시 현 격한 항마이코플라즈마 효과를 보여주었다. 허브 추출물인 OVE는 다른 열수 추출물과는 다르게 ether 추출로 만들어진 정유로 3일째 보여준 항마이코플라즈마의 효과가 1.4일 동안 꾸준하게 항균 활성을 보여주었다. 14일째 M.
후속연구
- OVE는 항마이코플라즈마 제재로 알려진 Pseudomonas spp. No. 57-250에서 생산되는 micacocidin의 마이코플라즈마에 대한 M1C 값인 0.06|ig/mL에 비해서 항마이코플라즈마 효과는 떨어지나, micacocidin의 생합성과 정이 복잡한 데 비해[9], OVE의 획득은 손쉬우며 위에서 언급하였던 항 T. cnizi 작용[18] 및 E. coli와 S. aureus 196E의 발육 억제 작용[14] 그리고 항염증 작용으로 수의 임상에서의 다양한 응용이 가능할 것으로 사료되었다.
- 위의 결과를 종합시 M. hyo 백신으로 마이코 플라즈마 폐렴을 관리하고 예방하기에는 한계가 있는 것으로 생각되며, 최근 새로운 예방 및 치료방법에 대한 연구가 진행되고 있다. 그 예로 in vitro에서 M.
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